Análisis de la alergenicidad de componentes proteicos de soja que presentan reactividad cruzada con caseínas bovinas

La alergia a la leche de vaca es la causa más común de alergia alimentaria en lactantes y niños, probablemente porque la LV constituye uno de los primeros antígenos alimentarios a los que resultan expuestos los niños en la primera infancia. Si bien generalmente esta situación patológica resulta transitoria, ya que la mayoría de los niños afectados desarrollan tolerancia con el tiempo, los pacientes son sometidos a tratamientos con dietas libres de LV y sus derivados. En pacientes con edades menores a los dos años se emplean sustitutos lácteos, siendo los más empleados los hidrolizados extensivos de proteínas de leche. También suelen incluirse fórmulas alternativas como las formuladas a base de proteínas de soja o sus derivados. Sin embargo, se ha reportado que un cierto porcentaje de pacientes con alergia a leche de vaca muestran una intolerancia clínica a las mismas. Descartando la existencia de proteínas de leche como contaminantes o adulterantes, y considerando que los niños afectados probablemente no han estado en contacto con antígenos de soja, dado que no es un alimento común en la dieta de un lactante, la intolerancia clínica podría explicarse por la presencia de epitopes de reactividad cruzada entre proteínas de leche bovina y de soja. Sobre la base de estas observaciones, en el presente trabajo de tesis se planteó dilucidar las bases moleculares de este fenómeno y desarrollar herramientas y conocimientos que permitan en un futuro desarrollar terapias alternativas. Los objetivos generales planteados fueron los siguientes: o Caracterizar la inmunorreactividad in vitro e in vivo de proteínas de soja empleando distintas herramientas inmunológicas. o Identificar la presencia de epitopes inmunorreactivos presentes en proteínas de soja que compartan homologia secuencial o estructural con caseínas bovinas. o Validar un modelo murino de alergia alimentaria a proteínas de leche bovina para ser empleado como herramienta biológica para el estudio de la reactividad cruzada entre soja y proteínas de leche de vaca, para analizar la alergenicidad de nuevas fórmulas hipoalergénicas y para el desarrollo de nuevas vacunas mucosales a ser empleadas en el tratamiento de la alergia alimentaria.Facultad de Ciencias Exacta

The role of cytokines in the fibrotic responses in Crohn's disease

Crohn's disease is an idiopathic disorder of the gut thought to be caused by a combination of environmental and genetic factors in susceptible individuals. It is characterized by chronic transmural inflammation of the terminal ileum and colon, with typical transmural lesions. Complications, including fibrosis, mean that between 40 and 70% of patients require surgery in the first 10 years after diagnosis. Presently, there is no evidence that the current therapies which dampen inflammation modulate or reverse intestinal fibrosis. In this review, we focus on cytokines that may lead to fibrosis and stenosis and the contribution of experimental models for understanding and treatment of gut fibrosis.Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológico

Allergenic Milk Proteins. Friend or Foe Nutritional Proteins?

Allergies are complex inflammatory diseases with a not fully understood etiology. Several factors, including genetic, environmental, age of exposition, diet, etc., are associated with the induction of these diseases. The incidence of allergies has increased during the last decades and constitutes the most common immune-based disease worldwide. According to the hygiene hypothesis, a lower exposure to pathogens and commensal microbes that reside in the intestinal lumen is responsible for the rapid rise of the prevalence of atopic and allergic disorders, specifically food allergy. To overcome this tendency, the immunological mechanisms underlying this pathology should be better understood, which will undoubtedly impact the development of novel therapies. A large body of evidence demonstrates that immunotherapies constitute corrective treatments of the impaired regulation of the immune system in allergic patients

The Major Soybean Allergen Gly m Bd 28K Induces Hypersensitivity Reactions in Mice Sensitized to Cow's Milk Proteins

Reactions to soy have been reported in a proportion of patients with IgE-mediated cow’s milk allergy (CMA). In this work, we analyzed if Gly m Bd 28K/P28, one of the major soybean allergens, is a cross-reactive allergen with cow milk proteins (CMP). We showed that P28 was recognized by IgE sera from CMA patients and activated human peripheral basophils degranulation. Moreover, IgE sera of mice exclusively sensitized to CMP recognized P28. Splenocytes from sensitized animals secreted IL-5 and IL-13 when incubated with CMP or soy proteins, but only IL-13 when treated with P28. In addition, a skin test was strongly positive for CMP and weakly positive for P28. Remarkably, milk-sensitized mice showed hypersensitivity symptoms following sublingual challenge with P28 or CMP. With the use of bioinformatics’ tools seven putative cross-reactive epitopes were identified. In conclusion, using in vitro and in vivo tests we demonstrated that P28 is a novel cross-reactive allergen with CMP.Fil: Candreva, Ángela María. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos; ArgentinaFil: Smaldini, Paola Lorena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos; ArgentinaFil: Curciarello, Renata. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos; ArgentinaFil: Fossati, Carlos Alberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos; ArgentinaFil: Docena, Guillermo H.. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos; ArgentinaFil: Petruccelli, Silvana. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos; Argentin

