Diversidad y patogenicidad de especies de hongos entomopatógenos en insectos plaga de la yerba mate Ilex paraguayensis en la provincia de Misiones

Tesis presentada para optar al Grado de Doctor en Ciencias NaturalesFil: Schapovaloff, María Elena. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Naturales y Museo; Argentin

Diversidad y patogenicidad de especies de hongos entomopatógenos en insectos plaga de la yerba mate Ilex paraguariensis en la provincia de Misiones

Las especies de hongos entomopatógenos nativos presentan en general mayor especificidad para los hospedadores de los cuales fueron aislados originalmente y además se adaptan mejor a las condiciones ambientales del lugar de origen, que los hongos patógenos procedentes de hospedantes y lugares diferentes. El objetivo general de esta tesis es estudiar la diversidad y patogenicidad de hongos patógenos de insectos plaga de la yerba mate en la región del Noreste Argentino. Los objetivos específicos son: 1) Relevar, aislar e identificar los hongos entomopatógenos de insectos plaga en cultivos de yerba mate y suelos de importancia en la región del NEA (Misiones). 2) Estimar la patogenicidad de los hongos entomopatógenos aislados e identificados en condiciones controladas de laboratorio. 3) Preservar los cultivos fúngicos obtenidos en una colección de cultivos de referencia. 4) Caracterizar los hongos entomopatógenos mediante técnicas de biología molecularFacultad de Ciencias Naturales y Muse

Suscetibilidade de Gyropsylla spegazziniana (Lizer & Trelles) (Hemiptera: Psyllidae) a Beauveria bassiana (Bals.) Vuill

Gyropsylla spegazziniana is one of the most prominent pest insects of yerba mate culture in all production regions in Brazil, Argentina and Paraguay. Natural enemies have been recorded on G. spegazziniana nymphs and adults, including the Zoophthora radicans entomopathogenic fungus. Since there are no reports of Beauveria bassiana, the aim of this study was to register its pathogenicity with respect to this insect in a laboratory setting. Yerba mate branches were kept in glass flasks with water and we infested each leaf with 20 newly-emerged nymphs. We prepared three replicates per treatment. We sprayed conidia suspensions (1 × 109 conidia/mL) onto the branches, which we transferred to cages and kept in an acclimatized room (26 ± 1°C, 70 ± 10% of relative humidity (R.H.) with a photophase of 14 hours). We evaluated insect mortality daily, and after five days we observed a high level of pathogenicity due to the presence of the fungus, that could be visually observed on the cadaver. The total mortality varied from 25 to 70% (respectively for Unioeste 4 and CG 716) and the confirmed mortality was 30% for Unioeste 52, revealing the fungus’ potential. However, more studies are necessary in order to evaluate the strains of this fungus, as well as other species.Gyropsylla spegazziniana é uma das principais pragas da cultura de erva-mate em todas as regiões produtoras do Brasil, da Argentina e do Paraguai. Inimigos naturais têm sido registrados sobre ninfas e adultos de G. spegazziniana, incluindo o fungo entomopatogênico Zoophthora radicans. Como não há relatos sobre Beauveria bassiana, o objetivo deste estudo foi registrar sua patogenicidade sobre esse inseto em condições de laboratório. Ramos de erva-mate foram infestados com insetos e mantidos em frascos de vidro com água. Cada um dos ramos tinha cerca de 20 ninfas recém-emergidas/ folha, sendo preparadas 3 repetições/tratamento. As suspensões dos isolados do fungo (1 × 109 conídios/mL) foram pulverizadas sobre os ramos, que foram transferidos para gaiolas e mantidos em sala climatizada (26 ± 1°C, 70 ± 10% de Umidade Relativa (U.R.) e 14 horas de fotofase). Diariamente, realizou-se a avaliação da mortalidade do inseto, observando-se, após cinco dias da aplicação, alto nível de patogenicidade devido à presença do fungo, constatada visualmente sobre os cadáveres. A mortalidade total variou entre 25 e 70% (respectivamente para Unioeste 4 e CG 716) e a mortalidade confirmada foi de 30% para o isolado Unioeste 52, revelando o potencial do fungo. No entanto, mais estudos são necessários para avaliar novos isolados do fungo, bem como outras espécies.Fil: Alves, Luis Francisco. Universidade Estadual do Oeste do Paraná; BrasilFil: Formentini, Marina Andresa. Universidade Estadual do Oeste do Paraná; BrasilFil: Fanti, André Luis. Universidade Estadual do Oeste do Paraná; BrasilFil: Schapovaloff, María Elena. Universidad Nacional de La Plata; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Barzotto, Ionete. Universidade Estadual do Oeste do Paraná; Brasi

