Miniaturized approaches for sample preparation in hair testing for drugs of abuse and their application in clinical and forensic scenarios

Hair is nowadays one of the most important alternative matrices that have attracted attention for the analysis of various drugs. The fact that it can be collected under supervision, the lower probability of tampering with, and the greater stability are cited as major advantages. As with conventional matrices, the preparation of hair samples is an important step for clean-up and pre-concentration of analytes, which significantly affects the reliability and accuracy of the analysis. The use of miniaturized pre-concentration techniques, driven by the concept of “green chemistry”, has minimized the waste usually associated to classical techniques, and microextraction techniques are known for using lower solvent volumes and for saving time; however, their applicability to hair samples is still poorly explored. The aim of this dissertation is to discuss the status of miniaturized clean-up approaches for hair samples. In addition, the advantages of microextraction by packed sorbent (MEPS) in different analytical fields are addressed, and the practical applicability of this technique in hair samples is demonstrated by three different works using gas chromatography coupled to tandem mass spectrometry (GC-MS/MS): determination of selected opioids; determination methadone and EDDP; determination of cocaine and metabolites. These novel methods were optimized and validated according to internationally accepted guidelines. Regarding the current status of the application of miniaturized approaches to hair samples, an increased research has been observed in both solid-phase (SPME) and liquid phase microextraction (LPME), with SPME showing higher representativeness. In this last approach, dispersive micro-solid phase extraction (D-μ-SPE) emerges as the most used in the last 5 years, if we do not include the different variants of fibre microextraction, namely the direct immersion (DI-SPME), headspace (HS-SPME) or in tube (IT-SPME) approaches. Moreover, D-μ-SPE was the one that showed more innovations in terms of solid sorbent material, driven by developments with carbon nanotubes, graphene, graphene oxide (GO), and the use of modified magnetic nanoparticles (MNPs) and ion-imprinted polymers (IIPs). As for LPME, the use of hollow fibre (HF)-LPME has been extensively explored for hair samples, showing great versatility for target analytes. Improvements were also observed by functionalization with GO and by the use of ionic liquids (IL). However, when all variants of dispersive liquid-liquid microextraction (DLLME) are considered, this is undoubtedly the most researched approach. The inclusion of methods involving solidification of a floating organic drop (DLLME-SFO), supramolecular solvents (SM-DLLME), and temperature-controlled ionic liquids (TIL-DLLME) were considered very beneficial due to their lower toxicity. Of all the microextraction techniques applied to hair samples, MEPS seems to be little explored. In fact, before this project was initialized , there was only one paper that had applied MEPS to pre-concentrate analytes from hair samples. Nonetheless, MEPS has been successfully used to extract a variety of compounds from different matrices, and its applicability has been demonstrated in a number of areas, including therapeutic monitoring, forensic toxicology, and food and environmental analysis. This technique is considered as a miniaturization of the classical solid phase extraction (SPE) and was developed in 2004 by Abdel-Rehim with the aim of reducing the volumes of both the sample and the solvents. It also became very attractive as it allows the reuse of the sorbent material and offers an automated procedure by easy coupling to chromatographic systems. In MEPS, the sorbent is reduced (1-4 mg) and is located in a micro-syringe instead of a cartridge. In turn, the sample flows bidirectionally through the sorbent (aspirations), improving the efficiency of the process due to the increased interaction with the sorbent. Considering the potential of MEPS in the context of sample preparation, we decided to test its usefulness for hair samples in three applications. In the first work, we present an analytical method which was developed and validated for the determination of tramadol (TRM), codeine (COD), morphine (MOR), 6- acetylcodeine (6-AC), 6-monoacetylmorphine (6-MAM) and fentanyl (FNT) using gas chromatography coupled to tandem mass spectrometry (GC-MS/MS). Using an M1 sorbent (4 mg; 80% C8 and 20% SCX), the procedure included the following steps: (i) conditioning (3 x 250 μL of methanol and 3 x 250 μL of 2% formic acid); (ii) sample