Estudio de las mucinas ancladas a membrana como diana farmacológica en la fibrosis pulmonar

Antecedentes: La fibrosis pulmonar idiopática (FPI) es una enfermedad pulmonar intersticial fibrosante y crónica de etiología desconocida e incurable englobada dentro de las enfermedades raras. Varias mucinas han demostrados estar implicadas en esta enfermedad, sin embargo, no hay evidencia hasta la fecha sobre el papel de la mucina anclada a membrana MUC4 en el desarrollo de FPI. Objetivo: Evaluar la sobreexpresión y localización de MUC4 en el tejido pulmonar de pacientes con FPI asi como caracterizar su posible implicación en la activación y transformaciones celulares que participan en la FPI (proliferación de fibroblastos, senescencia, transición epitelio mesénquima y transición fibroblasto mesénquima), así como los aspectos funcionales característicos como base preclínica y traslacional de futuros tratamientos. Métodos y resultados: la expresión de MUC4 aumentó en el tejido pulmonar de pacientes con FPI (n = 22) en comparación con el de los sujetos sanos (n = 21) y se localizó en arterias pulmonares, células epiteliales bronquiales basales, fibroblastos de la submucosa y células alveolares hiperplásicas de tipo II. TGF-B1 promovió las transformaciones mesenquimatosas / miofibroblásticas aumentando la expresión de colágeno tipo I, Snail, Slug y actina de músculo liso alfa, en células alveolares tipo II (A549) y fibroblastos de pulmón humano (MRC5), y disminuyó el marcador de células epiteliales E-cadherina en las células A549. La disminución de la expresión de MUC4 usando siRNA-MUC4 inhibió las transformaciones tanto de epitelio a mesénquima (TEM) con de fibroblasto a miofibroblasto /características de esta enfermedad de forma estadísticamente significativa,así como la senescencia celular y la proliferación de fibroblastos inducida por TGFB-1. La sobreexpresión de MUC4 en las células HEK293 transfectadas con un sistema de expresión génica de MUC4 inducible con doxiciclina, aumentó los efectos de TGFB-1 sobre las transformaciones mesenquimales / miofibroblastos y la senescencia celular. La sobreexpresión de MUC4 y el silenciamiento del gen siRNA-MUC4 aumentaron o disminuyeron respectivamente la fosforilación de TGFB-RI y SMAD3 contribuyendo a la activación del elemento de unión de smad a nivel del núcleo, que regula las respuestas transcripcionales que inducen los diferentes procesos implicados en la FPI. El análisis de inmunoprecipitación y la inmunofluorescencia cofocal mostraron la formación de un complejo proteico entre MUC4B / p-TGFB-RI y tambien con SMAD3 fosforilado en la membrana celular después de la estimulación con TGFB-1 y en el tejido pulmonar de pacientes con FPI. La fibrosis pulmonar inducida por bleomicina y la mortalidad secundaria se redujo en ratones transfectados transitoriamente con siRNA-MUC4. También se observó una menor afectación de la función pulmonar medida por pletismografía de cuerpo entero en los ratones transfectados transitoriamente con siRNA-MUC4 y una menor respuesta inflamatoria que en los ratones no silenciados y tratados con bleomicina. La administración de bleomicina en los ratones nativos produjo un aumento de la expresión génica del ARN de marcadores fibróticos reconocidos como colágeno tipo I, TGFB1, CRGF, IL-13, MUC5B y marcadores fibróticos oxidativos NOX4 y NRF-2, siendo esta elevación significativamente menor en los ratones con silenciamiento de MUC4. De la misma manera que el tejido pulmonar humano estudiamos la colocalización de MUC4 con TGFB-R1 fosforilado y SMAD3 fosforilado mediante microscopía cofocal. En los ratones control con fibrosis inducida por bleomicina observamos una distribución citoplasmática y cofocal de ambos complejos proteicos siendo este fenómeno prácticamente indetectable en los ratones con MU$ silenciado y en los ratones control no tratados con bleomicina. Conclusiones: la expresión de MUC4 aumenta en la FPI y promueve procesos fibróticos en colaboración con la vía canónica de TGFB-1 que podría ser un objetivo farmacológico atractivo para el tratamiento de la FPI humana

