Uso de marcadores imunológicos na avaliação da resposta imune dos ovinos à infecção natural por nematódeos e na seleção de animais resistentes às parasitoses

AnexosOrientador:Vanete Thomaz SoccolCo-orientadores:Paulo Rossi Júnior, Richard J.ShawDissertação(mestrado)- Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Agrárias. Curso de Pós-Graduação em Ciências VeterináriasInclui bibliografi

Assessment of a hands-on method for FAMACHA© system training

The FAMACHA©system is a method for selective anthelmintic treatment comprising earlydetection of haemonchosis in sheep and goats. In order to evaluate the hands-on trainingmethodology and the learning level of the participants, we analyzed data from 30 trainingevents involving 47 training classes conducted in the State of Paraná, Brazil, from July/2009to May/2011, during which period a total of 1004 participants did 20,080 FAMACHA©clas-sifications. In the practical training sessions, each participant individually evaluated 20animals with known haematocrit values. Every participant per training event was given aunique number, whereupon each of the animals in a given event was FAMACHA©classifiedby all the trainees involved, in the same trainee number sequence. After each consecutiveanimal had been evaluated by every one of the participants, its haematocrit and corre-sponding FAMACHA©category were announced before the next animal was presented. Thenumber of persons in training, which ranged from 5 to 39 per session, did not significantlyaffect the average error of the groups of participants involved (p > 0.05). The average errorin the classification of the first animal on a scale with a perfect score of zero was 2.5, signif-icantly greater than the error of 0.56 of the twentieth one (p 0.05). Similarly, the average errors in FAMACHA©classification were not significantlyinfluenced by the occupation or gender of the participants, nor whether there were ani-mals in all five FAMACHA©categories or only in categories 1, 2, 3 and 4 per training event(p > 0.05).Fundação Araucária (Araucaria Foundation), Programa Universidade Sem Fronteiras ("University Without Borders Program").http://www.elsevier.com/locate/vetparhb201

USO DE MARCADORES PARASITOLÓGICOS E IMUNOLÓGICOS NA SELEÇÃO DE OVELHAS RESISTENTES ÀS PARASITOSES GASTRINTESTINAIS

Este trabalho foi realizado com objetivo de avaliar a possibilidade de identificar ovelhas resistentes e susceptíveis às parasitoses por meio de um marcador parasitológico (direto), de marcadores imunológicos (indiretos) ou pela associação entre ambos. Vinte ovelhas foram acompanhadas por coletas mensais de sangue e fezes no período de novembro de 1998 a maio de 1999. O marcador parasitológico utilizado foi o número de ovos de helmintos por grama de fezes (OPG); os marcadores imunológicos foram o número de eosinófilos sanguíneos, imunoglobulinas G (IgG) e E (IgE) anti-Haemonchus contortus. As ovelhas puderam ser classificadas como resistentes ou susceptíveis pelo OPG. Pelo o número de eosinófilos ou pela IgE específica utilizados concomitantemente com o OPG foi possível identificar ovelhas resistentes e susceptíveis ao parasitismo gastrintestinal. O número de eosinófilos sanguíneos foi o único marcador imunológico que permite de classificar as ovelhas indiretamente nos mesmos grupos obtidos pelo o OPG

Pharmacopuncture with a low dosage of B complex vitamins in the Da Zhui acupoint (Governing Vessel 14) for controlling gastrointestinal parasitism in periparturient ewes

