ZIS-SR une nouvelle protéine apparentée aux protéines SR est nécessaire au maintien du phénotype endocrinien

En utilisant l'approche du PCR différentiel à partir d'une banque d'ADNc de cerveau de souris, nous avons isolé un ADNc de 2,6 kpb régulé à la hausse par l'AMPc. Nous avons nommé cet ADNc GAP1-5A. Cependant, après l'obtention de la séquence complète de GAP1-5A, nous avons réalisé que GAP1-5A possède une homologie dans sa séquence en acides aminés avec d'autres protéines : la protéine Zis (Zinc finger Splicing) clonée chez le rat, l'humain et la souris en plus de la protéine C4SR retrouvée chez la grenouille. Nous avons renommé cet ADNc Zis-SR en tenant compte de ces protéines homologues déjà répertoriées. L'analyse de la séquence de Zis-SR suggère (1) deux motifs en doigt de zinc en N-terminal, responsable de la liaison des protéines aux acides nucléiques, (2) un signal de localisation nucléaire permettant de cibler la protéine au noyau et (3) une région riche en sérine et arginine en C-terminal, une caractéristique commune aux protéines impliquées dans l'épissage et aux protéines liant l'ARN."--Résumé abrégé par UMI

Implications of Proprotein Convertases in Ovarian Cancer Cell Proliferation and Tumor Progression: Insights for PACE4 as a Therapeutic Target

AbstractProprotein convertases are a family of kexin-like serine proteases that process proteins at single and multiple basic residues. Among the predicted and identified PC substrates, an increasing number of proteins having functions in cancer progression indicate that PCs may be potential targets for antineoplastic drugs. In support of this notion, we identified PACE4 as a vital PC involved in prostate cancer proliferation and progression, contrasting with the other co-expressed PCs. The aim of the present study was to test the importance of PCs in ovarian cancer cell proliferation and tumor progression. Based on tissue-expression profiles, furin, PACE4, PC5/6 and PC7 all displayed increased expression in primary tumor, ascites cells and metastases. These PCs were also expressed in variable levels in three model ovarian cell lines tested, namely SKOV3, CAOV3 and OVCAR3 cells. Since SKOV3 cells closely represented the PC expression profile of ovarian cancer cells, we chose them to test the effects of PC silencing using stable gene-silencing shRNA strategy to generate knockdown SKOV3 cells for each expressed PC. In vitro and in vivo assays confirmed the role of PACE4 in the sustainment of SKOV3 cell proliferation, which was not observed with the other three PCs. We also tested PACE4 peptide inhibitors on all three cell lines and observed consequent reduced cell proliferation which was correlated with PACE4 expression. Overall, these data support a role of PACE4 in promoting cell proliferation in ovarian cancer and provides further evidence for PACE4 as a potential therapeutic target

Presence of task-1 channel in the laryngeal mucosa in the newborn lamb

Nearly 40 potassium channels have been described in respiratory epithelial cells. Of these are found several members of the 4-transmembrane domain, 2-pore K(+) channel family (K2P family), namely Twik-1 and -2, Trek-1 and -2, Task-2, -3, and -4, Thik-1, and KCNK7. The aim of this study was to verify whether the Twik-related acid-sensitive K(+) channel, subtype 1 (Task-1) (also known as KCNK3), is present in the laryngeal mucosa in the newborn lamb. Through the use of immunohistochemistry and nested polymerase chain reaction (PCR) amplification, results indicate that Task-1 protein and mRNA are present in the laryngeal mucosa, in both the ciliated, pseudostratified columnar (respiratory) epithelium and the nonkeratinized, stratified squamous epithelium. The complete ovine Task-1 protein sequence showed high homology levels with previously reported mouse, bovine, and human Task-1 sequences. This includes a complete homology for the C-terminal amino acid sequence, which is mandatory for protein trafficking to the cell membrane. These results represent the first demonstration that Task-1, a pH-sensitive channel responsible for setting membrane potential, is present in the laryngeal mucosa of a newborn mammal

Disruption of the expression of the proprotein convertase PC7 reduces BDNF production and affects learning and memory in mice

PC7 belongs to the proprotein convertase family, whose members are implicated in the cleavage of secretory precursors. The in vivo function of PC7 is unknown. Herein, we find that the precursor proBDNF is processed into mature BDNF in COS-1 cells coexpressing proBDNF with either PC7 or Furin. Conversely, the processing of proBDNF into BDNF is markedly reduced in the absence of either Furin or PC7 in mouse primary hepatocytes. In vivo we observe that BDNF and PC7 mRNAs are colocalized in mouse hippocampus and amygdala and that mature BDNF protein levels are reduced in these brain areas in PC7 KO mice but not in the hippocampus of PC1/3 KO mice. Various behavioral tests reveal that in PC7 KO mice spatial memory is intact and plasticity of responding is mildly abnormal. Episodic and emotional memories are severely impaired, but both are rescued with the tyrosine receptor kinase B agonist 7,8-dihydroxyflavone. Altogether, these results support an in vivo role for PC7 in the regulation of certain types of cognitive performance, in part via proBDNF processing. Because polymorphic variants of human PC7 are being characterized, it will be important in future studies to determine their effects on additional physiological and behavioral processes

