Toxicidade do extrato vegetal, óleo essencial e hidrolato das plantas Zingiber officinale Roscoe e Allium sativum L. / Toxicity of plant extract, essential oil and hydrolate of Zingiber officinale Roscoe and Allium sativum L. Plants

O uso de plantas para fins terapêuticos ocorre desde os tempos remotos e configura um legado importante para o âmbito da ciência. As propriedades ativas nas plantas são seguras e eficientes, quando utilizadas devidamente. A utilização fitoterápica do rizoma de Zingiber officinale Roscoe e do bulbo do Allium sativum L. vem sendo estudada nas formas de extrato vegetal e óleo essencial, principalmente como produto antimicrobiano. Para compreender suas propriedades é necessário averiguar a toxicidade desses produtos naturais. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar a toxicidade do rizoma e do bulbo das plantas em referência através de ensaio de letalidade com o microcrustáceo Artemia salina e da atividade hemolítica em sangue ovino. O material vegetal nas concentrações finais de 0, 100, 300, 600, 1000 e 2000 µg/mL foi colocado em placas de microdiluição com 10 náuplios em cada poço, incubados por 24 e 48 h. Decorrido esse período de contato os sobreviventes foram contados. Para o ensaio de hemólise, o sangue ovino foi acrescido das concentrações de 500, 250, 100, 50, 25 e 10 μg/mL do material vegetal. A toxicidade do Z. officinale Roscoe foi maior que o A. sativum L. nos dois ensaios, observando que o extrato vegetal de ambas as plantas possui maior toxicidade que o óleo essencial e o hidrolato, respectivamente. Os testes toxicológicos pré-clínicos são importantes para avaliar as possíveis consequências que uma substância pode causar e permitem uma construção cientifica para subsequente escalonamento em seres humanos

COMPOSIÇÃO DO LEITE DE CABRAS SAANEN INFECTADAS EXPERIMENTALMENTE COM Staphylococcus aureus E SUBMETIDAS A DOIS PROTOCOLOS DE TRATAMENTO

Neste estudo, objetivou-se avaliar a composição química do leite após a infecção e tratamento da mastite induzida por S. Aureus. Foram utilizadas 10 fêmeas caprinas da raça Saanen. Fez-se a infecção experimental em 20 glândulas mamárias, formando-se quatro grupos experimentais, sendo cada um composto por cinco glândulas mamárias. Um grupo foi tratado com antimicrobiano comercial e outro com pomada à base de extrato natural de planta. Os demais grupos foram constituídos controles. Os valores obtidos para gordura, lactose, proteína, sólidos totais e produção leiteira foram analisados ao longo dos momentos experimentais, comparando-os entre si e entre os grupos experimentais. A mastite foi diagnosticada 24 horas pós inoculação, utilizando-se a lactocultura. Os animais não apresentaram alterações nos parâmetros clínicos avaliados. Para os percentuais de gordura, proteína e sólidos totais, observou-se uma elevação ao longo dos momentos experimentais, sem variação entre os grupos experimentais. Tendo em vista a importância da terapia antimicrobiana convencional e a crescente utilização de antimicrobianos naturais, os resultados obtidos mostram igualdade entre as duas opções terapêuticas, principalmente no aspecto de manutenção dos principais componentes do leite. Palavras-chave: cabras; composição do leite; terapia; mastite

Comparative Proteomic Analyses Between Biofilm-Forming and Non-biofilm-Forming Strains of Corynebacterium pseudotuberculosis Isolated From Goats