Comparison of home advantage in men’s and women’s Portuguese roller hockey league

The purpose of this study was to quantify the home advantage in both men’s and women’s Portuguese professional division roller hockey leagues comparing the results obtained according to the sex of participants. The sample was composed of 2,080 roller hockey games (n = 1,632 in First men’s division; and n = 448 in First women’s division) between the 2009-2010 and 2016-17 seasons. Goals scored and received were also analysed when teams play at home. The results showed the existence of home advantage in both men’s and women’s leagues. Home advantage values were higher than 50% in both leagues, with significantly higher values in the male league (60.88% compared to 54.33%). Moreover, the results indicated that teams score a higher percentage of goals when playing at home with non-significant differences between sexes. Regarding the number of goals scored per match, the results showed a significant difference between the male and female divisions, with higher values for men’s leagues. The results in relation to sex of participants are consistent with previous studies in other sports like football or water polo. The analysis of the home advantage could be useful to help roller hockey coaches to design alignments for each match and to plan the training loads according to match location.El propósito de este estudio fue cuantificar la ventaja de jugar en casa en las ligas de hockey sobre patines masculina y femenina de la Primera división profesional portuguesa, comparando los resultados obtenidos según el sexo de los participantes. La muestra estuvo compuesta por 2.080 partidos de hockey sobre patines (n = 1.632 en la Primera división masculina y n = 448 en la Primera división femenina) entre las temporadas 2009-2010 y 2016-17. Los goles marcados y recibidos también fueron analizados según la localización del partido. Los resultados mostraron la existencia de la ventaja de jugar en casa tanto en la liga masculina como femenina. Los valores de la ventaja de jugar en casa fueron superiores al 50% en ambas ligas, con valores significativamente más altos en la liga masculina (60,88% comparado con 54,33%). Además, los resultados indicaron que los equipos anotan un mayor porcentaje de goles cuando juegan en casa sin encontrar diferencias significativas entre los sexos. En cuanto al número de goles marcados por partido, los resultados mostraron una diferencia significativa entre ambas divisiones, con valores más altos para las ligas masculinas. Los resultados en relación con el sexo de los participantes están en consonancia con estudios previos realizados en otros deportes colectivos como fútbol o waterpolo. El análisis de la ventaja de jugar en casa podría ser útil para ayudar a los entrenadores de hockey sobre patines a decidir las alineaciones y a planificar las cargas de entrenamiento según la localización del partido.O propósito desse estudo foi quantificar a vantagem de jogar em casa nas ligas masculina e feminina de hóquei sobre patins da Primeira divisão profissional portuguesa, comparando os resultados obtidos dependendo do sexo dos participantes. A amostra foi composta por 2088 partidas de hóquei sobre patins (n= 1.632 na Primeira divisão masculina e n= 448 na Primeira divisão feminina) entre as temporadas 2009-2010 e 2016-17. Os goles marcados e recebidos também foram analisados conforme a localização do partido. Os resultados mostram a existência de vantagem de jogar em casa tanto na liga masculina como na feminina. Os valores da vantagem de jogar em casa são superiores ao 50% em ambas ligas, com valores significativamente maiores na liga masculina (60,88% comparado com os 54,33% da feminina). Por além disso, os resultados indicam que as equipas anotam uma maior percentagem de golos quando jogam em casa, sem encontrar diferenças significativas entre ambos sexos. Em quanto ao número de goles marcados por jogo, os resultados mostram uma diferença significativa entre as divisões masculina e feminina, com valores mais altos na liga masculina. Os resultados em relação ao sexo dos participantes estão em consonância com estudos prévios realizados noutros desportos coletivos como o futebol ou o pólo aquático. A análise da vantagem de jogar em casa poderia ser útil para ajudar aos técnicos de hóquei sobre patins no momento de decidir as alienações e de planificar as cargas dos treinamentos dependendo da localização do jogo

Molecular subtypes in early colorectal cancer associated with clinical features and patient prognosis

[EN] PurposeAfter surgical resection, an ample prognosis variability among stages is observed. Multiple prognostic factors are individually studied and some CRC classifiers have been proposed. Not one have been implemented into clinical practice.Methods/patientsWe classified 105 patients with resected CRC (stage I-III) into five molecular subtypes using BRAF(V600E) and RAS (KRAS; NRAS) status, and the expression of DNA mismatch repair (MMR) proteins (MLH1 and MSH2). Clinicopathological features and DFS) of distincts groups were evaluated.Results and conclusionsRAS and BRAF(V600E) mutations were detected in 43.8 and 11.4% of patients, respectively. 19% of tumours had lack of expression of any MMR proteins reflecting a system deficiency (dMMR). Patients with any RAS mutation had lower DFS that patients with RAS wild type (wt) (40.23 vs 45.26months; p value=0.035). Of a total of five molecular subtypes, three were MMR proficient (pMMR): RAS mutated (39%), BRAF(V600E) mutated (6.7%) and RAS/BRAF(V600E) wt (35.2%); and two were dMMR: BRAF(V600E) mutated (4.8%) and BRAF(V600E) wt (14.3%). Left side tumours were more frequently observed in pMMR/RAS and BRAF(V600E) wt subtype, and right side tumours in dMMR subtypes. Among the three pMMR subtypes, a benefit survival was observed for patients without any mutation in BRAF(v600E) or RAS oncogenes (median of DFS=45.5 vs 40.98months in RAS mutated group; p=0.084 and vs 34.13 in BRAF(v600E) mutated group; p=0.031). Molecular classification using these biomarkers can be useful to identify groups with differences in prognosis.Gil-Raga, M.; Jantus-Lewintre, E.; Gallach-Garcia, S.; Giner-Bosch, V.; Frangi-Caregnato, AF.; Safont-Aguilera, MJ.; Garde-Noguera, J.... (2018). Molecular subtypes in early colorectal cancer associated with clinical features and patient prognosis. Clinical & Translational Oncology. 20(11):1422-1429. https://doi.org/10.1007/s12094-018-1874-8S142214292011Ferlay J, Soerjomataram I, Ervik M, Dikshit R, Eser S, Mathers C, et al. GLOBOCAN 2012 v1.0, Cancer Incidence and Mortality Worldwide: IARC CancerBase. No. 11 [Internet], vol. 11. Lyon: International Agency for Research on Cancer. 