Ação de fatores enzimáticos na obtenção de hidrolisados protéicos de farinha de trigo com baixo teor de fenilalanina

With the aim of producing wheat flour with low phenylalanine (Phe) content to be introduced in phenylketonuric's diet, the proteins were enzymaticaly extracted, using an alkaline protease from Bacillus licheniformis. Then, the protein extracts were hydrolyzed by the action of commercial enzymes (pancreatin and bromelain) and of enzymatic extracts obtained from pineapple peel (crude and purified). Some enzymatic parameters were evaluated, such as type of enzyme, type of enzyme action, type of enzymatic association and order of enzyme action. The activated carbon (AC) was used as adsorbent and the efficiency of Phe removal was evaluated by second derivative spectrophotometry measuring the Phe content in wheat flour and in their hydrolysates after AC treatment. The best result was found for the successive association of crude extract followed by pancreatin obtaining 66.28% of removal and a final Phe content of 522.44 mg/100 g of hydrolysate.Visando ao preparo de farinha de trigo com baixo teor de fenilalanina (Phe), extraiu-se, enzimaticamente as proteínas, empregando-se uma protease alcalina de Bacillus licheniformis. Em seguida, os extratos protéicos foram hidrolisados pela ação de enzimas comerciais (pancreatina e bromelina) e de extratos enzimáticos obtidos da casca de abacaxi (bruto e purificado), avaliando-se alguns parâmetros enzimáticos, tais como tipo de enzima, tipo de ação enzimática, tipo de associação enzimática e ordem de ação enzimática. O carvão ativado (CA) foi empregado como meio adsorvente e a eficiência da remoção de Phe foi avaliada por espectrofotometria derivada segunda, determinando-se o teor de Phe na farinha de trigo e em seus hidrolisados, após tratamento com CA. O melhor resultado foi encontrado ao se empregar a associação sucessiva do extrato bruto seguida da pancreatina, tendo atingido 66,28% de remoção e o teor final de Phe de 522,44 mg/100 g de hidrolisado

Análisis del perfil peptídico de los hidrolizados de caseína preparados con pepsina, tripsina y subtilisina

La obtención de hidrolizados proteicos para fines dietéticos en base a caseína fue el objetivo de este trabajo. La caseína fue hidrolizada usando pepsina (P) aislada y en asociación con tripsina (T) y subtilisina (S). Se prepararon dieciséis hidrolizados y se caracterizaron sus perfiles peptídicos. Los hidrolizados fueron fraccionados por exclusión molecular utilizando cromatografía líquida de alta resolución (HPLC). El método rápido del Área Corregida de la Fracción fue usado para cuantificar los péptidos y los aminoácidos libres. Se evaluaran el efecto de la relación E:S, la temperatura y el pH en el perfil cromatográfico para la acción de pepsina aislada, mientras que el orden de adición y el tiempo de acción de la enzima se analizaron en el caso de las asociaciones de enzimas. Los resultados mostraron que el perfil cromatografico más conveniente para el propósito dietético se obtuvo por la asociación de las tres enzimas en las siguientes condiciones: S (3h, pH 7.5, E:S 4%) + T (1h, pH 7.5, E:S 3.3%) + P (1h, pH 1.9, E:S 4%), a 37 °C.Aiming the use of protein hydrolysates for dietetic purposes, casein was hydrolysed by using pepsin (P), isolated and in association with trypsin (T) and subtilisin (S). Sixteen hydrolysates were prepared and their peptide profiles were characterized. The hydrolysates were fractionated by size-exclusion HPLC, and the rapid Correct Fraction Area method was used for quantifying peptides and free amino acids. The effect of E:S ratio, temperature and pH on the chromatographic pattern was evaluated for the isolated action of pepsin, while the order of enzyme addition and the time of enzyme action were analysed in case of the enzyme associations. The results showed that the most suitable chromatographic pattern for dietetic purpose was obtained by the association of the three enzymes in the following conditions: S (3h, pH 7.5, E:S 4%) + T (1h, pH 7.5, E:S 3.3% ) + P (1h, pH 1.9, E:S 4%), at 37 °C.Colegio de Farmacéuticos de la Provincia de Buenos Aire

Análisis del perfil peptídico de los hidrolizados de caseína preparados con pepsina, tripsina y subtilisina

