Identificação química e estudos farmacológicos dos constituintes da espécie Ipomoea pes-caprae (Convolvulaceae): estudos em química medicinal de análogos do ácido gálico

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Filosofia e Ciências Humanas. Programa de Pós-Graduação em Química.O presente estudo descreve o isolamento, identificação e efeitos antinociceptivos de diversos constituintes de Ipomoea pes-caprae, como a glochidona, ácido betulínico, acetatos de a- e b-amirina, isoquercitrina, entre outros, bem como do extrato metanólico e das frações acetato de etila e aquosa, das partes aéreas da planta. Os resultados farmacológicos indicam que os constituintes de Ipomoea pes-caprae exibem efeitos antinociceptivos significativos em dois modelos clássicos de dor em camundongos. Tais resultados confirmam, pelo menos em parte, o uso popular de I. pes-caprae no tratamento de processos dolorosos e inflamatórios. Uma série de 49 compostos, incluindo ésteres, amidas e anidridos, foram sintetizados usando o ácido gálico como modelo. As propriedades analgésicas desta série foram estudadas no modelo de contorções abdominais e no modelo da formalina, em camundongos. Os resultados farmacológicos mostram que nesta série existem compostos apresentando potência analgésica comparável ou maior do que a apresentada pela aspirina e paracetamol, fármacos amplamente utilizados na clínica médica. Tais compostos foram também avaliados quanto a sua atividade antifúngica usando o método de diluição em ágar. Os resultados biológicos mostram que alguns dos compostos exibem um largo espectro de atividade contra fungos do grupo dos dermatófitos, em particular contra Microsporum canis, Microsporum gypseum, Tricophyton mentagrophytes, Tricophyton rubrum, e Epidermophyton floccosum. Valores da DI50 para o conjunto de 49 compostos foram empregados para desenvolver um modelo de QSAR (relações quantitativas estrutura-atividade), o qual relaciona a estrutura aos valores da potência analgésica. O modelo de QSAR desenvolvido apresenta poder preditivo substancial para o planejamento de novos análogos do ácido gálico possuindo maior potência analgésica

Isolamento e identificação de triterpenos friedelanos de maytenus robusta Reiss

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciencias Fisicas e MatematicasMaytenus robusta Reiss (Celastaceae) é uma planta característica da floresta ombrófila densa (Floresta Atlântica), apresentando maior densidade nas atuais áreas em formações secundárias. Por ser do mesmo gênero da espinheira-santa (Maytenus ilicifolia Reiss), uma planta consagrada no tratamento das afecções gástricas, optou-se em avaliar sua composição química. O fracionamento do extrato bruto hidroalcoólico de Maytenus robusta Reiss proporcionou a obtenção de várias frações as quais foram analisadas por cromatografia gasosa de alta resolução e métodos espectroscópicos. A fração MR 1-10, apresentou alto conteúdo em óleo, e foi submetida a análise por CGAR-EM, resultando na identificação de uma série homóloga de ésteres metílicos ramificados no carbono-, e de um esterol. A fração MR 20-23 mostrou alto rendimento de um sólido branco cuja análise por cromatografia gasosa indicou a presença de uma série de triterpenos sendo seis deles majoritários. Esta fração foi submetida a sucessivas purificações por cromatografia em coluna levando ao isolamento e identificação de quatro triterpenos friedelanos: 3-oxo friedelano (friedelina), 3,15-dioxo friedelano, 3-oxo-29-hidroxi friedelano e 3-hidroxi friedelano (friedelinol). Um flavonóide também foi siolado, a quercetina. Estas estruturas foram determinadas através da análise dos dados espectrais de IV, UV, RMN 1H, RMN 13C, DEPT, técnicas bidimensionais e Massas. O extrato bruto hidroalcoólico foi também submetido a metodologia clássica de extração de alcalóides. A análise preliminar da fração alcaloídica, utilizando CCD com reveladores específicos e CGAR-EM revelou a presença de três alcalóides do tipo ansamacrolideos