load (15 x 150 μL); (iii) washing (150 μL of 3.36% formic acid); and (iv) elution (8 x 100 μL of 2.36% ammonium hydroxide in methanol). Linearity was obtained for all compounds between the lower limit of quantification (LLOQ) and 5 ng/mg, with determination coefficients higher than 0.99. The obtained LLOQs were 0.01 ng/mg for TRM, COD and 6-AC and 0.025 ng/mg for MOR, 6-MAM and FNT. The recoveries ranged from 74 to 90% (TRM), 51 to 59% (COD), 22 to 36% (MOR), 69 to 99% (6-AC), 53 to 61% (6-MAM) and 75 to 86% (FNT). The method proved to be precise and accurate with coefficients of variation typically below 15% and relative errors within a range of ± 15%, respectively. In the second work, a procedure was developed for the rapid concentration of methadone and its main metabolite (EDDP). The miniaturized approach was coupled to GC-MS/MS. MEPS was performed with an M1 (4 mg; 80% C8 and 20% SCX) sorbent conditioned with three cycles of methanol (250 μL) and three cycles of 2% formic acid (250 μL). Subsequently, the sample was loaded through nine cycles of 150 μL followed by a washing step that involved three cycles of 50 μL with 3.36% formic acid. For the elution of the compounds, six cycles of 100 μL with 2.36% ammonium hydroxide in methanol were used. The method was linear from 0.01 to 5 ng/mg for both compounds, with determination coefficients greater than 0.99. The recoveries ranged from 73 to 109% for methadone and from 84 to 110% for EDDP. Finally, precision and accuracy were in accordance with the international guidelines for analytical method validation. In the third work, a MEPS technique, with M1 (4 mg; 80% C8 and 20% SCX) sorbent, was developed for the pre-concentration of cocaine (COC), benzoylecgonine (BEG), ecgonine methyl ester (EME), norcocaine (NCOC), cocaethylene (COET) and anhydroecgonine methyl ester (AEME). The determination of the compounds was carried out using GC-MS/MS. The final procedure consisted of the following steps: (i) conditioning (250 μL of methanol and 250 μL of deionized water); (ii) sample load (21 x 150 μL); (iii) washing (50 μL of deionized water and 50 μL of acetate buffer pH 4); and (iv) elution (3 x 100 μL of 2% ammonium hydroxide in methanol). The obtained recoveries were considered acceptable for most compounds, namely 44-64% for COC, 63-73% for COET, 21-28% for BEG and 36-44% for NCOC. Lower recoveries were obtained for AEME (4-6%) and EME (1-3%). The method was linear between the LLOQs (0.010 ng/mg for COC and COET, 0.025 ng/mg for EME, BEG and NCOC and 0.150 ng/mg for AEME) and 5 ng/mg. In turn, the method was considered precise and accurate with coefficients of variation below 15%, and with an average relative error within ± 15% for all compounds, except for LLOQ (20%). With the successful application of MEPS it has been demonstrated that this miniaturized technique is an excellent alternative for toxicological analysis in hair samples. MEPS has the advantage of reducing solvent use, and the sorbent may be reused (> 100 extractions), which can be economically attractive to laboratories. Although there has been considerable academic interest in miniaturized clean-up approaches over the past five years, few implementations have been observed in routine laboratories. With the relevance and applicability herein described, we expect this panorama to change in the near future.A amostra de cabelo é uma das matrizes alternativas mais importantes. A sua análise foi relatada pela primeira vez no final dos anos 70, e desde então permitiu ajudar os toxicologistas nos mais diversos campos de atuação. Uma vez que as drogas são bastante estáveis nesta amostra, a sua análise proporciona a avaliação de histórias de uso de drogas ocorridas há centenas de anos, com grande interesse antropológico, mas também pode ser importante na resolução de casos forenses em que o cabelo é a única amostra obtida a partir de um cadáver. Já no indivíduo vivo, esta amostra é atualmente bastante utilizada para detetar xenobióticos (drogas de abuso, produtos farmacêuticos, contaminantes ambientais, agentes dopantes, etc.) em âmbito forense, em situações de renovação da carta de condução, avaliação do cumprimento da terapia de substituição de drogas, medicina ocupacional, avaliação e documentação de situações de abuso de álcool, entre outras. O facto de poder ser colhida sob supervisão com reduzida probabilidade de adulteração, e a elevada estabilidade são apontadas como as suas principais vantagens. Tal como acontece com as matrizes convencionais, a preparação das amostras revela-se uma etapa importante para a eliminação de interferentes e pré-concentração de analitos, influenciando significativamente a confiabilidade e a precisão da análise. Relativamente