Bioassay technique and maintenance of gyropsylla spegazziniana (Lizer, 1719) (Hemiptera: Psylloidea: Aphalaridae) in vitro conditions

Gyropsylla spegazziniana is one of the most important pest of yerba mate by sap-sucking that lead to leaves deformation and there are no insecticides registered for its control. The present study describes a new technique to be used in bioassays with the insect. Galls were collected from infested yerba mate plants. In the laboratory, the galls were partially opened and distributed in plastic containers. The emerged adults were transferred to plastic containers with the perforated bottom and a central opening in the lid, and subjected to spraying. After that, insects were transferred to yerba mate seedlings in plastic cages and maintained in laboratory to daily assessment. The use of a lid with central opening prevented the insects escaping, and avoiding the previous anesthetic to spraying. The mortality was less than 10% after 10 days. The technique was considered adequate for maintenance and performance of laboratory bioassays.Fil: Loeblein, Jaqueline. Universidade Estadual Do Oeste Do Pará; BrasilFil: Alves, Luis Francisco. Universidade Estadual Do Oeste Do Pará; BrasilFil: Coracini, Miryan. Universidade Estadual Do Oeste Do Pará; BrasilFil: Schapovaloff, María Elena. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Misiones. Estación Experimental Agropecuaria Montecarlo; Argentin

Suscetibilidade de Gyropsylla spegazziniana (Lizer & Trelles) (Hemiptera: Psyllidae) a Beauveria bassiana (Bals.) Vuill

Gyropsylla spegazziniana is one of the most prominent pest insects of yerba mate culture in all production regions in Brazil, Argentina and Paraguay. Natural enemies have been recorded on G. spegazziniana nymphs and adults, including the Zoophthora radicans entomopathogenic fungus. Since there are no reports of Beauveria bassiana, the aim of this study was to register its pathogenicity with respect to this insect in a laboratory setting. Yerba mate branches were kept in glass flasks with water and we infested each leaf with 20 newly-emerged nymphs. We prepared three replicates per treatment. We sprayed conidia suspensions (1 × 109 conidia/mL) onto the branches, which we transferred to cages and kept in an acclimatized room (26 ± 1°C, 70 ± 10% of relative humidity (R.H.) with a photophase of 14 hours). We evaluated insect mortality daily, and after five days we observed a high level of pathogenicity due to the presence of the fungus, that could be visually observed on the cadaver. The total mortality varied from 25 to 70% (respectively for Unioeste 4 and CG 716) and the confirmed mortality was 30% for Unioeste 52, revealing the fungus’ potential. However, more studies are necessary in order to evaluate the strains of this fungus, as well as other species.Gyropsylla spegazziniana é uma das principais pragas da cultura de erva-mate em todas as regiões produtoras do Brasil, da Argentina e do Paraguai. Inimigos naturais têm sido registrados sobre ninfas e adultos de G. spegazziniana, incluindo o fungo entomopatogênico Zoophthora radicans. Como não há relatos sobre Beauveria bassiana, o objetivo deste estudo foi registrar sua patogenicidade sobre esse inseto em condições de laboratório. Ramos de erva-mate foram infestados com insetos e mantidos em frascos de vidro com água. Cada um dos ramos tinha cerca de 20 ninfas recém-emergidas/ folha, sendo preparadas 3 repetições/tratamento. As suspensões dos isolados do fungo (1 × 109 conídios/mL) foram pulverizadas sobre os ramos, que foram transferidos para gaiolas e mantidos em sala climatizada (26 ± 1°C, 70 ± 10% de Umidade Relativa (U.R.) e 14 horas de fotofase). Diariamente, realizou-se a avaliação da mortalidade do inseto, observando-se, após cinco dias da aplicação, alto nível de patogenicidade devido à presença do fungo, constatada visualmente sobre os cadáveres. A mortalidade total variou entre 25 e 70% (respectivamente para Unioeste 4 e CG 716) e a mortalidade confirmada foi de 30% para o isolado Unioeste 52, revelando o potencial do fungo. No entanto, mais estudos são necessários para avaliar novos isolados do fungo, bem como outras espécies.Facultad de Ciencias Naturales y Muse

