Influencia de la insulina bovina y humana sobre los índices de maduración, fecundación y división in vitro de ovocitos de bovino

The present study was carried out to determine the effects of supplementation of the maturation media with human or bovine insulin on in vitro maturation, fertilization and cleavage rates of bovine oocytes. Cumulus-intact bovine oocytes were cultured in a maturation medium (TCM-199 containing 10 percent fetal calf serum) with or without human or bovine insulin supplementation (10 mg/ml). For the bovine insulin supplement, the maturation (80.3 percent), fertilization (61.3 percent) and cleavage (55.3 percent) rates were significantly higher (p<0.05) than those obtained in the control group (70.1; 50.1 and 42.5 percent respectively). Thus, the percentages of cleavaged ova obtained in presence of human or bovine insulin (54.8 and 55.3 percent respectively) were significantly higher (p<0.05) than those observed in control group (42.5 percent). No difference was found among human and bovine insulin treatments. These results demonstrate that the addition of human or bovine insulin to the maturation medium increased the percentages of matured oocyte, increasing the subsequent fertilization and cleavage rates of bovine oocytes in vitro.Se realizó un estudio para determinar los efectos de la suplementación del medio de maduración con insulina humana o bovina sobre los índices de maduración, fecundación y división in vitro de ovocitos de bovino. Ovocitos de bovino se cultivaron en medio de maduración (TCM-199 conteniendo 10 p.100 de suero de ternero fetal) con o sin insulina humana o bovina (10 mg/ml). Para la insulina bovina, los índices de maduración (80,3 p.100), fecundación (61,3 p.100) y división (55,3 p.100) fueron superiores significativamente (p<0,05) que aquellos obtenidos por el grupo control (70,1; 50,1 y 42,5 p.100 respectivamente). Además, los porcentajes de óvulos divididos obtenidos en presencia de insulina humana o bovina (54,8 y 55,3 p.100 respectivamente), fueron superiores significativamente (p<0,05) en comparación con los obtenidos por el grupo control (42,5 p.100). No se apreciaron diferencias significativas entre los tratamientos con insulina humana y bovina. Estos resultados ponen de manifiesto que la adición de insulina humana o bovina al medio de maduración incrementa los porcentajes de ovocitos maduros, mejorando posteriormente los índices de fecundación y división de ovocitos de bovino in vitro

Un método optimizado para el análisis cromosómico de ovocitos y cigotos obtenidos mediante técnicas de maduración y fecundación in vitro

Matured bovine oocytes and zygotes obtained by in vitro maturation and fertilization techniques (IVM and IVF) were cytogenetically prepared by using an improved method for chromosome preparations. The method, which involves use of trypsinizedhypotonic solution plus a vortex-agitated system and very cold two-step fixation process, contributes to weaken the zona pellucida and allows the swelling of oocytes and zygotes which helps the subsequent spreading of the chromosomes. This method permits to obtain preparations of good quality for examining the number and morphology of the chromosomes of oocytes and zygotes for any meiotic and mitotic stage.Se logró optimizar un método rápido para analizar citogenéticamente ovocitos y cigotos de bovino obtenidos mediante técnicas de maduración y fecundación in vitro (MIV y FIV). El método, el cual utiliza una solución hipotónica con tripsina, un sistema de agitación mediante vortex y un sistema doble de fijación en frío, contribuye a eliminar fácilmente la zona pelúcida y a hinchar a los ovocitos y cigotos favoreciendo posteriormente la extensión de los cromosomas. Este método permite obtener preparaciones de muy buena calidad para el análisis tanto del número como de la morfología de los cromosomas de los ovocitos y cigotos en cualquier estadío meiótico y mitótico

Producción in vitro de embriones de bovino: influencia de la suplementación sérica y hormonal