a esta matriz, as técnicas de preparação de amostra usadas não diferem das adotadas para outras matrizes, restringindo-se às clássicas extração em fase sólida (SPE) e extração líquido-líquido (LLE).No meio académico, estas técnicas convencionais são atualmente consideradas métodos do passado. Na última década testemunhou-se um rápido desenvolvimento de novas técnicas de preparação de amostras, existindo uma grande tendência para a miniaturização. O uso de técnicas miniaturizadas para pré-concentração permite ainda automatização, desempenho de alto rendimento, acoplamento online com instrumentos analíticos, resultando em baixos custos por análise devido ao reduzido consumo de solventes. As técnicas de microextração, como a microextração em fase líquida e microextração em fase sólida, apresentam essas vantagens sobre as abordagens clássicas, no entanto, a sua aplicabilidade em amostras de cabelo ainda está pouco explorada. Esta dissertação tem como objetivo demonstrar o estado atual das abordagens miniaturizadas para concentração de analitos em amostras de cabelo, as vantagens da microextração em seringa empacotada (MEPS) em diferentes campos analíticos e a sua aplicabilidade prática em amostras de cabelo com três trabalhos diferentes: determinação de opioides; determinação de metadona e EDDP, determinação de cocaína e metabolitos usando cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massa em tandem (GC-MS/MS). Relativamente ao estado atual das abordagens miniaturizadas aplicadas a amostras de cabelo, é possível afirmar que existiu um aumento na investigação envolvendo tanto a microextração em fase sólida (SPME) como em fase líquida (LPME), sendo que a SPME teve maior representatividade. Nesta última abordagem, a técnica de microextração em fase sólida dispersiva (D-μ-SPE) surge como a mais explorada nos últimos 5 anos, se não considerarmos em conjunto as diferentes variantes da microextração com fibra, nomeadamente a de imersão direta (DISPME), headspace (HS-SPME) ou capilar (IT-SPME). Adicionalmente, a D-μ-SPE foi a que apresentou mais novidades relativamente a sorbentes sólidos, impulsionada por desenvolvimentos com nanotubos de carbono, grafeno, óxido de grafeno (GO), para além do uso de nanopartículas magnéticas modificadas (MNPs) e polímeros impressos com iões (IIPs). No que se refere à LPME, o uso de fibra oca (HF)-LPME tem sido cada vez mais explorado em amostras de cabelo, revelando grande versatilidade em relação aos analitos alvo. Foram também observados aperfeiçoamentos através da funcionalização com GO e com a utilização de líquidos iónicos (IL). No entanto, se todas as variantes da microextração líquido-líquido dispersiva (DLLME) forem consideradas em conjunto, esta é sem dúvida a abordagem mais investigada. A inclusão de solidificação de gota orgânica flutuante (DLLME-SFO), solventes supramoleculares (SM-DLLME) e líquidos iónicos de temperatura controlada (TIL-DLLME) apresentaram como principal vantagem a menor toxicidade. Dentro de todas as técnicas de microextração aplicadas a amostras de cabelo, a MEPS surge como pouco explorada. De facto, à data do início deste projeto, apenas um trabalho havia aplicado a MEPS para isolar compostos a partir de amostras de cabelo. Contudo, a MEPS tem sido implementada com sucesso para extrair uma ampla gama de compostos a partir de diferentes matrizes. A sua aplicabilidade está comprovada nas mais diversas áreas, tais como monitorização terapêutica, toxicologia forense, bem como em análises alimentares e ambientais. Esta técnica é reconhecida como uma miniaturização da clássica SPE e foi desenvolvida em 2004 por Abdel-Rehim com o objetivo de reduzir o volume de amostra e solvente usados. Tornou-se ainda bastante atrativa por permitir a reutilização do material sorbente e proporcionar um procedimento automatizado através do fácil acoplamento aos sistemas cromatográficos. Na MEPS o enchimento é reduzido (1-4 mg) e fica localizado numa micro-seringa em vez de num cartucho. Por sua vez, a amostra flui através do enchimento de forma bidirecional (aspirações), melhorando assim a eficiência do processo devido ao aumento do contacto entre a amostra e o sorbente. Tendo em conta todas as potencialidades que a MEPS apresenta no âmbito de preparação de amostras, decidiu-se testar a sua utilidade para amostras de cabelo em três aplicações. Na primeira procedeu-se ao desenvolvimento e validação de um método analítico para determinar tramadol (TRM), codeína (COD), morfina (MOR), 6- acetilcodeína (6-AC), 6-monoacetilmorfina (6-MAM) e fentanil (FNT) em amostras de cabelo com recurso à GC-MS/MS. Utilizando um sorbente M1 (4 mg; 80% C8 e 20% SCX), o procedimento englobou os seguintes passos: (i) acondicionamento (3 x 250 μL de metanol e 3 x 250 μL de ácido fórmico 2%); (ii) passagem da amostra (15 x 150 μL); (iii) lavagem (150 μL de ácido fórmico a 3,36%); e (iv) eluição (8 x 100 μL de hidróxido de amónio 2,36% em metanol). Obteve-se linearidade para todos os compostos entre o limite inferior de quantificação (LLOQ) e 5 ng/mg, com coeficientes de determinação superiores a 0,99. Os LLOQs alcançados foram 0,01 ng/mg para TRM, COD e 6-AC e 0,025 ng/mg para MOR, 6-MAM e FNT. As recuperações variaram entre 74 e 90% (TRM), 51 e 59% (COD), 22 e 36% (MOR), 69 e 99% (6-AC), 53 e 61% (6-MAM) e 75 e 86% (FNT). O método revelou-se preciso e exato com coeficientes de variação tipicamente abaixo de 15% e erros relativos dentro de um intervalo de ± 15%, respetivamente. Na segunda aplicação, desenvolveu-se um procedimento para a rápida concentração de metadona e do seu principal metabolito (EDDP). A abordagem miniaturizada foi acoplada a GC-MS/MS. A MEPS foi efetuada com um sorbente M1 (4 mg; 80% C8 e 20% SCX) acondicionado com três ciclos de 250 μL de metanol e três ciclos de 250 μL de ácido fórmico a 2%. Posteriormente, a passagem da amostra fez-se com nove ciclos de 150 μL seguida de uma etapa de lavagem que envolveu três ciclos de 50 μL com ácido fórmico 3,36%. Para a eluição dos compostos, foram aplicados seis ciclos de 100 μL de hidróxido de amónio a 2,36% em metanol. O método foi linear de 0,01 a 5 ng/mg para ambos os compostos, apresentando coeficientes de determinação superiores a 0,99. As recuperações variaram entre 73 e 109% para metadona e 84 e 110% para EDDP. Por fim, a precisão e a exatidão estavam de acordo com os postulados das diretrizes internacionais para validação de métodos analíticos. Na terceira aplicação foi desenvolvida um método, também com recurso ao sorbente M1 (4 mg; 80% C8 e 20% SCX), para pré-concentração de cocaína (COC), benzoilecgonina (BEG), ecgonina metil éster (EME), norcocaína (NCOC), cocaetileno (COET) e anidroecgonina metil éster (AEME). A determinação dos compostos foi mais uma vez realizada com recurso à GC-MS/MS. O procedimento final consistiu nos seguintes passos: (i) acondicionamento (250 μL de metanol e 250 μL de água desionizada); (ii) passagem da amostra (21 x 150 μL); (iii) lavagem (50 μL de água desionizada e 50 μL de tampão acetato pH 4); e (iv) eluição (3 x 100 μL de hidróxido de amónio a 2%em metanol). As recuperações obtidas foram consideradas aceitáveis para a maioria dos compostos, nomeadamente 44-64% para COC, 63-73% para COET, 21-28% para BEG e 36-44% para NCOC. Foram obtidas recuperações mais baixas para AEME (4-6%) e EME (1-3%). O método foi linear entre os LLOQs e 5 ng/mg, sendo que os LLOQs foram 0,010 ng/mg para a COC e COET, 0,025 ng/mg para a EME, BEG e NCOC e 0,150 ng/mg para a AEME. Por sua vez, o método foi considerado também preciso e exato com coeficientes de variação inferiores a 15%, e com um erro relativo médio dentro de ± 15% para todos os compostos, exceto para o LLOQ (20%). Os três trabalhos tiveram uma etapa de otimização do procedimento de extração, a qual foi facilitada pelo uso do desenho experimental (DOE). O DOE é uma das principais ferramentas estatísticas com implementação na investigação e na indústria. Esta ferramenta permite o delineamento experimental, através de um número de ensaios definidos, com o objetivo de avaliar a influência de diversos fatores (variáveis) nas respostas obtidas de um processo. O DOE tornou-se vantajoso porque permitiu a otimização dos procedimentos analíticos através de um número reduzido de ensaios sem prejuízo da qualidade da informação obtida. Para além disso, permitiu ainda o estudo simultâneo das diferentes variáveis passiveis de afetar a MEPS. Com a aplicação bem-sucedida da MEPS nos trabalhos supracitados, foi possível comprovar que esta técnica miniaturizada se torna uma excelente alternativa para análises toxicológicas em amostras de cabelo. A MEPS é bastante vantajosa, reduzindo o uso de solventes e permitindo a reutilização do sorbente (> 100 extrações), o que pode ser economicamente atraente para laboratórios. Embora nos últimos cinco anos as abordagens miniaturizadas tenham despertado um grande interesse académico, poucas implementações têm sido observadas em laboratórios de análises de rotina. Com a relevância e aplicabilidades aqui descritas, esperamos que esse panorama mude num futuro próximo.We would also like to acknowledge the Centro de Competências em Cloud Computing in the form of a fellowship (C4_WP2.6_M1 – Bioinformatics; Operação UBIMEDICAL – CENTRO-01-0145- FEDER-000019 – C4 – Centro de Competências em Cloud Computing, supported by Fundo Europeu de Desenvolvimento Regional (FEDER) through the Programa Operacional Regional Centro (Centro 2020))