Autocatalytic Activation of the Furin Zymogen Requires Removal of the Emerging Enzyme's N-Terminus from the Active Site

Before furin can act on protein substrates, it must go through an ordered process of activation. Similar to many other proteinases, furin is synthesized as a zymogen (profurin) which becomes active only after the autocatalytic removal of its auto-inhibitory prodomain. We hypothesized that to activate profurin its prodomain had to be removed and, in addition, the emerging enzyme's N-terminus had to be ejected from the catalytic cleft.We constructed and analyzed the profurin mutants in which the egress of the emerging enzyme's N-terminus from the catalytic cleft was restricted. Mutants were autocatalytically processed at only the primary cleavage site Arg-Thr-Lys-Arg(107) downward arrowAsp(108), but not at both the primary and the secondary (Arg-Gly-Val-Thr-Lys-Arg(75) downward arrowSer(76)) cleavage sites, yielding, as a result, the full-length prodomain and mature furins commencing from the N-terminal Asp108. These correctly processed furin mutants, however, remained self-inhibited by the constrained N-terminal sequence which continuously occupied the S' sub-sites of the catalytic cleft and interfered with the functional activity. Further, using the in vitro cleavage of the purified prodomain and the analyses of colon carcinoma LoVo cells with the reconstituted expression of the wild-type and mutant furins, we demonstrated that a three-step autocatalytic processing including the cleavage of the prodomain at the previously unidentified Arg-Leu-Gln-Arg(89) downward arrowGlu(90) site, is required for the efficient activation of furin.Collectively, our results show the restrictive role of the enzyme's N-terminal region in the autocatalytic activation mechanisms. In a conceptual form, our data apply not only to profurin alone but also to a range of self-activated proteinases

ZIS-SR une nouvelle protéine apparentée aux protéines SR est nécessaire au maintien du phénotype endocrinien

En utilisant l'approche du PCR différentiel à partir d'une banque d'ADNc de cerveau de souris, nous avons isolé un ADNc de 2,6 kpb régulé à la hausse par l'AMPc. Nous avons nommé cet ADNc GAP1-5A. Cependant, après l'obtention de la séquence complète de GAP1-5A, nous avons réalisé que GAP1-5A possède une homologie dans sa séquence en acides aminés avec d'autres protéines : la protéine Zis (Zinc finger Splicing) clonée chez le rat, l'humain et la souris en plus de la protéine C4SR retrouvée chez la grenouille. Nous avons renommé cet ADNc Zis-SR en tenant compte de ces protéines homologues déjà répertoriées. L'analyse de la séquence de Zis-SR suggère (1) deux motifs en doigt de zinc en N-terminal, responsable de la liaison des protéines aux acides nucléiques, (2) un signal de localisation nucléaire permettant de cibler la protéine au noyau et (3) une région riche en sérine et arginine en C-terminal, une caractéristique commune aux protéines impliquées dans l'épissage et aux protéines liant l'ARN."--Résumé abrégé par UMI

Moi qui marche à tâtons dans ma jeunesse noire ; suivi de, La meilleure sorte de corps

Moi qui marche à tâtons dans ma jeunesse noire est un recueil de textes graphiques. Tracés à la main, ils témoignent par leur forme autant que par leur propos des inquiétudes et des interrogations d'une adolescente de quinze ans, pas vraiment rebelle, pas vraiment « à problèmes », simplement confrontée au choc d'arriver dans le monde. Le texte montre sa lente déprise de certaines exigences familiales ou sociales, son recours à certaines influences au détriment d'autres. Progressivement, la noirceur de l'angoisse permet à une réflexion sur la mort de s'amorcer. Plus qu'une activité, l'écriture s'impose comme une sorte de façon d'exister, inévitable. Emmêlée à cette « marche à tâtons », la naissance du premier amour ne simplifie pas les choses. Dans l'essai qui suit, La meilleure sorte de corps, je cherche à définir comment écrire peut faire « du corps ». L'écriture manuscrite porte la trace du corps qui l'a exécutée, en même temps qu'elle appelle à observer le corps de la lettre dans toutes ses variations expressives. Le texte de Moi qui marche... est entouré de cases, empruntées au cartouche narratif de la bande dessinée, qui forment une peau – à la fois une limite entre le discours de la narratrice et l'extérieur, et un lien poreux qui le met en contact avec le monde. En m'appuyant sur les écrits de Maurice Merleau-Ponty et de Valère Novarina sur la chair et sur la parole, je développe une pensée de l'écriture comme chair, c'est-à-dire relation entre le sujet et le monde, entre le sujet et l'autre, forme de constitution du sujet. Ces considérations sur la chair et sur la peau me permettent de problématiser le rapport entre intérieur et extérieur, entre surface et profondeur, et mènent à reconsidérer ces dichotomies pour les déconstruire et en montrer l'intrication profonde.\ud ______________________________________________________________________________ \ud MOTS-CLÉS DE L’AUTEUR : Adolescence, Écriture manuscrite, Chair, Peau, Contour, Texte graphiqu