Hyperinsulinaemic hypoglycaemia - a diagnostic challenge. A report of two atypical cases

Objectives: The authors describe 2 atypical cases of patients with hypoglycaemia, suspected for insulinoma. Methods: The 2 reports are accompanied by a concise review of the literature. Results: Patient 1 had a distal pancreatectomy performed for suspected insulinoma, and was diagnosed with a glucagonoma and beta-cell hyperplasia (nesidioblastosis). To the authors’s knowledge, co-existing glucagonoma and nesidioblastosis had not been previously reported. Patient 2 was diagnosed with a benign insulinoma and 5 years later with metastatic disease. Conclusion: The authors conclude that insulinomas are rare entities which often present a diagnostic and therapeutic challenge. In such cases, patient referral to tertiary multidisciplinary centers is recommended

Enzyme kinetics, structural analysis and molecular modeling studies on a series of Schistosoma mansoni PNP inhibitors

The enzyme purine nucleoside phosphorylase from Schistosoma mansoni (SmPNP) is an attractive molecular target for the development of novel drugs against schistosomiasis, a neglected tropical disease that affects about 200 million people worldwide. In the present work, enzyme kinetic studies were carried out in order to determine the potency and mechanism of inhibition of a series of SmPNP inhibitors. In addition to the biochemical investigations, crystallographic and molecular modeling studies revealed important molecular features for binding affinity towards the target enzyme, leading to the development of structure-activity relationships (SAR).A enzima purina nucleosídeo fosforilase do parasita Schistosoma mansoni (SmPNP) é um alvo molecular atrativo para o desenvolvimento de candidatos a novos fármacos para o tratamento da esquistossomose, doença tropical negligenciada que afeta mais de 200 milhões de pessoas em todo mundo. No presente trabalho, estudos de cinética enzimática foram conduzidos para a determinação da potência e do mecanismo de inibição de uma série de inibidores da enzima SmPNP. Além das investigações bioquímicas, estudos cristalográficos e de modelagem molecular revelaram importantes bases moleculares para a afinidade de ligação frente à enzima alvo, levando ao desenvolvimento de relações entre a estrutura e atividade (SAR).(FAPESP) São Paulo Research FoundationFundação de Amparo à Pesquisa do Estado da Bahia (FAPESB)(CNPq) National Council for Scientific and Technological Developmen

Structure of an Odorant-Binding Protein from the Mosquito Aedes aegypti Suggests a Binding Pocket Covered by a pH-Sensitive “Lid”

Background: The yellow fever mosquito, Aedes aegypti, is the primary vector for the viruses that cause yellow fever, mostly in tropical regions of Africa and in parts of South America, and human dengue, which infects 100 million people yearly in the tropics and subtropics. A better understanding of the structural biology of olfactory proteins may pave the way for the development of environmentally-friendly mosquito attractants and repellents, which may ultimately contribute to reduction of mosquito biting and disease transmission. Methodology: Previously, we isolated and cloned a major, female-enriched odorant-binding protein (OBP) from the yellow fever mosquito, AaegOBP1, which was later inadvertently renamed AaegOBP39. We prepared recombinant samples of AaegOBP1 by using an expression system that allows proper formation of disulfide bridges and generates functional OBPs, which are indistinguishable from native OBPs. We crystallized AaegOBP1 and determined its three-dimensional structure at 1.85 angstrom resolution by molecular replacement based on the structure of the malaria mosquito OBP, AgamOBP1, the only mosquito OBP structure known to date. Conclusion: The structure of AaegOBP1 (= AaegOBP39) shares the common fold of insect OBPs with six alpha-helices knitted by three disulfide bonds. A long molecule of polyethylene glycol (PEG) was built into the electron-density maps identified in a long tunnel formed by a crystallographic dimer of AaegOBP1. Circular dichroism analysis indicated that delipidated AaegOBP1 undergoes a pH-dependent conformational change, which may lead to release of odorant at low pH (as in the environment in the vicinity of odorant receptors). A C-terminal loop covers the binding cavity and this ""lid"" may be opened by disruption of an array of acid-labile hydrogen bonds thus explaining reduced or no binding affinity at low pH.National Science Foundation (NSF) [0918177]National Institutes of Health (NIH) NIAIDBrazilian National Institutes of Science and Technology: Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientifico e Tecnologico (CNPq) [573607/2008-7]Brazilian National Institutes of Science and Technology: FAPESP [08/57910-0

