Biological activity of the venom from Anthothoe chilensis (Lesson, 1830)(Actiniaria: Sagartiidae)

El presente trabajo informa sobre características bioquímicas, actividad hemolítica, citotóxica y citolítica de tres fracciones del veneno de la anémona de mar Anthothoe chilensis. Los tentáculos de 78 ejemplares de A. chilensis, provenientes de la Isla Cabinza-San Lorenzo, Lima, fueron procesados obteniendo un filtrado, el cual se fraccionó por precipitación con tres puntos de saturación con acetona fría: I (20%), II (50%), III (80%). El filtrado mostró una concentración proteica de 1,8 mg/mL. Las pruebas de detección de carbohidratos totales demostraron la presencia de 1,401 mg de glucosa/ml de solución en el filtrado; mientras que la electroforesis en gel de poliacrilamida en presencia de dodecil sulfato de sodio (PAGE-SDS) evidenció proteínas de 14 a 94 kDa, de las cuales la mayor parte fueron glicoproteínas. Se encontró actividad hemolítica sobre eritrocitos humanos en las fracciones I y II. La fracción III tuvo la actividad fosfolipásica más alta. Las tres fracciones tuvieron una ligera actividad proteolítica sobre caseína siendo la más activa la fracción I. Los efectos citotóxico y citológico fueron evaluados aplicando el Ensayo de Toxicidad en Embriones de Erizo de mar (SET). Las anormalidades morfológicas fueron evaluadas a las 48 horas de desarrollo. Las anormalidades citológicas fueron evaluadas en el estadio de gástrula tardía. Las tres fracciones acetónicas produjeron daños citotóxicos y citológicos importantes en los embriones de erizo de mar. Los efectos sobre los embriones fueron retrasar su desarrollo y producir anomalías morfológicas como lisis de blástulas y exogastrulación. Los daños citológicos observados fueron núcleos heteropicnóticos, núcleos gigantes y espacios celulares anormales. La fracción II fue la más citotóxica produciendo una mortalidad de 75,52 ± 5,5% en los primeros estadíos con 1,0 μg/mL. La fracción I produjo el mayor porcentaje de anomalías en los embriones supervivientes 64,15 ± 4,2 % con 1,3 μg/mL. La fracción III fue la menos tóxica.This paper reports on biochemical characteristics, hemolytic activity, cytolytic and citotóxic of three fractions venom from the sea anemone Anthothoe chilensis. The arms of 78 individuals of A. chilensis, from the Isle Cabinza-San Lorenzo, Lima, were treated to obtain a filtrate (Ft), which is divided by precipitation with three points of saturation with cold acetone: I (20%), II (50%), III (80%). The Ft showed 1,8 mg/mL of protein concentration. Test of total carbohydrate detection showed the presence of 1,401 mg of glucose/ml of solution in Ft. SDS-PAGE showed proteins between 14 to 94 kDa, almost were glycoproteins. Hemolytic activity was assayed on human erythrocytes showing positive result the fractions II and I. The fraction III was highest phospholipasic activity. Evaluating the proteolytic activity on casein was observed that the fraction I has the highest activity. Cytotoxic and cytological effects were evaluated in sea urchin embryos Tetrapigus niger. The morphologic abnormalities were evaluated at 48 hours of developing. Cytological abnormalities were observed at late gastrule stage. All acetonic fractions caused abnormalities in embryonic development. Delay of development, morphologic abnormalities like lysis at the blastula and exogastrulation, cytological abnormalities like heteropycnosis, giant nuclei and cellular spaces were observed. The fraction II was more cytotoxic, producing a 75,52 ± 5,5% mortality on early stages with 1,0 μg/mL. The fraction I had the highest anomalies quantity on survivor embryos, 64,15 ± 4,2% with 1,3 μg /mL. The fraction III was less toxic

Estudio de las toxinas de la anémona de mar Anthothoe chilensis (Lesson, 1830) (Actiniaria: Sagartiidae)