Caseous lymphadenitis (CLA) is a chronic disease that affects small ruminants and causes economic losses in the associated breeding system. The causative agent of CLA is Corynebacterium pseudotuberculosis, a Gram-positive bacterium that exhibits tropism for external and internal lymph nodes and induces abscess formation in the host. Bacterial communities often produce a biofilm matrix that serves various functions, including protection against hostile environmental conditions, antibiotics, and the host immune response. Although biofilm formation has been reported for C. pseudotuberculosis, not all strains demonstrate this property in culture. In this work, we report the first comparative proteomic analysis of one biofilm-forming (CAPJ4) and one biofilm-non-forming strain (CAP3W) of C. pseudotuberculosis isolated from goats. Bacterial whole cell protein extracts were obtained for mass spectrometry analyses. Using LC-MS/MS, our studies reveal three and four proteins exclusively found in the CAPJ4 and CAP3W proteome, respectively. In addition, label-free quantitative analysis identified 40 proteins showing at-least 2-fold higher values in CAPJ4 compared CAP3W proteome Notably, CAPJ4 differentially synthesized the penicillin-binding protein, which participates in the formation of peptidoglycans. CAPJ4 also exhibited upregulation of N-acetylmuramoyl-L-alanine amidase and galactose-1-phosphate uridylyltransferase, which are involved in biofilm formation and exopolysaccharide biosynthesis. Here, we demonstrate that biofilm formation in C. pseudotuberculosis is likely associated with specific proteins, some of which were previously shown to be associated with virulence and biofilm formation in other organisms. Our findings may drive studies related to the bacterial mechanisms involved in the biofilm formation, in addition to providing targets for the treatment of CLA.Fil: Sá, Maria Conceição Aquino de. Universidade Federal da Bahia; BrasilFil: Marques Da Silva, Wanderson. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Rodrigues, Carla Catarine Santos. Universidade Federal da Bahia; BrasilFil: Rezende, Cristiana Perdigão. Universidade Federal de Minas Gerais; BrasilFil: Marchioro, Silvana Beutinger. Universidade Federal da Bahia; BrasilFil: Rocha Filho, José Tadeu Raynal. Universidade Federal da Bahia; BrasilFil: Sousa, Thiago de Jesus. Universidade Federal de Minas Gerais; BrasilFil: Oliveira, Helinando Pequeno de. Universidade Federal do Vale do Sao Francisco; BrasilFil: Costa, Mateus Matiuzzi da. Universidade Federal do Vale do Sao Francisco; BrasilFil: Figueiredo, Henrique César Pereira. Universidade Federal de Minas Gerais; BrasilFil: Portela, Ricardo Dias. Universidade Federal da Bahia; BrasilFil: Castro, Thiago Luiz de Paula. Universidade Federal da Bahia; BrasilFil: Azevedo, Vasco. Universidade Federal de Minas Gerais; BrasilFil: Seyffert, Nubia. Universidade Federal da Bahia; BrasilFil: Meyer, Roberto. Universidade Federal da Bahia; Brasi

Corynebacterium pseudotuberculosis: aspectos moleculares de cepas produtoras e não produtoras de biofilme e da resposta imune por elas induzida numa infecção experimental em caprinos