Gastrointestinal parasites are a significant challenge in sheep farming, and periparturient ewes are one of the most susceptible categories in sheep flocks. This study aimed to verify whether the injection of B vitamins at the acupuncture point governing vessel 14 (GV14) can influence the parasitic load or host parasite interaction in naturally infected ewes during the peripartum period. Four weeks before parturition, 25 ewes were divided into five treatment groups: (1) Dose Control: 0.2 mL of B complex via IM; (2) Drug Control: 2 mL Complex B via IM; (3) Acupoint Control: 0.2 mL of Water at GV14 point; (4) Control; (5) Test group: 0.2 mL of B complex at the GV14 point. Treatments were performed at weeks -3, -1, 2, 4, and 6 about the parturition time. Fecal samples to estimate the parasitic load by fecal egg counts (FEC) and total blood samples for hemogram examination were performed seven days after the treatment, coinciding with weeks -2, 3, 5, and 7 about the parturition time. The number of peripheral eosinophils was higher in group 3 than in group 1 (p <0.05). Although groups 3 and 5 had lower mean values of FEC and higher hematological values at the time of weaning, these differences were not statistically significant (p> 0.05) according to the F test. However, all animals in groups 3 and 5 maintained low parasitism levels until the end of the experiment. Further studies should be performed with larger sample sizes and minor changes to the experimental protocol to elucidate the role of GV14 acupoint stimulation in the host-parasite relationship.A parasitose gastrointestinal é o principal desafio sanitário para a criação de ovinos a pasto, e as ovelhas no periparto são uma das categorias mais susceptíveis a esta infeção no rebanho. O objetivo deste trabalho foi verificar se a injeção de vitaminas do complexo B no acuponto Vaso Governador 14 (VG14) poderia influenciar a carga parasitária ou modular a interação hospedeiro-parasito em ovelhas naturalmente infectadas no período de periparto. Quatro semanas antes da data prevista para o parto, 25 ovelhas foram divididas em cinco grupos de tratamento (1) Controle da dose: 0,2 mL de vitaminas do complexo B via IM; (2) Controle do fármaco: 2mL complexo B via IM; (3) Controle do Ponto: 0,2 mL de água destilada no ponto VG14; (4) Controle sem tratamento; (5) Grupo teste: 0,2 mL de complexo B no pontoVG14. Estes tratamentos foram realizados nas semanas -3; -1; 2; 4 e 6 em relação à data do parto. Amostras de fezes para contagem de ovos por grama de fezes (OPG), assim como amostras de sangue para realizar o hemograma, foram obtidas dos animais sete dias após os tratamentos, coincidindo com as semanas -2, 3, 5 e 7 do parto. O número de eosinófilos periféricos foi superior no grupo 3 se comparado ao grupo 1 (p <0,05). Os animais dos grupos 3 e 5 tiveram menores valores de OPG e maior hematócrito, mas estas diferenças não foram consideradas significativas pelo teste F (p> 0,05). No entanto, todas as ovelhas dos grupos 3 e 5 se mantiveram com níveis baixos de parasitismo durante todo o experimento. Sugere-se que novos estudos sejam realizados com algumas modificações deste protocolo a fim de aprofundar o conhecimento do potencial imunomodulador do acuponto VG14

LEUCOGRAMA COMO INDICADOR DE ESTRESSE DURANTE A AVALIAÇÃO PARASITOLÓGICA DE OVINOS (Ovis aries)

O objetivo deste trabalho foi verificar a presença de alterações leucocitárias indicativas de estresse, secundárias à pratica de manejo e avaliação parasitológica em ovinos. Foi realizado acompanhamento clínico e laboratorial quinzenal de 17 ovelhas lanadas tipo carne, de setembro de 2009 a março de 2010. As avaliações clínicas consistiram na mensuração do grau FAMACHA© e do escore corporal (EC). O grau FAMACHA© foi atribuído pela comparação da coloração da conjuntiva ocular dos ovinos com um cartão padrão, enquanto o escore corporal foi definido em uma escala de 1 (muito magro) a 5 (muito gordo) através da palpação lombar. Também foi procedida individualmente a coleta de uma amostra de fezes para determinação do número de ovos de helmintos por grama de fezes (OPG) e de uma amostra sangue total com EDTA para realização do leucograma. As médias de leucócitos totais, neutrófilos, linfócitos e eosinófilos declinaram gradativamente no período de lactação das ovelhas. Após o desmame dos cordeiros, foi observado aumento na média destas mesmas variáveis. As médias de neutrófilos, linfócitos e monócitos permaneceram dentro do valor de referência para espécie ovina. As médias de eosinófilos das coletas de 12/01/2010 (1.813 ± 1.310); 01/02/2010 (2.337 ± 2.195) e 03/03/2010 (1.229 ± 563) foram maiores que o valor superior de referência para espécie ovina. Apesar das alterações relatadas, nenhum animal apresentou leucograma de estresse agudo, caracterizado por neutrofilia e linfocitose durante as coletas realizadas, indicando que as práticas de manejo utilizadas para acompanhamento parasitário dos animais, além da própria coleta de sangue realizada para realização deste trabalho, foram toleradas pelos animais

LEUCOGRAMA COMO INDICADOR DE ESTRESSE DURANTE A AVALIAÇÃO PARASITOLÓGICA DE OVINOS (Ovis aries)