Antiplasmodial and trypanocidal activity of violacein and deoxyviolacein produced from synthetic operons.

BACKGROUND: Violacein is a deep violet compound that is produced by a number of bacterial species. It is synthesized from tryptophan by a pathway that involves the sequential action of 5 different enzymes (encoded by genes vioA to vioE). Violacein has antibacterial, antiparasitic, and antiviral activities, and also has the potential of inducing apoptosis in certain cancer cells. RESULTS: Here, we describe the construction of a series of plasmids harboring the complete or partial violacein biosynthesis operon and their use to enable production of violacein and deoxyviolacein in E.coli. We performed in vitro assays to determine the biological activity of these compounds against Plasmodium, Trypanosoma, and mammalian cells. We found that, while deoxyviolacein has a lower activity against parasites than violacein, its toxicity to mammalian cells is insignificant compared to that of violacein. CONCLUSIONS: We constructed E. coli strains capable of producing biologically active violacein and related compounds, and propose that deoxyviolacein might be a useful starting compound for the development of antiparasite drugs

Synthesis of the macrolactone of migrastatin and analogues with potent cell-migration inhibitory activity

The synthesis of the macrolactone core of migrastatin 2, its potent anti-metastasis analogue 34, and ester derivatives 35 and 38 are reported. The approach involves the use of a dihydroxylation reaction to establish the desired C-8 stereocenter followed by a metathesis cyclization reaction. The effects of the compounds on the migration and invasion of human breast cancer cells were evaluated by using the wound-healing and the Boyden-chamber cell-migration and cell-invasion assays. The results revealed a high potency of the macrolactones 2 and 34 and the ester analogues 35 and 38, which suggests they have potential as antimetastatic agents.Fundo de Apoio ao Ensino e Pesquisa da UNICAMP (FAEP-UNICAMP)FAPESPCNPqInstituto Nacional de Ciência e Tecnologia de Fármacos e Medicamentos (INCT-INOFAR

Genome-wide association study identifies multiple susceptibility loci for pancreatic cancer

We performed a multistage genome-wide association study including 7,683 individuals with pancreatic cancer and 14,397 controls of European descent. Four new loci reached genome-wide significance: rs6971499 at 7q32.3 (LINC-PINT, per-allele odds ratio (OR) = 0.79, 95% confidence interval (CI) 0.74-0.84, P = 3.0 x 10(-12)), rs7190458 at 16q23.1 (BCAR1/CTRB1/CTRB2, OR = 1.46, 95% CI 1.30-1.65, P = 1.1 x 10(-10)), rs9581943 at 13q12.2 (PDX1, OR = 1.15, 95% CI 1.10-1.20, P = 2.4 x 10(-9)) and rs16986825 at 22q12.1 (ZNRF3, OR = 1.18, 95% CI 1.12-1.25, P = 1.2 x 10(-8)). We identified an independent signal in exon 2 of TERT at the established region 5p15.33 (rs2736098, OR = 0.80, 95% CI 0.76-0.85, P = 9.8 x 10(-14)). We also identified a locus at 8q24.21 (rs1561927, P = 1.3 x 10(-7)) that approached genome-wide significance located 455 kb telomeric of PVT1. Our study identified multiple new susceptibility alleles for pancreatic cancer that are worthy of follow-up studies