Análisis microbiológico y fisicoquímico de la miel de yateí (tetragonisca angustula) para la evaluación de estándares de calidad y comercialización

Debido al interés en la producción y comercialización de la miel de yateí (Tetragonisca angustula) en la provincia de Misiones, Argentina, en este trabajo se evaluaron parámetros microbiológicos y fisicoquímicos con el fin de contribuir con la elaboración de normas para el control de calidad y promover su comercialización. Los resultados demostraron que los parámetros analizados en esta miel (n = 28) diferían significativamente de los valores aceptables establecidos para la miel de Apis mellífera. En comparación, se observó que los valores de pH (3,72) y de concentración de glucosa (19,01 g/100 g) y fructosa (23,74 g/100 g) eran más bajos, mientras que los valores de acidez (79,42 meq/kg) y humedad (24 %), al igual que el recuento de hongos y levaduras (HyL) (3,02 log UFC/g), eran más altos. La acidez mostró una correlación inversamente proporcional con el contenido de glucosa (R2 = 0,75) y fructosa (R2 = 0,68), y directamente proporcional con el recuento de HyL, aunque en este caso la correlación fue menor (R2 = 0,45). En lo que respecta a los parámetros microbiológicos, se observó 42,85 % de Clostridium sulfito-reductores y 39 % de Bacillus spp., y no se detectó presencia de C. botulinum ni de B. cereus. Enterococcus spp. y Staphylococcus spp. se encontraron en una proporción similar (ca. 7,14 %), mientras que Escherichia coli y Salmonella spp. no fueron detectados. Concluimos que las propiedades microbiológicas y fisicoquímicas de la miel de yateí difieren de las de la miel de A. mellifera, por lo cual sería oportuno establecer normas de calidad diferentes para facilitar su comercialización.Due to the interest in the production and trading of yateí (Tetragonisca angustula) honey in the province of Misiones, Argentina, in this work we assessed microbiological and physicochemical parameters in order to contribute to the elaboration of standards for quality control and promote commercialization. Results showed that yateí honey samples had significantly different microbiological and physicochemical characteristics in comparison to established quality standards for Apis mellifera honey. Thus, we observed that values for pH (3.72), glucose (19.01 g/100 g) and fructose (23.74 g/100 g) were lower than A. mellifera quality standards, while acidity (79.42 meq/kg), moisture (24%), and mould and yeast count (MY) (3.02 log CFU/g) were higher. The acid content was correlated with glucose (R2=0.75) and fructose (R2=0.68) content, and also with mould and yeast counts (R2=0.45) to a lesser extent. The incidence of microorganisms in yateí honey samples reached 42.85% and 39% for Clostridium sulfite-reducers and Bacillus spp., respectively. No C. botulinum or B. cereus cells were detected. Enterococcus spp. and Staphylococcus spp. incidence was similar (ca. 7.14%), whereas Escherichia coli and Salmonella spp. were not detected. We conclude that the microbiological and physicochemical properties of yateí honey are different from those of A. mellifera honey; hence, different quality standards could be implemented to promote its commercialization. Análisis microbiológico y fi sicoquímico de la miel de yateí (Tetragonisca angustula) para la evaluación de stándares de calidad y comercializaciónFil: Pucciarelli Roman, Amada Beatriz. Universidad Nacional de Misiones. Facultad de Ciencias Exactas, Químicas y Naturales; ArgentinaFil: Schapovaloff, María Elena. Universidad Nacional de Misiones. Facultad de Ciencias Exactas, Químicas y Naturales; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Kummritz, Silvana Janette. Universidad Nacional de Misiones. Facultad de Ciencias Exactas, Químicas y Naturales; ArgentinaFil: Señuk, Isabel A.. Universidad Nacional de Misiones. Facultad de Ciencias Exactas, Químicas y Naturales; ArgentinaFil: Brumovsky, Luis Alberto. Universidad Nacional de Misiones. Facultad de Ciencias Exactas, Químicas y Naturales; ArgentinaFil: Dallagnol, Andrea Micaela. Universidad Nacional de Misiones. Facultad de Ciencias Exactas, Químicas y Naturales; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