Low-Cost Carriers Socio-Economic Impact in Tourism Development: The Case of Faro’s Airport Hinterland

Due to airline market deregulation in Europe LCC’s (Low-Cost Carriers) depicts a fast growth in the last decade and it’s expected that this growth continues in the next years. Also, thisEuropean airline market change has affected the way many airports operate and it’s likely that thischange impacts not only airports performance and efficiency, but also its hinterland. Tourism development is one of the main beneficiaries of this new paradigm. Airport hinterland definition is very broad.Traditionally hinterland is measured by several kilometres’ radiuscentred on the airport or a certain travel time from one pointto the airport. However, this definition may be considered too simplistic because there are other indicators that can determine such influence area.Therefore, current literature prefers to do it in combination with certain pre-defined criteria: airport impact or effectiveness assessment, or a tourism destination perspective. This paper presents a study on airport hinterland socio-economic activity, with emphasis on tourism development due to LCC operations. Thestudy analyses socio-economic indicators from 2006 to 2012, a period whichrepresents the full operation entry and evolution of LCC’s in the Portuguese south airport of Faro. Results are aligned with the expectations created by literature review as well by the empirical preliminary analysis from the case study, showing a possible correlation between LCC movements and some hinterland indicators with direct impact on the tourism sector.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

New Method for the Monitoring of Antidepressants in Oral Fluid Using Dried Spot Sampling

The increase in the consumption of antidepressants is a public health problem worldwide, as these are a class of compounds widely used in the treatment of several illnesses, such as depression and anxiety. This work aimed to develop and optimize a method for the quantification of a number of antidepressants and their metabolites (fluoxetine, venlafaxine, O-desmethylvenlafaxine, citalopram, sertraline, and paroxetine) in 100 μL of oral fluid using the dried saliva spots (DSS) sampling approach and gas chromatography coupled with tandem mass spectrometry (GC–MS/MS). The method was validated, presenting linearity within the studied range, with detection and quantification limits ranging between 10 and 100 ng/mL, and coefficients of determination (R2) of at least 0.99 for all analytes. Recoveries were between approximately 13 and 46%. The analysis of precision and accuracy presented acceptable coefficients of variation and relative errors, considering the criteria usually accepted in the validation of bioanalytical procedures. The method herein described is the first to be reported using DSS for the extraction of antidepressants, proving to be a sensitive, simple, and fast alternative to conventional techniques, and capable of being routinely applied in clinical and forensic toxicology scenariosinfo:eu-repo/semantics/publishedVersio

The potential of dried saliva spots for antidepressant drugs monitoring

Comunicação apresentada no 10º Congresso Iberoamericano de Ciências Farmacêuticas, Coimbra, Outubro de 2023. Abstract da comunicação publicado na Acta Farmacêutica Portuguesa. vol. de Outubro 2023. ISSN 2182-3340.Introduction: Portugal has one of the highest rates of mental illness in Europe, and the consumption of antidepressants amongst its population has doubled between the years 2013 and 2016. Approximately 30 million packs of medication are prescribed and dispensed annually in this country to treat major depressive disorders. Therapeutic Drug Monitoring (TDM) is a practice established for a small number of drugs, for which there is a direct relationship between concentration and pharmacological effect at the site of action. Commonly, TDM involves measuring drug concentrations in serum, plasma or blood, being complemented with clinical observation measures to assess patient’s condition, support the individualization of therapy, detect changes in the patient´s pathophysiological status or the modification of the drug pharmacokinetics, but also to assess adherence to therapy. Methodology: The present work describes a methodology with great potential for TDM purposes, allowing the determination of antidepressants (fluoxetine, venlafaxine, citalopram, sertraline, paroxetine and metabolites) using 100 μL of oral fluid with dried saliva spots (DSS) and analysis by gas chromatography-tandem mass spectrometry (GC-MS/MS). Results: For both sampling and extraction with DSS, several parameters were optimized using the statistical tool Design of Experiments (DoE), namely: drying and extraction times, extraction solvent and volume. The final optimized conditions were: 1 hour of drying, 1 mL of methanol and 5 minutes of extraction. The method was validated showing linearity within the adopted therapeutic ranges, with limits of detection and quantification between 10 and 100 ng/mL. All validation parameters were assayed according to the SWGTOX guidelines. Discussion: This is the first work that uses DSS to extract antidepressants from oral fluid samples, proving to be a sensitive, simple and fast alternative to conventional techniques and samples used in TDM (solid phase extraction based procedures and plasma samples). It also reveals potential to be routinely applied in TDM and forensic toxicology purposes, as it has been successfully applied to the analysis of authentic patient samples.N/

