The association between EPCR gene p.Ser219Gly polymorphism and venous thromboembolism risk: a case–control study, meta-analysis, and a reproducibility study

BackgroundThe rs867186 single-nucleotide polymorphism in the PROCR gene (g.6936A > G, c.4600A > G) results in a serine-to-glycine substitution at codon 219 of endothelial protein C receptor (EPCR). We performed a case–control study followed by an updated meta-analysis of the association between this polymorphism and the risk of venous thromboembolism (VTE).Objective and methodsWe enrolled 263 VTE patients and 320 unrelated healthy controls for the case–control study. The total number of cases and controls for the meta-analysis were 5,768 and 30,017, respectively. A new online MetaGenyo Statistical Analysis System software was used to perform the current meta-analysis. Furthermore, a reproducibility study was conducted to validate our results.ResultsAmong well-defined thrombosis risk factors, Factor V Leiden was more frequent in the VTE group (p < 0.001), while there was no difference in mutation frequency of prothrombin 20210G>A polymorphism between the two groups. There was no difference in the mutation frequency of Factor V Leiden and prothrombin 20210G>A between cases with and without provoking factors and cases with and without VTE recurrence. The rs867186 “G” carriership did not influence the risk of VTE [odds ratio (OR) 1.339; 95% confidence interval (CI): 0.904–1.984] in our study. No significant differences could be demonstrated among the rs867186 genotype frequencies between VTE cases with and without provoking factors (p = 0.430). PROCR rs867186 was associated with an OR of 1.72 (95% CI: 0.95–3.13, p = 0.075) in terms of VTE recurrence. In the meta-analysis, a significant association was found between EPCR Ser219Gly polymorphism and VTE under the dominant model (OR = 1.27, 95% CI: 1.11–1.46, p = 0.0006), the recessive model (OR = 1.60, 95% CI: 1.26–2.04, p = 0.0001), the GG vs. AA contrast model (OR = 1.64, 95% CI: 1.28–2.09, p = 0.0001), and the GA vs. AA contrast model (OR = 1.24, 95% CI: 1.08–1.43, p = 0.002).ConclusionThe rs867186 was not associated with the first VTE risk in our case–control study; however, a tendency to VTE recurrence was observed. Based on the results of our reproducibility study, MetaGenyo is acceptable for meta-analysis in case of genetic epidemiology studies. Although the risk conferred by the rs867186 is mild in all meta-analyses, including ours, identifying patients carrying the minor allele might have an impact on personalized VTE risk assessment, risk-score calculation, and patient management

Management and outcome of pregnancies in women with antithrombin deficiency: a single-center experience and review of literature

K

A Von Willebrand Faktor multimer- és konformáció függő aktivitása és a vascularis haematologia = The structure and conformation dependent activity of VWF and its implications on vascular haematology