Contribution of non-immune cells to activation and modulation of the intestinal inflammation

The mucosal immune system constitutes a physical and dynamic barrier against foreign antigens and pathogens and exerts control mechanisms to maintain intestinal tolerance to the microbiota and food antigens. Chronic alterations of the intestinal homeostasis predispose to inflammatory diseases of the gastrointestinal tract, such as Inflammatory Bowel Diseases (IBD). There is growing evidence that the frequency and severity of these diseases are increasing worldwide, which may be probably due to changes in environmental factors. Several stromal and immune cells are involved in this delicate equilibrium that dictates homeostasis. In this review we aimed to summarize the role of epithelial cells and fibroblasts in the induction of mucosal inflammation in the context of IBD. It has been extensively described that environmental factors are key players in this process, and the microbiome of the gastrointestinal tract is currently being intensively investigated due to its profound impact the immune response. Recent findings have demonstrated the interplay between dietary and environmental components, the gut microbiome, and immune cells. “Western” dietary patterns, such as high caloric diets, and pollution can induce alterations in the gut microbiome that in turn affect the intestinal and systemic homeostasis. Here we summarize current knowledge on the influence of dietary components and air particulate matters on gut microbiome composition, and the impact on stromal and immune cells, with a particular focus on promoting local inflammation.Fil: Curciarello, Renata. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos; Argentina. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Departamento de Ciencias Biológicas; ArgentinaFil: Canziani, Karina Eva. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos; Argentina. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Departamento de Ciencias Biológicas; ArgentinaFil: Docena, Guillermo H.. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos; Argentina. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Departamento de Ciencias Biológicas; ArgentinaFil: Muglia, Cecilia Isabel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos; Argentina. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Departamento de Ciencias Biológicas; Argentin

ESTUDIO DE FIBROBLASTOS DE MUCOSA INTESTINAL EN LA INFLAMACIÓN INTESTINAL CRÓNICA: EVALUACIÓN DE MARCADORES DE IMPORTANTE VALOR PREDICTIVO EN EL DESARROLLO DE CÁNCER COLORRECTAL ASOCIADO

La mucosa intestinal requiere de un delicado equilibrio homeostático y balance de poblaciones celulares para mantener la tolerancia a antígenos luminales inocuos y responder a microorganismos patógenos. En procesos inflamatorios crónicos se altera este estado. Esta inflamación, que puede ser de bajo grado o subclínico, y persistir durante años, genera cambios en la mucosa que pueden contribuir al desarrollo del cáncer colorrectal (CCR) o procesos inflamatorios como los que ocurren en las enfermedades inflamatorias intestinales (EII), siendo colitis ulcerosa (CU) y la enfermedad de Crohn (EC), las más estudiadas. Se conocen varias vías de señalización en común entre la inflamación intestinal y el CCR, y existe abundante conocimiento sobre las etapas de la progresión tumoral en CCR, y las vías de señalización, pero no se han podido desarrollar terapias efectivas para el mismo, por ello se hace hincapié en la detección temprana de la enfermedad. En los últimos años ha cobrado relevancia el microambiente tumoral como componente fundamental del proceso canceroso para la búsqueda de marcadores predictivos de esta patología. Entre las diferentes poblaciones celulares intestinales, los fibroblastos juegan un papel importante en la homeostasis intestinal y en la patogénesis de las EII. Los miofibroblastos subepiteliales de intestino se activan en condiciones inflamatorias e interaccionan con las células epiteliales mediando el remodelamiento de la matriz extracelular intestinal y la fibrosis asociada a la inflamación. Dado este rol importante en las EII y también como células del estroma en el microambiente tumoral, proponemos estudiar estas células en diferentes estadios de inflamación intestinal (EII, tejidos de pacientes sin lesiones mucosales macroscópicas y pacientes con lesiones pre-cancerosas y cancerosas), buscando marcadores de inflamación y activación de fibroblastos, con posible valor predictivo en desarrollo de CCR. Por lo tanto, como hipótesis de trabajo proponemos que la inflamación persistente condiciona la activación de los fibroblastos de la mucosa intestinal, los cuales contribuyen al desarrollo tumoral estableciendo un ambiente y estroma favorable para la aparición de cáncer colorrectal. El estudio de los fibroblastos en estadios previos al CCR permite encontrar marcadores de activación asociados, favoreciendo el diagnóstico temprano, y por lo tanto, permitiendo la implementación de estrategias terapéuticas preventivas