O objetivo deste trabalho foi verificar a presença de alterações leucocitárias indicativas de estresse, secundárias à pratica de manejo e avaliação parasitológica em ovinos. Foi realizado acompanhamento clínico e laboratorial quinzenal de 17 ovelhas lanadas tipo carne, de setembro de 2009 a março de 2010. As avaliações clínicas consistiram na mensuração do grau FAMACHA© e do escore corporal (EC). O grau FAMACHA© foi atribuído pela comparação da coloração da conjuntiva ocular dos ovinos com um cartão padrão, enquanto o escore corporal foi definido em uma escala de 1 (muito magro) a 5 (muito gordo) através da palpação lombar. Também foi procedida individualmente a coleta de uma amostra de fezes para determinação do número de ovos de helmintos por grama de fezes (OPG) e de uma amostra sangue total com EDTA para realização do leucograma. As médias de leucócitos totais, neutrófilos, linfócitos e eosinófilos declinaram gradativamente no período de lactação das ovelhas. Após o desmame dos cordeiros, foi observado aumento na média destas mesmas variáveis. As médias de neutrófilos, linfócitos e monócitos permaneceram dentro do valor de referência para espécie ovina. As médias de eosinófilos das coletas de 12/01/2010 (1.813 ± 1.310); 01/02/2010 (2.337 ± 2.195) e 03/03/2010 (1.229 ± 563) foram maiores que o valor superior de referência para espécie ovina. Apesar das alterações relatadas, nenhum animal apresentou leucograma de estresse agudo, caracterizado por neutrofilia e linfocitose durante as coletas realizadas, indicando que as práticas de manejo utilizadas para acompanhamento parasitário dos animais, além da própria coleta de sangue realizada para realização deste trabalho, foram toleradas pelos animais

Longevidade de larvas infectantes de Haemonchus sp. em duas alturas de pasto de Brachiaria brizantha cv. Marandu

O objetivo deste trabalho foi quantificar a recuperação de larvas infectantes de Haemonchus sp. em capim Marandu (Brachiaria brizantha), no período da seca (inverno) e das chuvas (verão) ao longo do tempo; bem como verificar se a altura do pasto influenciou neste tempo de sobrevivência. O experimento foi conduzido em Uberlândia, durante os meses de agosto a novembro de 2014 (seca) e janeiro a março de 2015 (chuvas). Foram considerados dois tratamentos (alturas de pasto 10 e 35cm), com coleta de amostras nos dias 0, 7, 14, 28, 42, 56 e 70 dias. Houve contaminação experimental de parcelas com fezes de caprinos com média de 1600 ovos de estrongilídeos por grama (OPG). Foi realizada amostragem por cortes dos estratos inferior e superior do capim. Houve maior número de larvas recuperadas no estrato inferior no inverno (p<0,05). Não houve diferença no número de larvas recuperadas dos diferentes estratos no verão, nem entre as diferentes alturas de pasto (p>0,05). Foram encontradas larvas até o 42o dia no período chuvoso e até o fim do trabalho durante a seca, com maior quantidade de larvas (p<0,05) no 7º e 14º dia pós-contaminação. Pode se inferir a necessidade de estudos para maior conhecimento da influência das variáveis microclimáticas do pasto nas larvas infectantes de nematódeos

Sensitivity and specificity of the FAMACHA© system in Suffolk sheep and crossbred Boer goats

Sheep and goats are the species of farm animal with the highest growth rate in Paraná State. The main problems facing Paraná State flocks are gastrointestinal parasites and anthelmintic resistance. One of the newest resources used to slow down the development of anthelmintic resistance is the FAMACHA(©) system, a selective method useful for controlling gastrointestinal verminosis in small ruminants. The purpose of the present research was to evaluate the sensitivity and specificity of the FAMACHA(©) system in sheep and goats and to compare the results for both species. The conjunctivae of 83 Suffolk ewes and 60 adult crossbred Boer does were evaluated by the same trained person using the FAMACHA(©) system. The packed cell value (PCV) served as the gold standard for clinical FAMACHA(©) evaluation. To calculate the sensitivity and specificity of the FAMACHA(©) system, different criteria were adopted in turn: animals classified as FAMACHA(©) (F(©)) 4 and 5, or 3, 4 and 5, were considered to be anemic (positive test), and animals classified as F(©)1, 2 and 3, or 1 and 2 were considered to be non-anemic (negative test). Three standard values of PCV, namely ≤19%, ≤18% or ≤15%, were used to confirm anemia. At all cut-off levels, the sensitivity increased if F(©)3 animals were included as being anemic. However, changes in levels of sensitivity were associated with reciprocal changes in specificity. The sensitivity was higher for sheep than for goats, excepting when the criteria included PCV≤18 and F(©)3, F(©)4 and F(©)5 were considered positive. In contrast, the specificity was always lower in sheep for any criteria adopted. Other than in goats, using the ≤15 cut-off level for sheep, it is possible to opt not to drench the animals that were shown to be F(©)3 because the sensitivity is still high, indicating that few animals that should have been drenched were overlooked. In goats, in contrast, the low sensitivity at all cut-off levels made it too risky to leave F(©)3 animals undrenched. Even though the number of correct treatments for goats was always higher than that for sheep, the opposite was true for the kappa index for all the criteria tested. Therefore, the FAMACHA(©) system is suitable for the identification of anemic animals of both species. It is necessary that all small ruminants classified as FAMACHA(©) level 3 are also treated to increase the sensitivity of the method.http://www.elsevier.com/locate/vetparhb2016Veterinary Tropical Disease