Susceptibility of adults of the cerambycid beetle Hedypathes betulinus to the entomopathogenic fungi Beauveria bassiana, Metarhizium anisopliae, and Purpureocillium lilacinum

The cerambycid beetle Hedypathes betulinus (Klug) (Coleoptera: Cerambycidae) causes severe damage to yerba mate plants (Ilex paraguariensis (St. Hilaire) (Aquifoliales: Aquifoliaceae)), which results in large losses of production. In this study, the pathogenicity of entomopathogenic fungi of the species Beauveria bassiana (Balsamo-Crivelli) Vuillemin (Hypocreales: Cordycipitaceae), Metarhizium anisopliae sensu lato (Metschnikoff) Sorokin (Hypocreales: Clavicipitaceae), and Purpureocillium lilacinum (Thom) Luangsa-ard, Hywel-Jones, Houbraken and Samson (Hypocreales: Ophiocordycipitaceae) on yerba mate were evaluated. Fifteen isolates of B. bassiana, two of M. anisopliae, and seven of P. lilacinum on H. betulinus adults were analyzed under laboratory conditions. The raw mortality rate caused by B. bassiana isolates varied from 51.1 to 86.3%, and their LT50 values varied between 8.7 and 13.6 d. The isolates of M. anisopliae caused 69.6-81.8% mortality, and their LT50 values varied between 7.4 and 7.9 d. In contrast, isolates of P. lilacinum were not pathogenic. M. anisopliae and B. bassiana isolates were pathogenic against H. betulinus adults, suggesting that they may be useful in biological control programs for insect pests of yerba mate.Centro de Estudios Parasitológicos y de Vectore

Natural ocurrence of entomopathogenic fungi in soils cultivated with Paraguay tea (<i>Ilex paraguariensis</i> St. Hil.) in Misiones, Argentina

Este trabajo tuvo por objetivo aislar, identificar y caracterizar morfológicamente hongos entomopatógenos presentes en suelos cultivados con yerba mate (Ilex paraguariensis St. Hil.). Se realizó una prospección de hongos entomopatógenos nativos a partir de 40 muestras de suelos cultivados con yerba mate ubicados en la provincia de Misiones, República Argentina, desde mayo de 2008 hasta junio de 2010. Las muestras de suelo se obtuvieron en cercanías de plantas de yerba mate, se aplicó la técnica de dilución seriada en medios de cultivos selectivos. Después de obtenidos los cultivos puros, los hongos fueron caracterizados macroscópica y microscópicamente, y se los identificó mediante el uso de claves taxonómicas específicas. Se aislaron 29 cepas fúngicas pertenecientes a las especies Beauveria bassiana (n = 17), Metarhizium anisopliae (n = 2) y Purpureocillium lilacinum (n = 10).This study aimed to morphologically isolate, identify and characterize entomopathogenic fungi present in soils cultivated with Paraguay tea (Ilex paraguariensis). A survey of native entomopathogenic fungi was conducted from 40 soil samples grown with Paraguay tea in the province of Misiones, Argentina, from May 2008 to June 2010. The soil dilution plate methodology on selective culture media was used to isolate microorganisms. Taxonomic identifi-cation was performed using macroscopic and microscopic characters and specific keys. Twentynine strains, belonging to the species Beauveria bassiana (n = 17), Metarhizium anisopliae(n = 2) and Purpureocillium lilacinum (n = 10) were isolated and identified.Facultad de Ciencias Naturales y Muse