On study the effect of different serum and hormonal supplements, when added to the maturation medium, on the in vitro maturation and subsequent fertilization and cleavage process of bovine oocytes. The oocyte maturation, fertilization and cleavage rates in the presence of ECS, FCS and hormonal supplements were significantly higher (p<0.001) than that obtained in the control group. No significant differences for maturation, fertilization and development were observed between the different supplements. The addition of serum and hormonal supplements to the maturation medium improved the in vitro maturation rates and subsequent in vitro fertilization and cleavage rates of bovine oocytes.El objetivo del presente estudio fue investigar si diferentes suplementos séricos y hormonales, cuando se adicionan al medio de maduración, mantienen los procesos de maduración, fecundación y división de ovocitos de bovino in vitro. Los índices de maduración ovocitaria, fecundación y división, en presencia de los suplementos ECS, FCS y hormonas fueron superiores significativamente (p<0,001) que aquellos observados en el grupo control. No se apreciaron diferencias significativas para los estadíos de maduración, fecundación y división entre los diferentes suplementos estudiados. Concluimos que la adición de suplementos séricos y hormonales al medio de maduración mejora los índices de maduración ovocitaria y subsiguientes índices de fecundación y división in vitro de ovocitos de bovino

Influencia de las condiciones de maduración in vitro sobre los índices de fertilizacion de ovocitos de bovino

The influenceof maturation medium, serum and hormonal supplements, type of bovine oocyte, as well as the co-culture with granulosa cells for in vitro bovine oocytes maturation on the in vitro fertilization rate were investigated. Immature oocytes with cumulus cells were cultured with two different maturation media (M-199 and DM EM; Experiment 1). In Experiment 2, in vitro maturation was performed with two serum supplements and one hormonal supplement (FCS. ECS and PMSG+HCG). In Experiment 3. on vitro maturation was performed with two different bovine oocyte types (CEO and CDC) In Experiment 4. in vitro maturation was performed with or without the addition of granulosa cells. After in vitro oocyte maturation, oocytes were fertilized using frozen-thawed semen which was previously capacitated with bovine serum albumin and heparin for 15 minutes. The M-199 showed a fertilization rate higher (55 percent; p<0.01) than those obtained in DM EM (39 percent; Experiment 1) . In Experiment 2, the serum and hormonal supplements showed in vitro fertilization rates higher (FCS:55 percent, ECS:57 percent, PMSG + hCG: 60 percent, p<0.001) than that in control group (31 percent). In Experiment 3, In virro fertilization rate of cumulus-denuded oocytes (30 percent) was lower (p<0.001) than those of cumulus-enclosed oocytes (60 percent). In Experiment 4. oocytes cocultured with granulosa cells had higher rates of fertilization (70 percent. p<0.05) than oocytes matured without co-cultured with granulosa cells (55 percent). The results indicate that the use of M-199 medium, the addition of serum or hormonal supplements, the oocyte type and the co-culture with granulosa cells during in vitro maturation influenced the fertilizability of in vitro matured oocytes.Se investigó la influencia del med¡o de maduración, los suplementos séricos y hormonales, tipo de ovocito bovino. así como el co-cultivo con células de la granulosa durante la maduración oocitaria in vitro sobre los índices de fertilización in vitro de ovocitos bovinos. Ovocitos inmaduros con células del cúmulo se cultivados en dos medios de maduración diferentes (M-199 y DM EM; experimento 1). En el experimento 2, la maduración in vitro se realizó utilizando dos suplementos séricos y uno hormonal (FCS, ECS y PMSG+HCG). En el experimento 3, la maduración se realizó utilizando dos tipos de ovocitos diferentes (CEOy CDO). Y en el experimento 4, la maduración in vitro se llevó a cabo con o sin la adición de células de la granulosa. Después de la maduración de los ovocitos se procedió a su fecundación in vitro utilizando semen descongelado que fue capacitado previamente con suero albuminoso de bovino y heparina durante 15 minutos. El medio M-199 mostró un Indice de fecundación superior (55 p.100; p<0,01) que aquel obtenido por el medio DMEM (39p.100; experimento 1). En el experimento 2, los suplementos séricos y hormonales mostraron un índice de fecundación superior (FCS:55 p.100, ECS:57 p.100, PMSG+HCG:60 p.100; p<0,001) al del grupo control (31 p.100). En el experimento 3, el indice de fecundación in vitro de los ovocitos desnudos fue más bajo (30 p.100; p<0,001) que aquellos obtenidos por los ovocitos cubiertos por células del cúmulo (60 p.100). En el experimento 4, ovocitos co-cultivados con células de la granulosa tuvieron índices de fecundación superiores (70 p.100; p<0,05) que los ovocitos madurados sin co-cultivarse con células de la granulosa (55 p.100). Los resultados indican que el uso del medio M-199, la adición de suero o suplementos hormonales, el tipo de ovocito y el co-cultivo con células de la granulosa durante la maduración in vitro influyen en la capacidad de fecundación de ovocitos madurados in vitro

