24 research outputs found

    Développement de méthodes de quantification en milieu complexe par chromatographie liquide microfluidique couplée à la spectrometrie de masse

    Full text link
    L’hepcidine est un biomarqueur peptidique dont l’intérêt tant comme outil de diagnostic que de suivi de pathologies est de plus en plus solidement établi. Il existe donc une demande forte d’outils sensibles et robustes afin de la doser au sein de milieux biologiques tels que le plasma ou le sérum. Une méthode analytique a été développée à l’aide d’un système chromatographique miniaturisé (nanoLC-chip) couplé à un spectromètre de masse permettant d’assurer un dosage de l’hepcidine à la fois sensible et fiable. Lors du développement de cette méthode, il a été constaté que la composition de l’échantillon avait une influence majeure sur la réponse analytique. Or, l’utilisation de systèmes chromatographiques miniaturisés implique souvent l’injection de volumes proportionnellement très importants par rapport aux dimensions du système, ce qui amplifie encore l’impact de sa composition. C’est pourquoi il est capital d’avoir une bonne compréhension des phénomènes qui ont lieu entre l’injection de l’échantillon dans le système chromatographique et la détection par spectrométrie de masse, et particulièrement lors du développement de méthodes analytiques quantitatives. Dans cette étude, nous avons utilisé la planification expérimentale afin de mieux comprendre le comportement chromatographique des peptides, ainsi que les facteurs qui influencent la sensibilité de la méthode développée. Un mélange de peptides a été sélectionné, varié tant du point de vue du poids moléculaire que du point isoélectrique et de l’hydropathie. Un plan de criblage a permis de délimiter le domaine expérimental ainsi que les facteurs significatifs parmi la composition de la phase mobile (proportion et nature de l’agent de paire d’ions) et de l’échantillon en lui-même (nature de l’agent de paire d’ions et proportion de solvant organique). Ensuite, un plan d’expériences factoriel complet a été mis en œuvre afin d’observer plus finement le rôle de chaque facteur ainsi que les interactions éventuelles qui les lient. Certains facteurs ont montré un effet très marqué tant sur l’intensité de la réponse que sur la rétention. Entre autres, la composition de l’échantillon, facteur parfois négligé lors du développement de méthodes, a démontré son importance capitale, en particulier sur les phénomènes de rétention des peptides. Les données obtenues ont également permis de dégager des conditions optimales d’analyse en termes de rétention et de sensibilité. Enfin, une analyse en composantes principales a également été réalisée sur le grand nombre de données récoltées dans le but de mettre en évidence d’éventuels propriétés physicochimiques des peptides qui pourraient avoir un impact significatif sur les réponses étudiées

    Transfer of radiocarbon liquid releases from the AREVA La Hague spent fuel reprocessing plant in the English Channel

    No full text
    International audienceThe recent risk assessment by the North-Cotentin Radioecology Group (http://www.irsn.org/nord-cotentin/, 1999) outlined that 14 C has become one of the major sources of the low dose to man through seafood consumption. It was recommended that more data should be collected about 14 C in the local marine environment. The present study aims to respond to this recommendation. The estimation of 14 C activity in marine species is based on concentration factor values. The values reported here ranged from 1 Â 10 3 to 5 Â 10 3 Bq kg À1 ww/Bq L À1. A comparison was made between the observed and predicted values. The accuracy of 14 C activity calculations was estimated between underestimation by a factor of 2 and over-estimation by 50% (95% confidence interval). However, the use of the concentration factor parameter is based on the biological and seawater compartments being in steady state. This assumption may not be met at short distances from the point of release of discharges, where rapid changes in seawater concentration may be smoothed out in living organisms due to transfer kinetics. The data processing technique, previously published by Fiévet and Plet (2003. Estimating biological half-lives of radionuclides in marine compartments from environmental time-series measurements. Journal of Environmental Radioactivity 65, * Corresponding author. Tel.: þ33 2 33 01 41 01; fax: þ33 2 33 01 41 30. Journal of Environmental Radioactivity 90 (2006) 173e196 www.elsevier.com/locate/jenvrad 91e107), was used to deal with 14 C transfer kinetics, and carbon half-lives between seawater and a few biological compartments were thus estimated

    Development of a mass spectrometry method for the determination of a melanoma biomarker, 5-S-cysteinyldopa, in human plasma using solid phase extraction for sample clean-up.

    Full text link
    5-S-cysteinyldopa is a well-known pigment intermediate and analysis of its plasma concentration is interesting for the early diagnosis, as well as for evaluation of treatment and follow-up of malignant melanoma. A determination method of 5-SCD in human plasma was developed using solid phase extraction (SPE) on disposable cartridges and liquid chromatography electrospray mass spectrometry (LC-ESI-MS-MS). Compound's sensitivity to light and oxidation requires the addition of anti-oxidative agents (AO), to work in acidic media at 4 degrees C and to avoid light exposure of samples since blood collection. Different solid phases involving covalent binding to phenylboronic groups or dual retention mechanisms were evaluated and extraction cartridges containing both hydrophobic and strong cation exchange functionalities were finally selected. The LC separation of 5-SCD from endogenous catecholamines was achieved by gradient elution on a C18 stationary phase. 5-SCD was detected by multiple reaction monitoring (MRM) performed on ES(+) generated ions. Finally, the method was prevalidated in the lower ng/ml range. Good results with respect to accuracy, trueness and precision were obtained
    corecore