La obtención de hidrolizados proteicos para fines dietéticos en base a caseína fue el objetivo de este trabajo. La caseína fue hidrolizada usando pepsina (P) aislada y en asociación con tripsina (T) y subtilisina (S). Se prepararon dieciséis hidrolizados y se caracterizaron sus perfiles peptídicos. Los hidrolizados fueron fraccionados por exclusión molecular utilizando cromatografía líquida de alta resolución (HPLC). El método rápido del Área Corregida de la Fracción fue usado para cuantificar los péptidos y los aminoácidos libres. Se evaluaran el efecto de la relación E:S, la temperatura y el pH en el perfil cromatográfico para la acción de pepsina aislada, mientras que el orden de adición y el tiempo de acción de la enzima se analizaron en el caso de las asociaciones de enzimas. Los resultados mostraron que el perfil cromatografico más conveniente para el propósito dietético se obtuvo por la asociación de las tres enzimas en las siguientes condiciones: S (3h, pH 7.5, E:S 4%) + T (1h, pH 7.5, E:S 3.3%) + P (1h, pH 1.9, E:S 4%), a 37 °C.Aiming the use of protein hydrolysates for dietetic purposes, casein was hydrolysed by using pepsin (P), isolated and in association with trypsin (T) and subtilisin (S). Sixteen hydrolysates were prepared and their peptide profiles were characterized. The hydrolysates were fractionated by size-exclusion HPLC, and the rapid Correct Fraction Area method was used for quantifying peptides and free amino acids. The effect of E:S ratio, temperature and pH on the chromatographic pattern was evaluated for the isolated action of pepsin, while the order of enzyme addition and the time of enzyme action were analysed in case of the enzyme associations. The results showed that the most suitable chromatographic pattern for dietetic purpose was obtained by the association of the three enzymes in the following conditions: S (3h, pH 7.5, E:S 4%) + T (1h, pH 7.5, E:S 3.3% ) + P (1h, pH 1.9, E:S 4%), at 37 °C.Colegio de Farmacéuticos de la Provincia de Buenos Aire

Efeito da precipitação pelo ácido tricloroacético (TCA) e da ultrafiltração sobre o perfil peptídico de hidrolisados de caseína Influence of precipitation and ultrafiltration on the peptide profile of casein hydrolysates

Neste trabalho, estudou-se a influência da ultrafiltração e da precipitação pelo ácido tricloroacético (TCA) sobre o perfil peptídico de hidrolisados de caseína. Após esses tratamentos, os hidrolisados foram fracionados pela CLAE-EM (cromatografia líquida de alta eficiência - exclusão molecular), seguida da quantificação dos peptídeos nas frações cromatográficas pelo método rápido da Área Corrigida da Fração (ACF). Observou-se que esses tratamentos alteraram o perfil peptídico, tendo reduzido os teores de di- e tripeptídeos da maioria das preparações enzimáticas. Algumas considerações relacionadas às condições operacionais e à influência da hidrofobicidade dos peptídeos foram feitas, no intuito de explicar os resultados obtidos.<br>The effect of ultrafiltration and precipitation by TCA on the peptide profile of casein hydrolysates was studied. After these treatments, the hydrolysates were fractionated by size-exclusion HPLC and the rapid Correct Fraction Area method was used for quantifying the peptides. These treatments changed the peptide profile having reduced the di- and tripeptide content of some enzymatic preparations. In order to explain these results, some considerations concerning operational conditions and peptide hydrophobicity were made