Natural ocurrence of entomopathogenic fungi in soils cultivated with Paraguay tea (Ilex paraguariensis St. Hil.) in Misiones, Argentina

Este trabajo tuvo por objetivo aislar, identificar y caracterizar morfológicamente hongos entomopatógenos presentes en suelos cultivados con yerba mate (Ilex paraguariensis St. Hil.). Se realizó una prospección de hongos entomopatógenos nativos a partir de 40 muestras de suelos cultivados con yerba mate ubicados en la provincia de Misiones, República Argentina, desde mayo de 2008 hasta junio de 2010. Las muestras de suelo se obtuvieron en cercanías de plantas de yerba mate, se aplicó la técnica de dilución seriada en medios de cultivos selectivos. Después de obtenidos los cultivos puros, los hongos fueron caracterizados macroscópica y microscópicamente, y se los identificó mediante el uso de claves taxonómicas específicas. Se aislaron 29 cepas fúngicas pertenecientes a las especies Beauveria bassiana (n = 17), Metarhizium anisopliae (n = 2) y Purpureocillium lilacinum (n = 10).This study aimed to morphologically isolate, identify and characterize entomopathogenic fungi present in soils cultivated with Paraguay tea (Ilex paraguariensis). A survey of native entomopathogenic fungi was conducted from 40 soil samples grown with Paraguay tea in the province of Misiones, Argentina, from May 2008 to June 2010. The soil dilution plate methodology on selective culture media was used to isolate microorganisms. Taxonomic identification was performed using macroscopic and microscopic characters and specific keys. Twenty nine strains, belonging to the species Beauveria bassiana (n = 17), Metarhizium anisopliae (n = 2) and Purpureocillium lilacinum (n = 10) were isolated and identified.Fil: Schapovaloff, María Elena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Centro de Estudios Parasitológicos y de Vectores. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Naturales y Museo. Centro de Estudios Parasitológicos y de Vectores; ArgentinaFil: Angeli Alves, Luis F.. Universidade Estadual Do Oeste Do Pará; BrasilFil: Urrutia, María Inés. Universidad Nacional de La Plata. Centro Superior para el Procesamiento de la Información; ArgentinaFil: Lopez Lastra, Claudia Cristina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Centro de Estudios Parasitológicos y de Vectores. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Naturales y Museo. Centro de Estudios Parasitológicos y de Vectores; Argentin

Secuencias de Candidatus Liberibacter asiaticus de un fragmento de ADNr 16S

Secuencias de ADN de Candidatus Liberibacter asiaticus obtenidas a partir de muestras de origen vegetal y Diaphorina citri secuenciadas por el método de SangerFil: Badaracco, Alejandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Redes, Franco Jonathan. Estación Experimental Agropecuaria Montecarlo-inta;Fil: Bustamante, Karina Mariel. Universidad Nacional de Misiones. Facultad de Ciencias Forestales; ArgentinaFil: Bloch, Norma. Ministerio de Agricultura, Ganadería, Pesca y Alimento. Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria; ArgentinaFil: Schapovaloff, María Elena. Estación Experimental Agropecuaria Montecarlo-inta;Fil: Agostini, Juan Pedro. Universidad Nacional de Misiones. Facultad de Ciencias Forestales; Argentin