Co-infection of Cytauxzoon felis, Mycoplasma haemofelis, and the feline immunodeficiency virus in a domestic cat in Uberlândia, Minas Gerais, Brazil

Cytauxzoon felis is a hemoparasite capable of infecting domestic and wild cats. Studies suggest that wild cats are the main reservoirs of the protozoan, and transmission occurs through the bite of an infected tick. Hemotropic mycoplasmas are Gram-negative bacteria responsible for severe hemolytic anemia. The feline immunodeficiency virus (FIV) is a retrovirus capable of generating immunosuppression in the host and persistent infection. The present work describes a case of co infection of Cytauxzoon felis, Mycoplasma haemofelis, and feline immunodeficiency virus (FIV) in a cat. A feline from the rural area was admitted to the Veterinary Hospital of Uberlândia - MG of the Federal University of Uberlândia. Fresh whole blood samples were collected for blood count, enzymatic analysis, DNA extraction, real-time PCR for the detection of Cytauxzoon felis and Mycoplasma haemofelis, and the Point of Care ELISA test for Feline Leukemia Virus (FeLV) antigens and antibodies to feline immunodeficiency virus (FIV). Piroplasms compatible with Cytauxzoon spp. were observed in the smear, and the tests performed were positive for Cytauxzoon felis, Mycoplasma haemofelis, and FIV. Cytauxzoon felis é um hemoparasita que possui capacidade de infectar felídeos domésticos e selvagens. Estudos sugerem que os felídeos selvagens sejam os principais reservatórios do protozoário e a transmissão ocorre através da picada de um carrapato infectado. Os micoplasmas hemotrópicos são bactérias Gram negativas responsáveis por anemia hemolítica grave. O vírus da imunodeficiência felina (FIV) é um retrovírus com capacidade de gerar imunossupressão no hospedeiro e infecção persistente. O presente trabalho descreve um caso de co-infecção de Cytauxzoon felis, Mycoplasma haemofelis e vírus da imunodeficiência felina (FIV) em um gato. Um felino proveniente da zona rural foi internado no Hospital Veterinário da Universidade Federal de Uberlândia, em Uberlândia-MG. Foram coletadas amostras de sangue total fresco para a realização de hemograma, análise enzimática, extração de DNA, PCR em tempo real para detecção de Cytauxzoon felis e Mycoplasma haemofelis e o teste de ELISA Point of Care para Antígenos de vírus da leucemia felina (FeLV) e anticorpos para o vírus da imunodeficiência felina (FIV). Em esfregaço foram observados piroplasmas compatíveis com Cytauxzoon spp. e os resultados dos testes realizados foram positivos para Cytauxzoon felis, Mycoplasma haemofelis e FIV.

Evaluation of response to anti-leptospira bacterin vaccination in pregnant ewes and the passive transfer of antibodies to their offspring

Leptospirosis in sheep is often underestimated, and leads to great economic losses for the sheep farming industry. The aim of this study was to evaluate the humoral immune response in pregnant ewes, after the injection of a commercial polyvalent vaccine for leptospirosis, and to observe the transmission of anti-Leptospira antibodies through the colostrum to the offspring. For this, 24 pregnant ewes were vaccinated for leptospirosis.  Blood samples were collected prior to vaccination and then 7, 14, 21, 28, 35, 42 and 49 days after vaccination. In order to evaluate passive immunity transfer, blood samples of 32 lambs were collected during the first 48 hours after birth, and another collection was performed 10 to 21 days after birth. The lambs were placed into 2 groups: Group A (n=16): singleton lambs; and group B (n=16): twins. The sera samples were submitted to the Microscopic Agglutination Test (MAT), in which 21 Leptospira serovars were tested. The results were analyzed in a descriptive form. The number of sheep reactive to MAT gradually increased until 21 days after vaccination, and decreased right after. Of all the serovars contained in the vaccine, the largest proportion of animals were seroconverted to Hardjoprajtino serovar, Serjoe serogroup. Anti-Leptospira antibodies transferred through colostrum to lambs were detected by MAT in the serum collected 24-48 hours after birth.  It was observed that 65.6% (21 out of 32) of the lambs were reactive. In the subsequent collections that occurred from 10 to 21 days after birth, a decrease in the number of animals reactive to the MAT was detected. There was no significant statistical difference for the passive transfer of antibodies between single or twin lambs