Biocontrole da mancha-bacteriana e da pinta-preta por bactérias epifíticas em tomateiro

The objective of this work was to evaluate in vitro and in vivo biocontrol of Xanthomonas vesicatoria) and early blight (Alternaria solani) by the epiphytic bacteria Paenibacillus macerans and Bacillus pumilus. Tomato plants were previously sprayed with epiphytic bacteria, benzalkonium chloride and PBS buffer and, after four days, they were inoculated with A. solani and X. vesicatoria. To determine the phytopathogenic bacteria population, leaflet samples were collected from each treatment every 24 hours, for seven days, and plated on semi-selective medium. The effect of epiphytic bacteria over phytopathogens was performed by the antibiosis test and antagonistic activity measured by inhibition zone diameter. The epiphytic and benzalkonium chloride drastically reduced the severity of early blight and bacterial spot in comparison to the control (PBS). In detached leaflets, the epiphytic bacteria reduced in 70% the number of phytopathogenic bacteria cells in the phylloplane. The antibiosis test showed that the epiphytic bacteria efficiently inhibit the phytopathogens growth. In all the bioassays, the epiphytic bacteria protect tomato plants against the phytopathogens.  O objetivo deste trabalho foi avaliar o biocontrole in vitro e in vivo dos fitopatógenos mancha-bacteriana (Xanthomonas vesicatoria) e pinta-preta (Alternaria solani) pelas bactérias epifíticas Paenibacillus macerans e Bacillus pumilus. Plantas de tomate foram previamente pulverizadas com as bactérias epifíticas, cloreto de benzalcônio e tampão PBS e, após quatro dias, receberam inoculação com A. solani e X. vesicatoria. A fim de determinar a população da bactéria fitopatogênica, amostras de folíolos foram coletadas de cada tratamento em intervalos de 24 horas, durante sete dias, e inoculadas em meio semisseletivo. O efeito das bactérias epifíticas sobre os fitopatógenos foi realizado pelo teste de antibiose e atividade antagônica avaliada pelo diâmetro da zona de inibição. As bactérias epifíticas e o cloreto de benzalcônico reduziram drasticamente a severidade da pinta-preta e da mancha-bacteriana, comparado com o controle (PBS). Em folíolos destacados, as bactérias epifíticas reduziram em até 70% o número de células da bactéria fitopatogênica no filoplano. As bactérias epifíticas inibem eficientemente o crescimento dos fitopatógenos em meio de cultura. Em todos os bioensaios, as bactérias epifíticas protegem as plantas de tomate contra os fitopatógenos

Bioensaio para avaliação massal de actinomicetos antagonistas a Ralstonia solanacearum, em tomateiro

The antagonistic potential of 190 actinomycetes isolated from rhizosphere, rhizoplane and root tissue (endophytics) of tomato was assessed against Ralstonia solanacearum. Tomato seeds were treated with propagules suspension of these actinomycetes in agitation for ten minutes and then, sowed in R. solanacearum naturally infested soil. The plants were grown at 28oC for 45 days, for wilting control, and the percentage of infected plants was recorded. Eighteen actinomycetes showed 100% of control. The best way of inoculation of the antagonists, such as in seeds, in roots or seeds and root soaking was evaluated. The most efficient way of application (control percentage) was by dipping the seeds in a propagules suspension of actinomycetes.O potencial antagonístico de 190 isolados de actinomicetos, obtidos de diferentes solos, da rizosfera, do rizoplano e de tecidos internos de plantas sadias (endófitas), foi avaliado contra Ralstonia solanacearum. Sementes de tomate foram tratadas com suspensão de propágulos destes actinomicetos em agitação por dez minutos, e postas a germinar em solo naturalmente infestado por R. solanacearum em condições controladas por 45 dias, avaliando-se controle da murcha. Dezoito isolados proporcionaram 100% de controle. Foram comparados os métodos de aplicação: por imersão de sementes, imersão de raízes nuas, e imersão de sementes com posterior imersão de raízes. A forma mais eficiente de aplicação, considerando porcentagem de controle, em relação à maioria dos tratamentos, foi a imersão de sementes na suspensão de propágulos

Bioassays for detecting residues of fungitoxic compounds through bioautography, bioelectrophoresis and thin-laver diffusion

Comparou-se a técnica de bioautografia em camada fina com bioeletroforese e difusão em camada fina na detecção de resíduos de fungicidas, tendo como fungo-teste, o Thielaviopsis paradoxa. O método de bioeletroforese e a técnica de difusão em camada fina modificada são descritos e utilizados pela primeira vez. Os métodos foram comparados em bioensaios empregando-se os fungicidas mancozeb, captafol, benomil e triadimefon em diferentes concentrações. As concentrações mínimas detectadas não variaram com as técnicas utilizadas, mas sim com os fungicidas. Obtiveram-se concentrações mínimas de 0,04, 0,06, 1,25 e 1,90 ppm para benomil, captafol, triadimefon e mancozeb, respectivamente. A técnica de bioeletroforese proporcionou maior zona de inibição do fungo-teste quando se empregou alta concentração de fungicidas. A técnica de difusão em camada fina, por não demandar aparelhagem sofisticada, foi tão eficiente como a bioautografia, constituindo-se em método simples e rápido para a detecção e avaliação de resíduos de compostos fungitóxicos.The bioautographic technique on thin-layer chromatograms was compared to bioelectrophoresis and thin-layer diffusion for detecting fungitoxic compound by using Thielaviopsis paradoxa as test fungus. The bioelectrophoresis and thin-layer diffusion methods were described and employed for the first time. The methods were illustrated by bioassaying the fungicides mancozeb, captafol, benomyl and triadimefon in different concentrations. The minimum concentration of fungitoxic compounds detected was the same for three techniques employed, but it did vary with the fungicides. The minimum concentrations detected of benomyl, captafol, triadimefon and mancozeb were 0.04, 0.06, 1.25 and 1.90 ppm, respectively. The bioelectrophoresis technique gave the highest inhibition zone of the test fungus by using higher concentrations of the fungicides. The thin-layer diffusion technique may be of great value, because it is a simple, rapid, sensitive as the bioautographic technique on the detection of fungitoxic compounds

ELABORAÇÃO DE UM MEIO SEMI-SELETIVO COM BASE NA RESISTÊNCIA MÚLTIPLA CONSTITUTIVA DE PSEUDOMONAS PUTIDA (UFV-0073) A ANTIBIÓTICOS

O isolado UFV-0073 de Pseudomonas putida, autóctone do filoplano de tomateiro, foi selecionado para o controle biológico de doenças da parte aérea da cultura. No presente trabalho, foi elaborado um meio semi-seletivo para que no futuro seja estudada a dinâmica populacional desse agente de biocontrole na superfície das folhas, depois da dispensa nas plantas por pulverização, na tentativa de determinar como muitas vezes o agente de biocontrole, deve ser aplicado ao longo do ciclo da cultura. Vários passos foram seguidos para a construção de um meio seletivo com base na resistência múltipla constitutiva (RMC) do isolado UFV-0073 a antibióticos. Primeiramente foram feitos antibiogramas com 52 discos de impregnados com antibióticos e o isolado UFV-0073 foi insensível a nove. Desses, três antibióticos foram utilizados para futura investigação. Em segundo lugar, diferentes diluições dos três antibióticos escolhidos foram testadas, e o isolado UFV-0073 foi insensível até a concentração de 2500 μg.mL-1. Além disso, os três antibióticos foram incorporados juntos ao meio de cultura padrão até 64 μg.mL-1, tornando o meio semi-seletivo. Diluições seriadas do lavado de folhas do tomateiro, foram cultivadas no meio semi-seletivo, indicando que o meio não era repressivo ao agente de biocontrole alvo mas altamente repressivo aos outros microrganismos que vivem na superfície das folhas do tomateiro.Palavras-chave: Controle biológico; Antibiograma; Residente de filoplano

Induction of systemic resistance in tomato by the autochthonous phylloplane resident Bacillus cereus

O objetivo deste trabalho foi investigar se o mecanismo de indução de resistência é responsável pela capacidade de um isolado bacteriano residente no filoplano (Bacillus cereus), obtido de plantas sadias de tomateiro, em controlar diversas doenças da cultura. A fim de investigar o modo de ação envolvido no controle, foi utilizado um isolado de Pseudomonas syringae pv. tomato como patógeno desafiador. A ausência do mecanismo de antibiose contra o patógeno, o aumento significativo dos níveis de peroxidases em plantas expostas ao antagonista e submetidas à inoculação do patógeno desafiador, assim como a sistemicidade da proteção, são evidências que sugerem que o mecanismo de biocontrole em questão se refere à indução de resistência sistêmica (IRS).The objective of this work was to verify if the induced resistance mechanism is responsible for the capacity of a phylloplane resident bacteria (Bacillus cereus), isolated from healthy tomato plants, to control several diseases of this crop. A strain of Pseudomonas syringae pv. tomato was used as the challenging pathogen. The absence of direct antibiosis of the antagonist against the pathogen, the significant increase in peroxidases activity in tomato plants exposed to the antagonist and then inoculated with the challenging pathogen, as well as the character of the protection, are evidences wich suggest that biocontrol efficiency presented by the antagonist in previous works might be due to induced systemic resistance (ISR)