A procura por produtos da caprino-ovinocultura é frequente e contribui para aumentar a economia mundial, por isso é necessário produzir em larga escala e com qualidade para atender à demanda da população. Entretanto, diversos fatores na criação desses animais ainda necessitam melhorar, principalmente na área sanitária, na qual muitas doenças acometem o rebanho, dentre elas, a Linfadenite Caseosa, doença causada por Corynebacterium pseudotuberculosis, uma bactéria que apresenta sua toxicidade através de genes de virulência, assim como pela produção de biofilme, que protege a bactéria de ambientes hostis. Dessa forma, estudos sobre esse patógeno são necessários, a exemplo do sequenciamento genômico, na busca de conhecer genes para análises de biomoléculas e com isso compreender melhor a sua antigenicidade e imunogenicidade com o objetivo de melhorar a especificidade e sensibilidade de testes sorológicos, utilizados como prevenção da doença no rebanho. Além disso, é essencial entender o mecanismo de patogenicidade desta bactéria no hospedeiro e suas formas de defesa no sistema imunológico do animal. Assim, no presente estudo, foram caracterizados os genomas de quatro cepas de C. pseudotuberculosis, comparando as cepas produtoras (OVI2C, CAPJ4) e não produtoras (OVI03, CAP3W) de biofilme. As cepas foram extraídas para produção de antígenos somáticos e de superfícies. A partir de estudos prévios com immunoblotting, foram escolhidas as cepas de origem caprina (CAPJ4 e CAP3W) para o estudo in vivo com dezoito caprinos da raça Canindé, divididos em três grupos experimentais, um grupo controle e dois grupos infectados com cepas de C. pseudotuberculosis, para avaliar a patogenia clinicamente, realizando hemograma, além de outras análises sorológicas através do ensaio de ELISA e Western Blotting. Também foi realizada a cultura de células sanguíneas para o estudo da imunidade celular com IFN- e cultivo de células mononucleares do sangue periférico para observar a modulação da expressão de proteínas do sistema GTPases, Rab 5 e Rab 7. Após esses estudos, observou-se que os genes contidos no genoma das cepas de C. pseudotuberculosis possuem similaridade, mostrando que eles são altamente conservados. A extração das bactérias resultou em antígenos de superfície F3, que apresentaram reatividade no immunoblotting frente aos soros de ovinos experimentalmente infectados. De todos os antígenos, os de origem caprina, apresentaram melhor antigenicidade. No experimento in vivo, após a infecção dos animais, foram realizadas outras colheitas de sangue e foi possível observar que a cepa produtora de biofilme é mais resistente, causando danos maiores aos animais. Para as condições de infecção experimental, os valores do hemograma estão dentro dos parâmetros. Na análise sorológica os caprinos infectados experimentalmente responderam à exposição primária, o que contribui para o aumento da imunoglobulina IgG. A produção de IFN- também foi observada. Foi verificado que as cepas de C. pseudotuberculosis produtora e não produtora de biofilme podem alterar a expressão de proteínas Rab 5 e Rab 7 em macrófagos derivados de células mononucleares do sangue periférico cultivados in vitro. Esses resultados forneceram informações importantes para a produção de testes diagnósticos, com maior acurácia.The consumption of sheep and goat products is frequent and increases the values of world economy, so it is necessary to produce large scale and quality to meet the demand of population. However, several factors in the breeding of these animals still have to improve, especially in sanitary area, where many diseases affect the cattle, among them, Caseous Lymphadenitis, caused by Corynebacterium pseudotuberculosis, a bacterium that presents its toxicity through virulence genes, also by production of biofilm that protects the bacteria from hostile environments. Thus, studies of this pathogen are necessary, such as genomic sequencing, in search to know antigenic genes for biomolecule analysis and with this to understand better its antigenicity and immunogenicity, to be possible improve the specificity and sensitivity of serological tests, that are used as prevention of disease in the herd. Besides, it is essential to understand the mechanism of pathogenicity of this bacterium in host and its forms of defense against the animals immune system. At the present study, the genomes of four strains of C. pseudotuberculosis were characterized, comparing the biofilm producing (OVI2C, CAPJ4) and non-producing (OVI03, CAP3W) strains. These strains were extracted for production of somatic and surfaces antigens. From previous studies with immunoblottingting, strains of goat origin (CAPJ4 and CAP3W) were chosen for in vivo study with 18 Canindé goats, divided into three experimental groups, one control group and two groups infected with strains of C. pseudotuberculosis, to evaluate clinically the pathogenesis and through hemogram, in addition to other serological tests as ELISA assay and Western Blotting. Also was performed blood cell culture for the study of cellular immunity with IFN-, as culture of peripheral blood mononuclear cells to observe the modulation of expression of GTPases, Rab 5 and Rab 7 system proteins. After these studies, it was observed that the genes contained in the genome of the strains of C. pseudotuberculosis are genetically homogeneous, showing that they are highly conserved. The extraction of bacteria resulted in F3 surface antigens, that showed reactivity in immunoblottingting against sera from experimentally infected sheep. Of all antigens, those of goat origin had better antigenicity. At the in vivo experiment, after the infection of animals, other blood samples were collected and it was possible to observe that the biofilm producing strain is more resistant, causing greater damages to animals. For the conditions of experimental infection, blood count values are between normal limits. In the serological analysis, the experimentally infected goats responded to primary exposure, which contributes to increase of immunoglobulin IgG. The production of IFN- was also observed. In conclusion, it was observed that strains of C. pseudotuberculosis producing and not producing biofilm can modify the expression of Rab proteins in macrophages derived from mononuclear cells of peripheral blood cultivated in vitro. These results provided important information for production of diagnostic tests, with greater accuracy.FUNDACAO DE AMPARO A PESQUISA DO ESTADO DA BAHIA - EDITAL 013/2014 Programa De Bolsas De Mestrado e Doutorad

Linfadenite caseosa em caprinos e ovinos: Revisão

A linfadenite caseosa é uma enfermidade que acomete os caprinos e ovinos causando prejuízos econômicos. É uma doença infectocontagiosa de ocorrência mundial, principalmente nos países em desenvolvimento, com ocorrência em todo rebanho brasileiro, especialmente nos Estados do Nordeste, notadamente na Bahia e em Pernambuco. Apesar de ter uma alta prevalência, a prevenção, o diagnóstico e o tratamento são negligenciados, aumentando os riscos de contaminação entre os rebanhos e consequentemente a diminuição da produtividade destes animais e a qualidade do produto ao consumidor. Alguns métodos de prevenção estão sendo desenvolvidos, utilizando bactérias mortas, vivas ou inativadas, podendo usar ou não a tecnologia do DNA recombinante. A virulência de Corynebacterium pseudotuberculosis, está associada com os lipídeos da parede celular e a fosfolipase D, bem como a produção de biofilmes. A produção desses genes de virulência aumenta a sobrevivência e a multiplicação do patógeno. O objetivo do estudo foi abordar nessa revisão os impactos econômicos provocados pela Linfadenite Caseosa, epidemiologia, patogenia e fatores de virulência, bem como sinalizar informações sobre diferentes aspectos entre cepas de C. pseudotuberculosis produtoras e não produtoras de biofilme, buscando fornecer subsídios que possam contribuir para o aprimoramento de vacinas e diagnóstico desta enfermidade dos pequenos ruminantes