Implementação de uma infraestrutura de Cloud privada baseada em OpenStack

A constante evolução da Internet e o seu uso cada vez mais generalizado serviram de alavanca para a proliferação de novos serviços e arquiteturas que visam dar resposta à procura do setor privado mas principalmente à necessidade de otimização e exigência de evolução das empresas. Soluções de computação em nuvem, do inglês Cloud Computing, tem vindo a juntar-se ao vocabulário e ao dia-a-dia da área das Tecnologias de Informação e Comunicação e que geralmente se encontra associado a um modelo aplicacional de elevada flexibilidade onde um diversificado leque de recursos e serviços são entregues aos utilizadores finais por meio de uma ligação à Internet. Partindo da premissa que o progresso e o aperfeiçoamento devem começar pela empresa, este trabalho tem como objetivo a implementação de uma infraestrutura privada de Cloud Computing utilizando software open source a fim de responder aos desafios colocados pelos órgão de gestão às áreas de TIC relativamente às questões de controlo de custos, em termos de aquisição de equipamentos e licenciamento, disponibilizando de forma mais ágil uma infraestrutura altamente personalizável mantendo os elevados padrões de qualidade, segurança e robustez. A implementação de uma solução de Cloud Computing privada com recurso a software open source, o OpenStack, evita que a empresa recorra a soluções proprietárias, por vezes dispendiosas, e permitirá fornecer aos departamentos de pesquisa e desenvolvimento uma plataforma com os recursos pretendidos, por forma a torná-los mais autónomos e independentes na configuração e gestão de servidores sem que coloquem em risco a infraestrutura de TIC da empresa. Na presente dissertação é possível ficar a conhecer a plataforma do OpenStack, os seus elementos constituintes e a forma como estes se interligam de modo a apresentar uma solução de Cloud, tendo esta experiência permitindo ainda demonstrar que é possível implementar uma infraestrutura de Cloud Computing fiável com recurso a software open source, equipamentos de gama doméstica e, ainda assim, obter bons níveis de desempenho. A informação é muita e por vezes dispersa, o que, aliado ao interesse da empresa em explorar o tema da Cloud serviu de incentivo ao estudo da plataforma do OpenStack e das várias implementações possíveis. De modo a responder ao objetivo de como criar uma IaaS economicamente viável, tanto na utilização de software open source como no recurso ao hardware, foi feita uma implementação prática da solução onde se recorreu a equipamentos utilizados diariamente na empresa. O estudo apresentado na empresa ficou concluído com a avaliação de performance da solução