En esta investigación se han estudiado las toxinas del veneno de la anémona de mar Anthothoe chilensis (Lesson, 1830), a partir de los tentáculos y cuerpos de animales vivos recolectados entre 8 y 10 metros de profundidad en las Isla Cabinza-San Lorenzo. Se utilizaron tres fracciones precipitadas con sulfato de amonio y tres fracciones precipitadas con acetona para realizar ensayos in vitro y un ensayo in vivo. Se observó que las proteínas contenidas en el veneno de A. chilensis tienen un peso molecular entre 14 y 94 kDa. Se evidenció la presencia de carbohidratos en todas las fracciones evaluadas y mediante tinción PAS de geles PAGE-SDS se detectó la presencia de glicoproteínas. Todas las fracciones mostraron tener actividad hemolítica, fosfolipásica y proteolítica. La fracción Ach1at tuvo la actividad hemolítica más alta, la fracción acetónica Ach3at tuvo la mayor actividad fosfolipásica. Cuando las fracciones se probaron sobre el desarrollo embrionario de huevos de erizo de mar, éstas mostraron efectos en la morfología tales como blástulas lisadas, exogastrulación, prismas y larvas pluteus anormales. Entre los efectos citológicos se observaron gástrulas con menos configuraciones mitóticas, núcleos heteropicnóticos, cariorresis y núcleos gigantes. Las fracciones ensayadas mostraron producir hipersensibilidad tipo I en ratones albinos, sin llegar a desencadenar shock anafiláctico.--- In this investigation toxins of the venom of the sea anemone Anthothoe chilensis (Lesson, 1830) have been studied, from the tentacles and bodies of alive animals collected between 8 and 10 meters of depth in the Island Cabinza-San Lorenzo. Three precipitated fractions with ammonium sulfate and three precipitated fractions with acetone were used to make assays in vitro and one assay in vivo. It was observed that the proteins contained in the venom of A. chilensis have a molecular weight between 14 and 94 kDa. The presence of carbohydrates was evidenced in all the evaluated fractions and by stain PAS of gels SDS-PAGE the glycoproteins presence were detected. All the fractions showed to have hemolytic, phospholipase and proteolytic activities. The acetonic fraction I had the higher hemolytic activity, the acetonic fraction III had the greater phospholipasic activity. When the fractions were assayed on the sea urchin eggs embryonic development, they showed to have morphologic effects like lisated blastules, early exogastrulation, and abnormal prisms and pluteus larvae. Cytological effects like gastrulaes with less mitotic configurations, heteropycnotic nuclei, karyorrhexis and giant nuclei were observed. The evaluated fractions showed to produce hypersensitivity type I in mice, without getting to trigger anaphylactic shock.Tesi

Actividad biológica del veneno de Anthothoe chilensis (Lesson, 1830) (Actiniaria: Sagartiidae)

El presente trabajo informa sobre características bioquímicas, actividad hemolítica, citotóxica y citolítica de tres fracciones del veneno de la anémona de mar Anthothoe chilensis. Los tentáculos de 78 ejemplares de A. chilensis, provenientes de la Isla Cabinza-San Lorenzo, Lima, fueron procesados obteniendo un filtrado, el cual se fraccionó por precipitación con tres puntos de saturación con acetona fría: I (20%), II (50%), III (80%). El filtrado mostró una concentración proteica de 1,8 mg/mL. Las pruebas de detección de carbohidratos totales demostraron la presencia de 1,401 mg de glucosa/ml de solución en el filtrado; mientras que la electroforesis en gel de poliacrilamida en presencia de dodecil sulfato de sodio (PAGE-SDS) evidenció proteínas de 14 a 94 kDa, de las cuales la mayor parte fueron glicoproteínas. Se encontró actividad hemolítica sobre eritrocitos humanos en las fracciones I y II. La fracción III tuvo la actividad fosfolipásica más alta. Las tres fracciones tuvieron una ligera actividad proteolítica sobre caseína siendo la más activa la fracción I. Los efectos citotóxico y citológico fueron evaluados aplicando el Ensayo de Toxicidad en Embriones de Erizo de mar (SET). Las anormalidades morfológicas fueron evaluadas a las 48 horas de desarrollo. Las anormalidades citológicas fueron evaluadas en el estadio de gástrula tardía. Las tres fracciones acetónicas produjeron daños citotóxicos y citológicos importantes en los embriones de erizo de mar. Los efectos sobre los embriones fueron retrasar su desarrollo y producir anomalías morfológicas como lisis de blástulas y exogastrulación. Los daños citológicos observados fueron núcleos heteropicnóticos, núcleos gigantes y espacios celulares anormales. La fracción II fue la más citotóxica produciendo una mortalidad de 75,52 ± 5,5% en los primeros estadíos con 1,0 μg/mL. La fracción I produjo el mayor porcentaje de anomalías en los embriones supervivientes 64,15 ± 4,2 % con 1,3 μg/mL. La fracción III fue la menos tóxica