2013. p. http://globocan.iarc.fr .Markowitz SD, Bertagnolli MM. Molecular basis of colorectal cancer. N Engl J Med. 2009;362(13):1246 (author reply 1246–1247).Lindor NM, Burgart LJ, Leontovich O, Goldberg RM, Cunningham JM, Sargent DJ, et al. Immunohistochemistry versus microsatellite instability testing in phenotyping colorectal tumors. J Clin Oncol. 2002;20(4):1043–8.Rodríguez-Moranta F, Castells A, Andreu M, Piñol V, Castellvi-Bel S, Alenda C, et al. Clinical performance of original and revised Bethesda guidelines for the identification of MSH2/MLH1 gene carriers in patients with newly diagnosed colorectal cancer: proposal of a new and simpler set of recommendations. Am J Gastroenterol. 2006;101(5):1104–11.Lanza G, Gafà R, Santini A, Maestri I, Guerzoni L, Cavazzini L. Immunohistochemical test for MLH1 and MSH2 expression predicts clinical outcome in stage II and III colorectal cancer patients. J Clin Oncol. 2006;24(15):2359–67.Sargent DJ, Marsoni S, Monges G, Thibodeau SN, Labianca R, Hamilton SR, et al. Defective mismatch repair as a predictive marker for lack of efficacy of fluorouracil-based adjuvant therapy in colon cancer. J Clin Oncol. 2010;28(20):3219–26.Bos JL, Fearon ER, Hamilton SR, Verlaan-de Vries M, van Boom JH, van der Eb AJ, et al. Prevalence of ras gene mutations in human colorectal cancers. Nature. 1987;327(6120):293–7.Davies H, Bignell GR, Cox C, Stephens P, Edkins S, Clegg S, et al. Mutations of the BRAF gene in human cancer. Nature [Internet]. 2002;417(6892):949–54.Benvenuti S, Sartore-Bianchi A, Di Nicolantonio F, Zanon C, Moroni M, Veronese S, et al. Oncogenic activation of the RAS/RAF signaling pathway impairs the response of metastatic colorectal cancers to anti-epidermal growth factor receptor antibody therapies. Cancer Res. 2007;67(6):2643–8.Seppälä TT, Böhm JP, Friman M, Lahtinen L, Väyrynen VMJ, Liipo TKE, et al. Combination of microsatellite instability and BRAF mutation status for subtyping colorectal cancer. Br J Cancer [Internet]. 2015;112(12):1966–75.Birgisson H, Edlund K, Wallin U, Påhlman L, Kultima H, Mayrhofer M, et al. Microsatellite instability and mutations in BRAF and KRAS are significant predictors of disseminated disease in colon cancer. BMC Cancer [Internet]. 2015;15(1):125.Sinicrope FA, Shi Q, Smyrk TC, Thibodeau SN, Dienstmann R, Guinney J, et al. Molecular markers identify subtypes of stage III colon cancer associated with patient outcomes. Gastroenterology [Internet]. 2015;148(1):88–99.Osumi H, Shinozaki E, Suenaga M, Matsusaka S, Konishi T, Akiyoshi T, et al. RAS mutation is a prognostic biomarker in colorectal cancer patients with metastasectomy. Int J Cancer. 2016;139(4):803–11.Edge T. AJCC Cancer Staging Handbook. From the AJCC cancer staging manual. 7th ed. In: Edge SB, Byrd DR, Compton CC, Fritz AG, Greene FL TA, editor. New York: Springer; 2010.Jass JR. Classification of colorectal cancer based on correlation of clinical, morphological and molecular features. Histopathology. 2007;50:113–30.Leggett B, Whitehall V. Role of the serrated pathway in colorectal cancer pathogenesis. Gastroenterology. 2010;138:2088–100.Douillard J-Y, Oliner KS, Siena S, Tabernero J, Burkes R, Barugel M, et al. Panitumumab-FOLFOX4 treatment and RAS mutations in colorectal cancer. N Engl J Med [Internet]. 2013;369(11):1023–34.Sorich MJ, Wiese MD, Rowland A, Kichenadasse G, McKinnon RA, Karapetis CS. Extended RAS mutations and anti-EGFR monoclonal antibody survival benefit in metastatic colorectal cancer: a meta-analysis of randomized, controlled trials. Ann Oncol [Internet]. 