O papel da sinuplastia por balão no tratamento da rinossinusite crónica

Trabalho Final do Curso de Mestrado Integrado em Medicina, Faculdade de Medicina, Universidade de Lisboa, 2017A rinossinusite é uma das doenças crónicas mais prevalentes, afetando milhões de pessoas em todo o mundo. No entanto, o termo rinossinusite engloba uma variedade de apresentações clínicas, desde doença aguda a crónica ou bacteriana a viral. A sua forma crónica é encontrada nas mais diversas especialidades. Apesar de não apresentar mortalidade significativa, a sua morbilidade e os custos que acarreta podem ser importantes. O tratamento médico é a primeira opção no controlo sintomático, no entanto este pode ser difícil, sobretudo na forma crónica da doença. Quando falha então o tratamento conservador, pode ser necessário recorrer a uma abordagem cirúrgica para conseguir um controlo satisfatório da doença. Esta abordagem terapêutica tem sofrido um grande desenvolvimento nos últimos anos, com novas técnicas a serem desenvolvidas como alternativa à cirurgia convencional. Uma dessas técnicas é a sinoplastia por balão, que difere da cirurgia convencional por defender uma abordagem não traumática da mucosa. No entanto, apesar da elevada prevalência mundial da rinossinusite crónica, a informação credível relativamente a este tema é escassa e por vezes discrepante, não estando claro qual o papel desta alternativa cirúrgica. O objetivo deste trabalho final de Mestrado é então analisar a literatura existente e perceber qual o ponto de situação desta técnica, identificando as suas vantagens e desvantagens, e entender qual o seu papel, atual e futuro, no tratamento da rinossinusite crónica.Rhinosinusitis is one of the most prevalent diseases, affecting millions of people worldwide. However, the term rhinosinusitis involves a variety of clinical presentations, from acute to chronic, or bacterial to viral disease. Its chronic presentation can be found in a vast range of medical specialties. Despite its mortality rates are almost insignificant, its influence on quality of life and healthcare associated costs can be quite high. Medical treatment is the first choice for symptom management. However, such approach can be quite challenging, especially in its chronic presentation, and clinicians may be forced to consider a surgical procedure to achieve a satisfactory treatment. The surgical approach to chronic rhinosinusitis has been going through a major development in the last years, with new techniques being developed. One technique, balloon sinuplasty, which defends a non-traumatic approach to the nasal mucosa, stands out among the others. Despite the high worldwide prevalence of the disease, there is a lack of high evidence data on this matter, thus not enabling to establish a clear role to the balloon sinuplasty in the treatment of chronic rhinosinusitis. The objective of this paper is to analyse the available literature and to understand where this technique stands, identifying its advantages and disadvantages, and its potential role in the treatment of chronic rhinosinusitis

Exposição ocupacional na manipulação de citotóxicos

Os fármacos antineoplásicos são de extrema importância para o tratamento de doenças oncológicas. No entanto há questões relacionadas com riscos para a saúde que estes podem representar para os profissionais de saúde que estão em contacto com este tipo de fármacos. Muitos procedimentos usados na preparação e administração de fármacos perigosos são suscetíveis a derrames e extravasamentos expondo tanto os profissionais de saúde que estão em contacto com o fármaco, como também doentes e familiares, a esses agentes nocivos. Estudos concluíram que a exposição ocupacional a fármacos considerados perigosos, incluindo fármacos antineoplásicos, pode provocar erupções cutâneas, infertilidade, irritação ocular, dor de cabeça, aborto espontâneo, danos genéticos, inflamação da garganta, tosse crónica, tonturas, e até leucemia ou outros cancros. Alguns testes, como testes de genotoxicidade, quantificação do nível de fármacos antineoplásicos em superfícies, ou a análise de amostras de urina dos profissionais de saúde estão já implementados em alguns países com o objetivo de identificar os fatores de risco da exposição ocupacional a este tipo de fármacos. Para prevenir a exposição a fármacos potencialmente perigosos, as guidelines sugerem que os profissionais de saúde devem usar equipamento de proteção individual e manusear os fármacos num ambiente controlado, localizado numa sala própria e exclusiva para este tipo de fármacos. A utilização de alguns equipamentos, tais como sistemas de transferência em circuito fechado, também é importante na prevenção da exposição ocupacional dos profissionais de saúde. Sendo assim, pretende-se com esta monografia estudar os riscos da exposição ocupacional a fármacos potencialmente perigosos, as suas consequências para a saúde dos profissionais de saúde, doentes e familiares, e ainda os métodos e comportamentos a adotar para diminuir a exposição

Optimization and validation of a procedure using the dried saliva spots approach for the determination of tobacco markers in oral fluid

Exposure to tobacco smoke is one of the most common causes of premature death worldwide and is the cause of 8 million deaths annually. We have developed, optimized, and validated a procedure for the detection of nicotine, cotinine and trans-3-hydroxycotinine (biomarkers of tobacco exposure) in oral fluid using the dried saliva spots sampling approach and gas chromatography coupled to tandem mass spectrometry, thus allowing the distinction between active and passive smokers. For optimization, four parameters were evaluated, namely extraction solvent, extraction solvent volume, extraction time and spots drying time. During method validation, the parameters selectivity, linearity, precision and accuracy, recovery, stability, and dilution factor were assessed. Linearity was obtained for all target analytes in the concentration range of 10–200 ng/mL allowing the quantification of compounds up to 1000 ng/mL considering the dilution factor. The method recoveries ranged from 29.2% to 43.30% for nicotine, 66.60–89.10% for cotinine and 80.30–92.80% for trans-3-hydroxycotinine, while achieving intra-day, inter-day and intermediate precision and accuracy values never higher than 10.37% and ±6.62% respectively for all compounds. The herein described analytical method is the first to allow the determination of tobacco biomarkers in oral fluid using dried saliva spots, which is considered a sensitive, simple and low-cost alternative to conventional methods.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Evaluation of hair hydrolysis and MEPS columns for the detection of amphetamines derivatives in hair