Antagonismo direto e biocontrole da podridão‑mole‑do‑tomateiro pelo uso de procariotas

This work aimed to evaluate prokaryotes to provide direct antagonism and biocontrol of tomato soft rot (Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum). Forty-five bacterial isolates previously selected for biological control of several tomato (Lycopersicon esculentum Mill.) diseases were evaluated using an antibiosis test. 'Santa Clara' tomato seeds were inoculated with potential antagonist isolates and transplanted to a soil infested with the pathogen, in two asseys, at a propagule concentration of OD540 0.45 and 0.65. Antagonists UFV-0005, UFV-043, UFV-BF112, and UFV-0006 protected tomato plants disease.O objetivo deste trabalho foi avaliar procariotas quanto ao potencial de antagonismo direto para o biocontrole da podridão-mole-do-tomateiro (Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum). Avaliaram-se 45 isolados bacterianos pelo teste de antibiose contra o patógeno. Foram feitos dois ensaios em que sementes de tomate (Lycopersicon esculentum Mill.) cv. Santa Clara foram infectadas com isolados antagônicos. As mudas foram transplantadas para solos infestados com suspensões de propágulos P. carotovorum com OD540 de 0,45 e 0,65. Os antagonistas UFV-0005, UFV-043, UFV-BF112 e UFV-0006 foram eficientes em proteger plantas de tomateiro contra a podridão-mole

Sensibilidade de fitobactérias às substâncias com propriedades antimicrobianas presentes em extratos de folhas de fumo inoculadas do patógeno incompatível Pseudomonas syringae pv. pisi

Plantas de fumo (Nicotiana tabacum cv. 'Turkish' foram inoculadas de uma suspensão de células do patógeno incompatível Pseudomonas syringae pv. pisi. Vinte e quatro horas após, porções do limbo foliar, com sintomas típicos de reação de hipersensibilidade, foram submetidas à extração, pelo método de difusão facilitada (17), em etanol, a 40%. O extrato etanólico, concentrado, a vácuo, foi fracionado com acetato de etila. A fração acetato de etila revelou conter substâncias com propriedades antimicrobianas. Fitobactérias patogênicas para o fumo revelaram-se insensíveis à atividade presente no extrato, ao passo que as não-patogênicas para o fumo tiveram sua mutiplicação inibida.Tobacco plants (Nicotiana tabacum cv. 'Turkish') were inoculated with a cell suspension of the incompatible pathogen Pseudomonas syringae pv. pisi. Twenty four hours after inoculation, leaf blade seccions showing symptoms of hypersensitive reaction were extracted by the facilitated diffusion technique (17) in 40% ethanol and the diffusate, after concentration in a flask evaporator, was extracted with ethyl acetate. The ethyl acetate fraction showed to contain antimicrobial substances. Plant pathogenic bacteria compatible with the tobacco plant were insensitive to those antimicrobial substance while the incompatible bacteria had their multiplication inhibited

Isolamento e seleção massal de actinomicetos antagônicos a Agrobacterium tumefaciens

De amostras de solo, coletadas em diferentes locais, procedeu-se ao isolamento, em meio extrato de solo-ágar, de 321 culturas de actinomicetos, Todos foram individualmente testados para verificar a atividade de antibiose “in vim)” contra Agrobacterium tumefaciens e a eficiência em proteger folhas destacadas de Kalanchoe tubiflora contra o patógeno. Combinando-se os resultados destes dois testes, foi possível selecionar 33 actinomicetos come potenciais antagonistas. A repetição dos teste I"in vitro” e “in viva" permitiu estreitar o número de isolamentos de antagonistas promissores para 14, e esses estão sendo testados, em casa de vegetação, para o controle biológico da galha bacteriana da roseira (A. tumefaciens).A population of 321 actinomycete isolates was obtained from soil samples taken from different places, by using soil extract-agar medium for isolation. Every isolate was tested for its ability to inhibit Agrobacterium tumefaciens growth “in vitro” and for their efficiency to protect detached leaves of Kalanchoe tubifloras against the pathogen. Based on these trials, 33 actinomycete isolates were pie-selected as potentials antagonists. The repetition of both tests allowed to mow down to 14 the number of selected isolates, that are being tested for the experimental biological control of rose crown gall (A. tumefaciens) under greenhouse conditions