2015;26(1):13–21.Hassabo HM, Sahin IH, Kazmi SMA, Al Mutar SS, Gomes DBD, Pini TM, et al. Associations between patient (pt) colorectal cancer (CRC) tumor KRAS and BRAF mutation (mut) status and overall survival (OS). J Clin Oncol. 2014;32(3_suppl):473.Alberts SR, Sargent DJ, Smyrk TC, Shields AF, Chan E, Goldberg RM, et al. Adjuvant mFOLFOX6 with or without cetuximab (Cmab) in KRAS wild-type (WT) patients (pts) with resected stage III colon cancer (CC):results from NCCTG Intergroup phase III Trial N0147. J Clin Oncol. 2010;28(18s).Lee D-W, Kim KJ, Han S-W, Lee HJ, Rhee YY, Bae JM, et al. KRAS Mutation is associated with worse prognosis in stage III or high-risk stage II colon cancer patients treated with adjuvant FOLFOX. Ann Surg Oncol [Internet]. 2014;187–94.Kadowaki S, Kakuta M, Takahashi S, Takahashi A, Arai Y, Nishimura Y, et al. Prognostic value of KRAS and BRAF mutations in curatively resected colorectal cancer. World J Gastroenterol. 2015;21(4):1275–83.Venderbosch S, Nagtegaal ID, Maughan TS, Smith CG, Cheadle JP, Fisher D, et al. Mismatch repair status and BRAF mutation status in metastatic colorectal cancer patients: a pooled analysis of the CAIRO, CAIRO2, COIN, and FOCUS studies. Clin Cancer Res. 2014;20:5322–30.Van Cutsem E, Köhne C-H, Láng I, Folprecht G, Nowacki MP, Cascinu S, et al. Cetuximab plus irinotecan, fluorouracil, and leucovorin as first-line treatment for metastatic colorectal cancer: updated analysis of overall survival according to tumor KRAS and BRAF mutation status. J Clin Oncol. 2011;29(15):2011–9.Chen KH, Lin YL, Liau JY, Tsai JH, Tseng LH, Lin LI, et al. BRAF mutation may have different prognostic implications in early- and late-stage colorectal cancer. Med Oncol. 2016;33(5).Kakar S, Aksoy S, Burgart LJ, Smyrk TC. Mucinous carcinoma of the colon: correlation of loss of mismatch repair enzymes with clinicopathologic features and survival. Mod Pathol. 2004;17(6):696–700.Popat S, Hubner R, Houlston RS. Systematic review of microsatellite instability and colorectal cancer prognosis. J Clin Oncol. 2005;23(3):609–18.De Sousa E, Melo F, Wang X, Jansen M, Fessler E, Trinh A, de Rooij LPMH, et al. Poor-prognosis colon cancer is defined by a molecularly distinct subtype and develops from serrated precursor lesions. Nat Med [Internet]. 2013;19(5):614–8.Sadanandam A, Lyssiotis CA, Homicsko K, Collisson EA, Gibb WJ, Wullschleger S, et al. A colorectal cancer classification system that associates cellular phenotype and responses to therapy. Nat Med [Internet]. 2013;19(5):619–25.Guinney J, Dienstmann R, Wang X, de Reyniès A, Schlicker A, Soneson C, et al. The consensus molecular subtypes of colorectal cancer. Nat Med. 2015;21(11):1350–6.Stintzing S, Wirapati P, Lenz H-J, Neureiter D, von Weikersthal LF, Decker T. Consensus molecular subgroups (CMS) of colorectal cancer (CRC) and first-line efficacy of FOLFIRI plus cetuximab or bevacizumab in the FIRE3 (AIO KRK-0306) trial. J Clin Oncol. 2017; 35(15)_suppl:3510.Le DT, Uram JN, Wang H, Bartlett BR, Kemberling H, Eyring AD, et al. PD-1 blockade in tumors with mismatch-repair deficiency. N Engl J Med. 2015;372:2509–20.Le DT, Durham JN, Smith KN, Wang Hao, Bartlett Bjarne R, Aulakh Laveet K, et al. Mismatch-repair deficiency predicts response of solid tumors to PD-1 blockade. Science. 2017;357(6349):409–13.Overman MJ, Lonardi S, Wong KYM, Lenz H-J, Gelsomino F, Aglietta M, et al. Durable clinical benefit with nivolumab plus ipilimumab in DNA mismatch repair—deficient/microsatellite instability-high metastatic colorectal cancer. J Clin Oncol. 2018;36(8):773–9