Comunicação apresentada no 10º Congresso Iberoamericano de Ciências Farmacêuticas, Coimbra, Outubro de 2023. Abstract da comunicação publicado na Acta Farmacêutica Portuguesa. vol. de Outubro 2023. ISSN 2182-3340.Introduction: Different extraction and cleanup procedures have been used to identify amphetamines in hair samples. The microextraction by packed sorbent (MEPS), a miniaturized approach of the classic solid-phase extraction (SPE), has only been used so far to determine the presence of amphetamine (AMP) and methamphetamine (MAMP) in hair. The aim of this work was to evaluate different hair sample extraction conditions, namely hydrolysis, to maximize the detection of AMP, MAMP, MDA, MDMA, MDE, and MBDB in combination with MEPS and GC-MS. Methodology: Pulverized authentic hair (50mg) was incubated with 500μL of NaOH 1M at 80ºC for 1H, 60ºC overnight and 45ºC overnight1. After incubation, the extracts were neutralized with 50μL of 10M HCl and subsequently centrifuged. The supernatant was tested with several conditions to access the most suitable when paired with MEPS clean-up. The studied conditions were as follows: the addition of 500μL of H2O; supernatant filtration followed by addition of H2O; and precipitation with cold ACN followed by centrifugation. After clean-up, 30μL of MBTFA were added for evaporation under nitrogen gas. After being fully dried, 50μL of MBTFA was added and derivatization was done with a microwave oven. Finally, the extract was injected into a GC-MS and analysed. Results: Results obtained from these tests indicated that the best hydrolysis for this purpose was obtained with 500μL NaOH 1M at 45ºC overnight, with the addition of H2O before MEPS clean-up. The clean-up procedure was previously optimized by design of experiments (not being the scope of this study). Furthermore, M1 and C18 MEPS sorbents were tested to check which one would provide cleaner extracts and greater analyte signals. A concentration of 2.00 ng/mg of AMP, MAMP, MDA, MDMA, MDE, and MBDB was used for this test. Discussion: Considering the results, both columns presented similar recoveries for each amphetamine, when using equal hydrolysis and MEPS conditions.N/

Determination of amphetamine-related drugs in hair using MEPS as sample clean-up

Comuniicação apresentada no 27th Meeting of the Society of Hair Testing, Lisboa, 2023Introduction and aims: Different extraction and clean-up protocols have been used for amphetamine-related compounds determination in hair. Microextraction by packed sorbent (MEPS) is a miniaturized version of solidphase extraction (SPE) which has been applied to determine a number of drugs in hair (e.g., opiates, cocaine, ketamine, etc.) [1-4]. However, concerning amphetamine-related drugs, MEPS has only been used in hair for the determination of amphetamine (AMP) and methamphetamine (MAMP). The aim of this work was the development and validation of a method to determine AMP, MAMP, MDA, MDMA, MDE and MBDB in hair using MEPS for sample clean-up. Materials and methods: Hair (50 mg) was incubated with NaOH 1M at 45 °C overnight [5], after which HCl 10M was added for neutralization and the solution was centrifuged. The MEPS procedure for extract clean-up was optimized using the Design of Experiments (DoE) approach, and the final steps were: conditioning (1 x 250 μL of methanol and 1 x 250 μL of deionized water); loading (18 x 100 μL); and elution (7 x 100 μL of 2% NH4OH in acetonitrile). To the eluted extract, 30 μL of MBTFA was added (to avoid loss of analytes), and extracts were evaporated to dryness, following microwave-assisted derivatization with 50 μL of MBTFA. A gas chromatography coupled to mass spectrometry (GC-MS) system was used for determination. Results and discussion: The MEPS procedure resulted in recoveries of 8-14% for AMP, 14-20% for MAMP, 10-15% for MDA, 18-28% for MDMA, 25-43% for MDE and 34-52% for MBDB, in the linear range of 0.2-5.0 ng/mg. Precision and accuracy of the developed method were in accordance with the statements of international guidelines for method validation. Conclusions: This is the first analytical method using MEPS coupled to GC-MS to determine the selected amphetamines in hair samples, proving to be a great alternative to the classic procedures, being rapid, eco-friendly and less expensive.N/