Eficiência diagnóstica de antígenos solúveis de Brucella em testes de imunodifusão e capacidade para diferenciar bovinos vacinados com Brucella abortus CEPA 19

Three soluble antigens were compared by radial immunodiffusion (RID) and agar gel immunodiffusion (AGID) tests: a native haptene (NH) from Brucella melitensis 16M, and a polysaccharide (PS) from B. abortus 1119-3, both obtained by non-hydrolytic methods, and the (O-Chain) polysaccharide extracted also from B. abortus 1119-3 but using an hydrolytic method. Three groups of bovine sera were tested: a) Naturally infected (n = 76); b) Non-infected (n = 130) and c) S-19 vaccinated (n = 61); the sensitivity (Se), the specificity (Sp) and the ability to differentiate vaccinated (ADV) were determined in each group a, b and c respectively. The highest Se in the RID test (84.3%) was achieved by NH; while the three antigens gave 100% Sp. The O-Chain showed 100% ADV in this test. In the AGID test PS antigen showed the best Se (86.6%), and all antigens showed 100% of Sp and ADV. Finally, for its production qualities and efficiency the antigens PS and NH represent a promising alternative for complementary diagnosis of brucellosis.Foram comparados três antígenos solúveis: um hapteno nativo (NH) de B. melitensis 16M, um polissacarídeo (PS) obtido de B. abortus 1119-3 e outro polissacarídeo de cadeia O (O-Chain) originado também da última Brucella. Os testes de imunodifusão radial (RID) e imunodifusão em gel de ágar (AGID) foram confrontados com as três classes de soros bovinos: a) infectados naturalmente (n = 76), b) não infectados (n = 130) e c) vacinados com B19 (n = 61) reagindo a testes sorológicos clássicos. Foram determinadas a sensibilidade (Se), a especificidade (Sp) e a capacidade para discriminar vacinados (ADV). A Se mais alta (84,3%) no teste RID foi demonstrada pelo antígeno NH, enquanto os três antígenos tiveram 100% de Sp. O antígeno O-Chain teve 100% de ADV nesse teste. O teste AGID com estes antígenos demonstrou 100% Sp e ADV, enquanto o antígeno PS mostrou uma melhor Se (86,6%). Finalmente, por sua qualidade de produção e eficiência, os antígenos PS e NH representam uma alternativa segura e econômica para o diagnóstico suplementar da brucelose

Vacunas y vacunación

Revisión y comentario sobre el adecuado uso de este recurso profiláctico. Se agregan algunas recomendaciones de esquemas de vacunación más usados

Vacunas y vacunación

Revisión y comentario sobre el adecuado uso de este recurso profiláctico. Se agregan algunas recomendaciones de esquemas de vacunación más usados

Desarrollo de una prueba de ELISA para descartar respuestas postvacunales con Cepa 19, utilizando un antígeno soluble polisacárido de Brucella Abortus 1119-3

El control de brucelosis bovina en áreas de alta prevalencia mediante esquemas de vacunación con Cepa 19 en forma tradicional y no tradicional, hace necesario disponer de pruebas de diagnóstico que puedan diferenciar la respuesta humoral postvacu­nal y no confundirla con la de una infección natural. Utilizando un antígeno polisacárico purificado (PS) de Brucella abortos 1119-3, que en pruebas de in­munodifusión es capaz de descartar la respuesta postvacunal a Cepa I9, se realizan ensayos para establecer una fase sólida en 3 tipos de microplacas de poliestireno, utilizando 3 tampones de sensibili­zación (TS) y diferentes concentraciones de antíge­no y conjugado.Lograda la fase sólida en las placas Dynatech Immulon2 (D2) y NUNC 269620 (N3), utilizando PBS 0,01 M pH 7,2-7,6, y establecidas las concen­traciones óptimas de antígeno (1:50) y conjugado (1:1.600) se realiza un ELISA indirecto en 3 grupos de sueros bovinos definidos como, positivos por cultivo bacteriológico (48), negativos por origen (78) y vacunados, que eran reactores a pruebas de diagnóstico tradicionales (120).La prueba de ELISA-PS tuvo en estas condicio­nes, para la placa D2 una sensibilidad de 89,5% y una especificidad de 94,8%, descartando como po­sitivos al 95,8% de los sueros de animales vacuna­dos. La placa N3 entregó una sensibilidad de 95,8% y una especificidad de 100%, descartando como positivos al 88,3% de los sueros de animales vacu­nados.Se expresa que estudios posteriores deben probar alternativas respecto de otras clases de conjugados y de ensayos en la modalidad de ELISA de compe­tencia para optimizar las cualidades del antígeno.Palabras claves: Brucella abortos; ELISA; antígeno polisacárido.AbstractThree types of 96-wells polystyrene plates and three different coating buffers were tested to obtain a stable solid phase with a Brucella abortos 1119-3 polysaccharide antigen which is able to differentiate naturally infected from S19 vaccinated cattle, when is used in an agar gel immunodiffusion test. Only the plates Dynatech Immulon2 (D2) and NUNC 269620 (N3) and the PBS 0.01M pH 7.2-7.6 used as coating buffer, gave the best results with and antigen dilution of 1:50 and a conjugate dilution of 1:1600. An indirect ELISA was don with these conditions using three groups of sena defined as follows: Positives (48), that had Brucella abortos bacteriological culture and positive reactors to traditional diagnostic tests; Negatives (78), from animals of brucellosis free areas and without S19 vaccination; Vaccinated (120), from animals recently vaccinated with S19 and reactors to traditional diagnostic tests. Plate D2 gave a sensitivity of 89.5% and a specificity of 94.8%, classifying 95.8% of the vaccinated animals as negatives. Plate N3 gave a sensitivity of 95.8% and a specificity, of 100%, classifying 88.3% of the vaccinated animals as negatives.Key words: Brucella abortos; ELISA; polysaccharide antigen.