PEPTIDE PROFILE OF PROTEIN HYDROLYSATES FROM WHEAT FLOUR PERFIL PEPTÍDICO DE HIDROLISADOS PROTEICOS DA FARINHA DE TRIGO

&lt;p style="margin-bottom: 0cm; font-style: normal; font-weight: normal; line-height: 120%; text-decoration: none;" lang="pt-BR"&gt;&lt;span style="color: #000000;"&gt;&lt;span style="font-family: Times New Roman,serif;"&gt;&lt;span style="font-size: small;"&gt;Protein hydrolysates have been increasingly used in specific formulations.&lt;span style="color: #ff0000;"&gt; &lt;/span&gt;This study aimed to obtain protein hydrolysates from wheat flour with appropriate peptide profile, from a nutritional point of view,&lt;em&gt; i.e.&lt;/em&gt;, containing high di-tripeptide and free amino acid contents, as well as low amounts of large peptides. Different hydrolytic conditions and sample treatments were tested, with the successive association of a commercial pancreatin and a raw enzymatic extract from the pineapple skin (RE). The order of enzyme addition, reaction temperature, enzyme:substrate ratio (E:S), and the effect of homogenization with ultra-turrax were evaluated, aiming the cost reduction on a large scale process. The peptide profile was evaluated by using a fractionation method, with size-exclusion-HPLC, followed by a Corrected Fraction Area method, for quantifying peptides and free amino acids. The best peptide profile was found for the hydrolysate obtained when pancreatin (E:S = 4:100) acted firstly for 3 hours and 30 minutes, followed by RE (E:S = 10:100), for 1 hour and 30 minutes, at optimal pH and temperature conditions of each enzyme, reaching higher di-tripeptide contents (16,98%), one of the highest free amino acids contents (42,70%), and the lowest large peptides content (13,09%). The use of ultra-turrax had no effect on the peptide profile.&lt;/span&gt;&lt;/span&gt;&lt;/span&gt;&lt;/p&gt;&lt;p style="text-align: justify !important;"&gt;&lt;span style="font-family: Times New Roman,serif;"&gt;&lt;span style="font-size: small;"&gt;&lt;span style="color: #000000;"&gt;&lt;span style="text-decoration: none;"&gt;&lt;span style="font-family: Times New Roman,serif;"&gt;&lt;span lang="pt-BR"&gt;&lt;span style="font-style: normal;"&gt;&lt;span style="font-weight: normal;"&gt;A utilização de hidrolisados proteicos, em formulações específicas, é uma área de crescente interesse.&lt;/span&gt;&lt;/span&gt;&lt;/span&gt;&lt;/span&gt;&lt;/span&gt;&lt;/span&gt;&lt;span style="color: #800000;"&gt;&lt;span style="text-decoration: none;"&gt;&lt;span style="font-family: Times New Roman,serif;"&gt;&lt;span lang="pt-BR"&gt;&lt;span style="font-style: normal;"&gt;&lt;span style="font-weight: normal;"&gt; &lt;/span&gt;&lt;/span&gt;&lt;/span&gt;&lt;/span&gt;&lt;/span&gt;&lt;/span&gt;&lt;span style="color: #000000;"&gt;&lt;span style="text-decoration: none;"&gt;&lt;span style="font-family: Times New Roman,serif;"&gt;&lt;span lang="pt-BR"&gt;&lt;span style="font-style: normal;"&gt;&lt;span style="font-weight: normal;"&gt;O objetivo deste trabalho consistiu na obtenção de hidrolisados proteicos de farinha de trigo com perfil peptídico adequado, do ponto de vista nutricional, ou seja, contendo elevado teor de di-tripeptídeos e aminoácidos livres e reduzida quantidade de grandes peptídeos. Foram avaliadas diferentes condições hidrolíticas e de tratamento da amostra, empregando-se a associação sucessiva de uma pancreatina comercial e de um extrato enzimático bruto da casca de abacaxi (EB). Avaliou-se a ordem de adição das enzimas, temperatura de reação, relação enzima:substrato (E:S) e o efeito da homogeneização com ultraturrax, visando à redução de custos para adaptação em larga escala. A análise do perfil peptídico foi realizada pelo fracionamento, por cromatografia líquida de alta eficiência de exclusão molecular, seguido pela quantificação dos peptídeos e aminoácidos livres, pelo método da Área Corrigida da Fração. O melhor perfil peptídico foi encontrado para o hidrolisado obtido quando a pancreatina (E:S = 4:100) atuou primeiro por 3 horas e 30 minutos, seguida da ação do EB (E:S = 10:100), durante 1 hora e 30 minutos, nas condições ótimas de pH e temperatura de cada enzima, promovendo, assim, maior quantidade de di-tripeptídeos (16,98%), um dos maiores teores de aminoácidos livres (42,70%) e o menor conteúdo de grandes peptídeos (13,09%). Observou-se, ainda, que o emprego do ultraturrax não afetou o perfil peptídico.&lt;/span&gt;&lt;/span&gt;&lt;/span&gt;&lt;/span&gt;&lt;/span&gt;&lt;/span&gt;&lt;/span&gt;&lt;/span&gt;&lt;/p&gt