A von Willebrand faktor (VWF) egy nagy molekulatömegű azonos alegységekből felépülő glikoprotein, mely alegységenként kollagén és thrombocyták számára szolgáló kötőhellyel is rendelkezik. A VWF és a thrombocyták jelen vannak a keringésben azonban összekapcsolódásuk csak akkor következik be, ha a VWF kapcsolatba lép a szubendotheliummal és/vagy nagy áramlási nyíróerők lépnek fel. 1. Vizsgáltuk a szabályozás hátterében feltételezhető konformációváltozást, ehhez a. tisztított VWF-ot, és thrombocytákat modellező GPIb-vel fedett polisztirol gyöngyöket hoztunk létre. Utóbbiakról igazoltuk, hogy aktív konformációjú GPIb található a felszínükön és képesek VWF kötésére. b. Fág technológiával kerestük a VWF konformáció függő, thrombocyta adhézióban szerepet játszó epitópjait. Három szelekciós kör után olyan peptid szekvenciát sikerült azonosítanunk, amely gátolja a VWF-kollagén kölcsönhatást. 2. A VWF adhezív funkciója függ az oligomerek méretétől, ezért a. a VWF polimerizáltságának mértékét leíró módszert hoztunk létre, amely továbbfejlesztett SDS-agaróz elektroforézist követő denzitometriás adatok általunk kifejlesztett számítógépes analízisén alapul b. A VWF kollagén kötő aktivitása ugyancsak függ a multimerek méretétől. Vizsgáltuk a különböző típusú humán kollagének (I és III) VWF kötő tulajdonságait. Az ezt mérő módszert alkalmassá tettük magas VWF antigén szint esetén is a mérésre. Folyamatban van módszereket nagy klinikai beteganyagon való alkalmazása. Közlemények száma: 11 | Von Willebrand factor (VWF) is one of the key proteins of platelet adhesion. The high molecular weight homooligomer, with a collagen and a platelet binding site in each subunit. It is circulating in the bloodstream together with platelets, however, the VWF-platelet reaction does not occur, unless VWF is attached to the subendothelial collagen and/or fluid shear forces are present. 1. We studied the hypothesized conformational changes responsible for the regulation a. We developed a method to purify VWF and created GPIb coated polystyrene beads to model platelets, and demonstrated that GPIb is immobilized in an active conformation and capable of binding VWF. b. We used phage technology to identify the conformation dependent platelet binding epitopes of VWF and a peptide sequence which is capable of inhibiting the VWF-collagen interaction found. 2. Adhesion activity of VWF is dependent on the size of oligomers, therefore: a. We developed a method to describe the extent of polymerization of VWF, which is based on our computational method applied to the densitometric curves of our improved SDS-agarose gelelectophoresis technique. b. The collagen binding of VWF is also dependent on the size of VWF oligomers. We evaluated the collagen binding properties of different human collagen types (I and III), and improved the present methods, to enable measurements in the high VWF antigen range. Application of the methods in clinical studies is going on. Number of publications: 1

Antithrombin Debrecen (p.Leu205Pro) - Clinical and molecular characterization of a novel mutation associated with severe thrombotic tendency

K

Ritka öröklött és szerzett haemorrhagiás diathesisek molekuláris elemzése, a rendellenességek strukturális és funkcionális következményei = Molecular evaluation of rare inherited and acquired bleeding diatheses, structural and functional consequences of the disorders

Ritka trombocita funkciós zavarok és koagulopátiák vizsgálata molekuláris genetikai és fehérje szinten. Az alábbiakban a projekt három legfontosabb eredményét soroljuk fel: 1/Két új mutációnak a felfedezése a trombocita glikoprotein (GP) IIb-ben, melyek II-es típusú Glanzmann thrombastheniát okoztak. A mutáns fehérjék transzfektált sejtekben történő analízise rávilágított: a) a "thigh" domén szerepére a GPIIIa-val való komplex képződésben, b) a "calf-2" domén fontoságára a fehérje érési folyamatában és intracelluláris vándorlásában. 2/ A factor X (FX) génjében bekövetkezett homozigóta c.730G>A/p.Gly204Arg mutáció következtében a FX antigén hiányát észleltük egy súlyos vérzékenységben szenvedő gyermekben. Az aminósav csere destabilizálta a FX két láncát összetartó diszulfid hidat. A mutáns fehérje eltérül a normális szekréciós úttól, megakad a transz Golgi-késő endoszóma szinten, s így nem szekretálódik. 3/ Egy SLE-ben szenvedő betegen életet veszélyeztető vérzés alakult ki. A beteg vizsgálata a szerzett faktor XIII (FXIII) deficiencia egy új, eddig nem leírt formájának a felismeréséhez vezetett. A beteg plazmájában FXIII aktivitás, FXIII komplex, FXIII A és B alegység antigén nem volt kimutatható, míg trombocitákban a FXIII aktivitás és FXIII-A antigén normál volt. A súlyos vérzést egy autoantitest okozta, mely a komplexben lévő és szabad FXIII-B-hez egyaránt kötődött és nagyon kifejezetten meggyorsította eliminációjukat a keringésből. | Rare platelet function disorders and coagulopathies were investigated at molecular genetic and/or protein level. Below the three most important results of the project are described: 1/ Investigation of a patient with type II Glanzmann thrombasthenia led to the discovery of two novel causative mutations in the platelet glycoprotein (GP) IIb gene. Analysis of the mutant proteins in transfected cells shed light a) on the role of thigh domain in the complex formation with GPIIIa, b) on the involvement of calf-2 domain in the maturation and intracellular trafficking of the protein. 2/ Due to a homozygous novel c.730G>A/p.Gly204Arg mutation in the factor X (FX) gene no FX antigen was found in the plasma of a child with severe bleeding diathesis. The amino acid replacement destabilized the disulfide bond that holds the two FX chains together. The mutant protein could not be secreted; it was diverted from the normal secretory pathway and retained at the trans Golgi-late endosome level. 3/ In an SLE patient with life threatening bleeding a new form of acquired factor XIII (FXIII) deficiency was discovered. The patient had undetectable FXIII activity, FXIII complex, FXIII A and B subunit antigen levels in the plasma, while in platelets FXIII activity and FXIII-A antigen level was normal. It was revealed that the patient developed an autoantibody that bound to FXIII-B both in complex and free form and highly accelerated their elimination from the circulation