ESTUDIO DE LA INMUNOBIOLOGÍA DE COMPONENTES INMUNES MUCOSALES INVOLUCRADOS EN LA FIBROSIS DE PATOLOGÍAS EOSINOFÍLICAS

La alergia alimentaria es un síndrome que puede presentarse bajo diferentes entidades clínicas, probablemente con distintos mecanismos inmunopatogénicos, lo cual determina que se trate de una patología muy heterogénea y variable. Las enfermedades eosinofílicas (colitis, esofagitis, enteritis, etc.) son patologías inducidas por la exposición a determinados alergenos alimentarios y se caracterizan por un marcado infiltrado celular inflamatorio dominado por eosinófilos. En estas patologías el tracto gastrointestinal se encuentra afectado por un proceso inflamatorio, desencadenado principalmente por algunos alimentos. Como consecuencia, la función de barrera inmune se ve afectada y eso da lugar a una mayor probabilidad de lesiones en el compartimento epitelial (mediadas por la presencia de microorganismos, alergenos o cualquier otro antígeno o agente irritante) que promueven un aumento en la producción de citoquinas pro-inflamatorias en la mucosa intestinal. Si bien se desconoce la etiología de las patologías eosinofílicas, se sabe por distintos estudios, que intervienen factores genéticos y ambientales, por lo cual se trata de enfermedades multifactoriales, que se manifiestan con síntomas muy consistentes tales como disfagia, reflujo gastro-esofágico, dolor abdominal, diarrea, obstrucción esofágica y hasta shock anafiláctico. Por lo tanto, en este proyecto proponemos ahondar en los mecanismos que determinan que estas patologías se manifiesten. Estudiaremos el rol de las células epiteliales y endoteliales del entorno inflamatorio alérgico que favorece la acumulación de eosinófilos y la activación de fibroblastos, en el inicio del proceso de fibrosis en colon y esófago. Para ello, contaremos con biopsias de pacientes con esofagitis eosinofílica y líneas celulares humanas de tipo epiteliales, endoteliales, fibroblastos y eosinófilos. Consideramos que los resultados que surjan de este proyecto permitirán alcanzar una mejor y más profunda comprensión de la patogénesis de las patologías eosinofílicas, que podrían representar una nueva manifestación de las alergias alimentarias. &nbsp

The role of cytokines in the fibrotic responses in Crohn's disease

Crohn's disease is an idiopathic disorder of the gut thought to be caused by a combination of environmental and genetic factors in susceptible individuals. It is characterized by chronic transmural inflammation of the terminal ileum and colon, with typical transmural lesions. Complications, including fibrosis, mean that between 40 and 70% of patients require surgery in the first 10 years after diagnosis. Presently, there is no evidence that the current therapies which dampen inflammation modulate or reverse intestinal fibrosis. In this review, we focus on cytokines that may lead to fibrosis and stenosis and the contribution of experimental models for understanding and treatment of gut fibrosis.Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológico

Contribution of Non-immune Cells to Activation and Modulation of the Intestinal Inflammation

The mucosal immune system constitutes a physical and dynamic barrier against foreign antigens and pathogens and exerts control mechanisms to maintain intestinal tolerance to the microbiota and food antigens. Chronic alterations of the intestinal homeostasis predispose to inflammatory diseases of the gastrointestinal tract, such as Inflammatory Bowel Diseases (IBD). There is growing evidence that the frequency and severity of these diseases are increasing worldwide, which may be probably due to changes in environmental factors. Several stromal and immune cells are involved in this delicate equilibrium that dictates homeostasis. In this review we aimed to summarize the role of epithelial cells and fibroblasts in the induction of mucosal inflammation in the context of IBD. It has been extensively described that environmental factors are key players in this process, and the microbiome of the gastrointestinal tract is currently being intensively investigated due to its profound impact the immune response. Recent findings have demonstrated the interplay between dietary and environmental components, the gut microbiome, and immune cells. “Western” dietary patterns, such as high caloric diets, and pollution can induce alterations in the gut microbiome that in turn affect the intestinal and systemic homeostasis. Here we summarize current knowledge on the influence of dietary components and air particulate matters on gut microbiome composition, and the impact on stromal and immune cells, with a particular focus on promoting local inflammation

The Major Soybean Allergen Gly m Bd 28K Induces Hypersensitivity Reactions in Mice Sensitized to Cow's Milk Proteins

Reactions to soy have been reported in a proportion of patients with IgE-mediated cow’s milk allergy (CMA). In this work, we analyzed if Gly m Bd 28K/P28, one of the major soybean allergens, is a cross-reactive allergen with cow milk proteins (CMP). We showed that P28 was recognized by IgE sera from CMA patients and activated human peripheral basophils degranulation. Moreover, IgE sera of mice exclusively sensitized to CMP recognized P28. Splenocytes from sensitized animals secreted IL-5 and IL-13 when incubated with CMP or soy proteins, but only IL-13 when treated with P28. In addition, a skin test was strongly positive for CMP and weakly positive for P28. Remarkably, milk-sensitized mice showed hypersensitivity symptoms following sublingual challenge with P28 or CMP. With the use of bioinformatics’ tools seven putative cross-reactive epitopes were identified. In conclusion, using in vitro and in vivo tests we demonstrated that P28 is a novel cross-reactive allergen with CMP.Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de AlimentosInstituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológico