Construction of Ms6 derivative mutants as tools for interaction studies ith mycobacteria

Tese de mestrado, Ciências Biofarmacêuticas, Universidade de Lisboa, Faculdade de Farmácia, 2015Mycobacteriophage Ms6 is a temperate phage isolated in 1989 from a spontaneously induced culture of Mycobacterium smegmatis. Although several studies regarding lysis and integration have been published, the host range of Ms6 is not known. In this work we observed that incubation of this phage with fast- and slow-growing mycobacteria did not result in plaque or halos formation, as usually happens in infection plaque assay. However, an absence of clearing in a bacterial lawn does not mean that Ms6 in unable to infect the tested mycobacteria apart from its natural host, M. smegmatis. Taking this into consideration, our main goal was to construct Ms6 derivative mutants with reporter genes, and use them as tools to follow the mycobacteriophage replication inside other mycobacteria. Using the Bacteriophage Recombineering of Electroporated DNA (BRED) technique, we successfully constructed two Ms6 derivative reporter phages, Ms6lysB::egfp and Ms6pin::gfpm2+, by gene replacement. We successfully showed that their reporter proteins, improved green fluorescent proteins (GFP), are respectively expressed in Ms6 lytic and lysogenic life cycle, on M. smegmatis. Consequently, these new mutant phages are very important and useful tools to be used in future studies since they permit to follow a lytic or lysogenic cycle. With Ms6lysB::egfp and Ms6pin::gfpm2+, we expect to determine with more accuracy the ability of Ms6 to infect/replicate in other mycobacteria.O micobacteriófago Ms6 é um fago temperado, isolado em 1989 a partir de uma cultura de Mycobacterium smegmatis induzida espontaneamente. Apesar de vários estudos sobre o sistema de lise e integração terem já sido publicados, a gama de hospedeiros do Ms6 não é ainda conhecida. Neste trabalho verificou-se que a incubação deste fago com micobactérias quer de crescimento rápido quer de crescimento lento, não resultou na formação de placas fágicas nem de halos, tal como acontece num ensaio clássico de infecção em placa. No entanto, a ausência de placas fágicas não significa que Ms6 não tenha capacidade de infectar outras micobactérias para além de M. smegmatis, o seu hospedeiro natural. Tendo este facto em consideração, o principal objectivo deste trabalho foi construir fagos Ms6 mutantes com genes repórter, de modo a usá-los como ferramentas para testar a capacidade do Ms6 se replicar noutras micobactérias. Através da metodologia Bacteriophage Recombineering of Electroporated DNA (BRED), foi possível proceder a uma troca de genes do fago Ms6 por genes repórter e construir, com sucesso, dois fagos recombinantes designados Ms6lysB::egfp e Ms6pin::gfpm2+, capazes de produzir fluorescência quando infectam um hospedeiro sensível. Foi com sucesso que mostrámos que as proteínas verde fluorescentes modificadas (GFP), são expressas em M. smegmatis no ciclo lítico e lisogénico. Consequentemente, estes novos fagos mutantes constituem importantes ferramentas que poderão ser usados em estudos futuros, tendo em conta que permitem seguir o ciclo lítico e lisogénico. Esperamos assim, através dos fagos construídos Ms6lysB::egfp and Ms6pin::gfpm2+, conseguir determinar de uma forma mais precisa, a capacidade de Ms6 infectar/replicar-se em outras micobactérias

Report of the Second International Symposium on Molecular Epidemiology in Childhood Leukaemia and Embryonal Tumours, Rio de Janeiro, Brazil

The recent International Symposium on Molecular epidemiology in Embryonal Tumours and Paediatric Leukaemia was held on 4–6 March 2008 in Rio de Janeiro, Brazil. It proved a very productive meeting in which studies relating to genetics, therapeutical trials, identification of risk factors in acute leukaemia neuroblastoma and Wilms’ tumours were presented. Over 120 participants gathered for three days of fruitful discussions, including representatives of paediatrics, haematology, laboratory, epidemiology and pathology. Debates were held about strategies of applications of important biomarkers for clinical trials. Highlights of each of the scientific presentations are summarized below

Infecção durante a Aplasia no Tratamento de Indução das Leucemias Agudas Mieloblásticas

Este estudo confirma a freqüência das infecções em pacientes neutropênicos, bem como ressalva que nem sempre e possível se chegar a um diagnóstico de infecção com exame bacteriológico comprobatório. A grande maioria das infecções é devida a germes Gram-negativos. Sua freqüência aumenta com a duração da hospitalização. Os exames bacteriológicos iniciais negativos são sem valor. No entanto existe, sobretudo em crianças, um certo número de infecções por germes Gram-positivos onde os exames iniciais do rinofaringe eram positivos. Este estudo confirma sobretudo que:  existe ligação direta entre leucopenia e infecção;  a idade é importante para avaliação do prognóstico, considerando-se alto risco aqueles pacientes com mais de 41 anos;  as infecções mais graves são aquelas de localização pulmonar, principalmente quando resultantes de germes como Serratia, Pseudomonas, Aspergilius;  os programas profiláticos, Instituídos antes da fase neutropênica mostraram baixo índice de infecção, bem como menor índice de mortalidade;  as transfusões de leucócitos completam a ação da antibloticoterapia

A utilização das fundações na eficiência energetica dos edificios

Mestrado em Engenharia CivilO presente trabalho propõe-se divulgar a importância da Geotermia no mundo, na possibilidade de podermos utilizar um recurso natural que existe e foi descoberto há milhares de anos e até aos dias de hoje tem sido pouco utilizado, apresento numa análise mais específica em Portugal onde, como pode e deveria ser utilizado, usando um caso real de um edifício onde foi instalado e a satisfação do cliente é total tanto em termos monetários como nas condições habitacionais do edifício.This paper aims to promote the importance of Geothermal in the world, the possibility that we can use a natural resource that exists and was discovered thousands of years ago and until today has been little used, present a more specific analysis in Portugal where how can and should be used, using a real case of a building where it was installed and customer satisfaction is total both in monetary terms as the housing conditions of the building

Avaliação de metodologias de optimização energética em veículos eléctricos de proximidade

Tese de mestrado integrado. Engenharia Electrotécnica e de Computadores (Major Automação). Faculdade de Engenharia. Universidade do Porto. 200

Challenges in the use of NG2 antigen as a marker to predict MLL rearrangements in multi-center studies

AbstractRearrangements in MLL (MLL-r) are common within very young children with leukemia and affect the prognosis and treatment. Previous studies have suggested the use of the NG2 molecule as a marker for MLL-r but these studies were performed using a small number of infants. We analyzed 148 patients (all less than 24 months, 86 less than 12 months) from various centers in Brazil to determine the predictive power of NG2 within that cohort. We show that NG2 can be used for MLL-r prediction; however, proper staff training and standardized sampling procedures are essential when receiving samples from multiple centers as the accuracy of the prediction varies greatly on a per center basis

t(10;11)(p12;q23) KMT2A/NEBL

Review on t(10;11)(p12;q23) KMT2A/NEBL, with data on clinics, and the genes involved

Etiopatogênese da infecção por parvovírus humano B19 e relação com leucemias agudas da infância

O parvovírus humano B19 (B19V) é o agente causador do eritema infeccioso em crianças, há muito conhecido como "quinta doença". Esta infecção foi descrita inicialmente há mais de 100 anos, no entanto há apenas 30 anos o vírus tornou-se conhecido dos cientistas. Apesar de se resolver sem maiores complicações, em indivíduos normais (imunocompetentes), alguns grupos de pacientes merecem especial atenção quando acometidos por este parvovírus, tendo em vista as sérias complicações que podem vir a apresentar no futuro. Entre tais pacientes encontram-se os portadores de hemoglobinopatias, imunocomprometidos e fetos. Especula-se que a infecção por B19 está associada a etiopatogênese de leucemias agudas. Atualmente, modernas técnicas vêm sendo empregadas para o diagnóstico desta doença, incluindo a dosagem sérica de imunoglobulinas e a detecção do vírus. O tratamento, por outro lado, continua sintomático na maior parte dos casos. No entanto novas abordagens terapêuticas com uso anti-retroviral vêm sendo utilizadas, especialmente nas complicações que o parvovírus provoca. O objetivo deste trabalho é apresentar uma revisão enfocando os principais aspectos clínicos, imunocelulares e terapêuticos desta doença exantemática comumente subestimada