Elevated plasma neutrophil elastase concentration is associated with disease activity in patients with thrombotic thrombocytopenic purpura.

INTRODUCTION: Genetic and autoimmune risk factors contribute to the development of thrombotic thrombocytopenic purpura (TTP) but triggers are needed to bring about acute disease. The aim of the study was to investigate the association of neutrophil activation with acute TTP, to assess whether neutrophil activation changes during plasma exchange therapy and to show if complement- and neutrophil activation are parallel, characteristic processes in acute TTP. MATERIALS AND METHODS: Altogether 49 EDTA-plasma samples of 21 TTP patients with acute disease and 17 in remission were investigated along with 20 healthy controls. A stable complex of PMNE-proteinase-inhibitor was measured by ELISA (Calbiochem, Merck-Millipore, Darmstadt, Germany). RESULTS: Acute disease was associated with significantly increased PMNE levels, the group medians were similarly low in TTP patients in remission and in healthy controls. Increased PMNE levels were characteristic for hematologically active and ADAMTS13 deficient form of TTP. PMNE concentration inversely correlated to disease activity markers platelet count (r=-0.349, p=0.032) and hemoglobin levels (p=-0.382 p=0.018). Achievement of remission was associated with significant reduction of plasma PMNE levels (p=0.031, Wilcoxon test). There was positive correlation between PMNE levels and complement activation markers C3a and Bb. CONCLUSIONS: We report increased PMNE levels in acute TTP and showed its association to activity markers of acute TTP and complement activation. Effective treatment of an acute TTP episode resulted in marked decrease in PMNE levels. Our data support and extend previous observations that neutrophil extracellular traps may be released in acute TTP and potentially contribute to the pathophysiology of this disease

Az antikoaguláns kezeléshez társuló menorrhagia thromboembolián átesett fiatal nőkben

A vénás thromboembolia a fiatal betegeket is gyakran érinti, és bizonyos esetekben tartós antikoaguláns kezelést indokol. Fiatal nőkben a véralvadásgátló terápia speciális kérdéseket vet fel. Ezek közül a leggyakoribb probléma az antikoaguláns terápia mellett fokozódó nőgyógyászati vérzés, mely sokszor jelentős mértékű és anaemiához vezethet. Valamennyi véralvadásgátló gyógyszer szedése okozhat menorrhagiát, amely a jelenleg rendelkezésre álló adatok szerint leggyakrabban az aktivált X-es faktort gátlók szedéséhez társul. Megoldása a nőgyógyász és hematológus együtt­mű­kö­dé­sét igényli