Influencia de diferentes fracciones foliculares sobre la maduración in vitro de ovocitos inmaduros de bovino

Three experiments were carried out to investigate whether cumulus cells, Bovine Follicular Fluid (BFF) and granulosa cells, when added as supplements to the maturation medium, support the in virto maturation of immature bovine oocytes. In the first experiment, the maturation medium was supplemented with three different concentrations of the BF F (10, 20 and 50 p.100, respectively). In the second experiment, the effect of three different concentrations of the granulosa (1,10 y 100x 106 cells/ml, respectively), on in vitro oocyte maturation porcentages were evaluated. In the third experiment, the effect of the presence or absence of cumulus cells on the in vitro oocyte maturation rates was compared. Maturation rates at the metaphase II stage, following supplementation with 20 p.100 BFF (60 p.100) were significantly higher (p"O.05) than those obtained in control group (45 p.100). Significant differences between the 10 p.100 BFF, 20 p.100 BFF and 50 p.100 BFF treatments, were not observed. ml and the control treatments (90 p.100 and 85 p.100, respectively) were significantly higher (pa0.001) than when 10 and 10000" cells/ml (66 p.100 and 47 p.100, respectively) were added. Significant differences in the presence (78 p.100) or absence (62 p.100) of cumulus cells (p<0_05) on in vitrooocyte maturation rates were found. The present results indicatethat the presence of cumul us cells surrounding i m matu re oocytes, the addition of low granulosa cells concentrations and BFF added to the maturation medium may be required to induce both nuclear and cytoplasmic maturation of immature bovine oocytes in vitro.Se llevaron a cabo tres experimentos con el objetivo de investigar si las células del cúmulo, fluido folicular bovino (FFB) y las células de la granulosa, cuando son añadidos como suplemento al medio de maduración, soportan la maduración in vitro de ovocitos inmaduros de bovino. En el primer experimento, el medio de maduración fue suplementado con tres diferentes concentraciones de F F B (10, 20 y 50 p.100, respectivamente). En el segundo experimento, se evaluó el efecto de tres concentraciones diferentes de células de lagranulosa (1, 10 y 100x106 células/ml, respectivamente), sobre los porcentajes de maduración ovocitaria in vitro. En el tercer experimento, se comparó el efecto de la presencia o ausencia de células del cúmulo sobre los índices de maduración oocitaria in vitro. Los índices de maduración en el estadio de metafase 11, siguientes a la suplementación con un 20 p.100 FFB (60 p.100) fueron significativamente superiore

Effect of the culture medium and protein supplementation on in vitro maturation of bovine oocytes