ANTI-Lentivirus, Brucella abortus AND B. ovis ANTIBODIES IN SMALL RUMINANTS RAISED IN PERNAMBUCO AND BAHIA

Goat and sheep production in the semi-arid northeast of Brazil has shown great economic potential. However, health problems can compromise the productivity of these animals. Given the scarcity of studies about the occurrence of these diseases, the aim of the present study was to analyze the serological diagnosis of anti-Brucella and anti-lentivirus antibodies among small ruminants in municipalities located in the Brazilian states of Bahia and Pernambuco. The samples were collected from local slaughterhouses and dairy farms. In total, 997 serum samples from animals in slaughterhouses and dairy herds were collected. In order to diagnose the caprine arthritis encephalitis virus (CAEV), the samples underwent agarose gel immunodiffusion (AGID) testing. The buffered acidified antigen test (goats) and agarose gel immunodiffusion test (sheep) were used to detect anti-Brucella abortus and B. ovis antibodies following the methodology recommended by the Institute of Technology of Paraná (TECPAR). With anti-CAEV antibodies, seropositivity rates of 4.1% and 2.2% were recorded for animals from the slaughterhouses and dairy farms, respectively. None of the animals (goats or sheep) were positive for anti-B. abortus antibodies. With B. ovis, a seropositivity rate of 6.5% (n = 13) was recorded among the 199 sheep serum samples. Results of the present study confirmed the presence of the CAE virus in the meat and dairy herds studied, although the prevalence was low. Natural infection by B. abortus did not occur in the goat and sheep herds assessed. Seropositivity for B. ovis was confirmed, although prevalence was low. Direct tests are required to diagnose ovine brucellosis

MILK COMPOSITION OF SAANEN GOATS EXPERIMENTALLY INFECTED BY Staphylococcus aureus AND SUBJECTED TO TWO TREATMENT PROTOCOLS

This study aimed to evaluate the chemical composition of milk after infection and treatment of mastitis caused by Staphylococcus aureus. Ten Saanen goats were used. Experimental infection was performed in 20 mammary glands, forming four groups, each consisting of five mammary glands. One group was treated with commercial antimicrobial and another with natural plant extract-based ointment. The other groups were constituted as control. The values obtained for fat, lactose, protein, total solids, and milk production were analyzed through the experimental moments, comparing them among each other and between experimental groups. Mastitis was diagnosed by milk microbiology after 24 hours of inoculation. The animals showed no changes in the clinical parameters evaluated. For the percentage of fat, protein, and total solids, there was an increase over the experimental moments. However, there was variation among the experimental groups. Given the importance of conventional antimicrobial therapy and the increased use of natural antimicrobials, obtained results showed equality between the two treatment options, especially regarding the maintenance of the main milk components. Keywords: goat; milk composition; therapy; mastitis

Distribution of PLD and FagA, B, C and D genes in Corynebacterium pseudotuberculosis isolates from sheep and goats with caseus lymphadenitis

Caseous lymphadenits (CL) is a chronic and subclinical disease that affects goats and sheep and, consequently, causes economic losses, especially to small producers. The purpose of this study, through use of Polymerase Chain Reaction (PCR), was to verify the presence of virulence genes of phospholipase D (PLD), integral membrane protein (FagA), iron enterobactin transporter (FagB), ATP binding cytoplasmic membrane protein (FagC) and iron siderophore binding protein (FagD) in 168 isolates of C. pseudotuberculosis obtained from cases of caseous lymphadenitis in goats and sheep. FagA, FagB and PLD genes were detected in all 145 strains isolated from abscesses in superficial lymph nodes and in 23 strains isolated from viscera. The FagC gene was positive in 167 (99.40%) isolates. The FagD gene was detected in 160 (95.23%) isolates. All virulence factors analyzed were found more frequently among isolates collected in the viscera of animals with CL, indicating a multifactorial nature, as well as variations, in the invasive potential of C. pseudotuberculosis strains