In the present work, the effects of oocyte maturation medium and protein supplementation on in vitro maturation process of immature bovine oocytes are described. Three different culture media, such as: TCM-199 medium, DME medium and H-Y medium, and four different protein supplements (bovine follicular fluid: BFF; fetal calf serum: FCS; albumen fraction V of bovine serum: BSA; and bovine amniotic fIuid: BAF) were used. The oocyte maturation rates obtained using TCM-199 medium were significantly higher (81.8 p.cent; p0.05), was higher than that obtained in control group (45.5 p.cent), although such differences were not signif icant. By contrast, oocytes matured in presence of FCS (81 p.cent), BSA (86.2 p.cent) or BAF (77.9 p. cent) showed meiotic maturation rates significantly higher (p0,05), fue superior al conseguido por los ovocitos del grupo control (45,5 p.100), aunque tales diferencias no fueron significativas. Por el contrario, los ovocitos madurados en presencia de FCS (81 p.100), BSA (86,2 p.100) o BAF (77,9 p.100) mostraron unos indices de maduración meiótica significativamente superiores (p<0,001) a los conseguidos por el grupo control. En conclusión, los resultados obtenidos en el presente trabajo indican que el medio TCM-199 fue superior, en cuanto al número de ovocitosque alcanzaron el estadio de maduración, en comparación con losmed¡os D M E y H-Y. Así mismo, la suplementación proteica contribuyó a incrementar el porcentaje de ovoc¡los que alcanzaron el estadio de metafase-II. Además, los mayores porcentajes de maduración se consiguieron cuando el medio de maduración se suplementó con FCS, BSA y BAF

Influence of human and bovine insulin on in vitro maturation, fertilization and cleavage rates of bovine oocytes

Se realizó un estudio para determinar los efectos de la suplementación del medio de maduración con insulina humana o bovina sobre los índices de maduración, fecundación y división in vitro de ovocitos de bovino. Ovocitos de bovino se cultivaron en medio de maduración (TCM-199 conteniendo 10 p.100 de suero de ternero fetal) con o sin insulina humana o bovina (10 mg/ml). Para la insulina bovina, los índices de maduración (80,3 p.100), fecundación (61,3 p.100) y división (55,3 p.100) fueron superiores significativamente (p<0,05) que aquellos obtenidos por el grupo control (70,1; 50,1 y 42,5 p.100 respectivamente). Además, los porcentajes de óvulos divididos obtenidos en presencia de insulina humana o bovina (54,8 y 55,3 p.100 respectivamente), fueron superiores significativamente (p<0,05) en comparación con los obtenidos por el grupo control (42,5 p.100). No se apreciaron diferencias significativas entre los tratamientos con insulina humana y bovina. Estos resultados ponen de manifiesto que la adición de insulina humana o bovina al medio de maduración incrementa los porcentajes de ovocitos maduros, mejorando posteriormente los índices de fecundación y división de ovocitos de bovino in vitro

Efecto del medio de cultivo y la suplementación proteica en la maduración "in vitro" de ovocitos bovinos

En el presente trabajo se describen los efectos del medio de maduración ovocitaria y de la suplementación proteica sobre el proceso de maduración ovocitaria in vitro de oocitos inmaduros de vacuno. Para ello se usaron tres medios de cultivo diferentes, tales como: medioTCM-199, medio DME y medio H-Y, así como cuatro suplementos proteicos distintos (fluido folicular bovino: BFF; suero fetal bovino: FCS; fracción V albuminosa del suero bovino: BSA; y liquido amniótico bovino: BAF). Los índices de maduración ovocitaria obtenidos, usando el medio TCM-199, fueron significativamente superiores (81,8 p.100; p0,05), fue superior al conseguido por los ovocitos del grupo control (45,5 p.100), aunque tales diferencias no fueron significativas. Por el contrario, los ovocitos madurados en presencia de FCS (81 p.100), BSA (86,2 p.100) o BAF (77,9 p.100) mostraron unos indices de maduración meiótica significativamente superiores (p<0,001) a los conseguidos por el grupo control. En conclusión, los resultados obtenidos en el presente trabajo indican que el medio TCM-199 fue superior, en cuanto al número de ovocitosque alcanzaron el estadio de maduración, en comparación con losmed¡os D M E y H-Y. Así mismo, la suplementación proteica contribuyó a incrementar el porcentaje de ovoc¡los que alcanzaron el estadio de metafase-II. Además, los mayores porcentajes de maduración se consiguieron cuando el medio de maduración se suplementó con FCS, BSA y BAF

Efecto del medio de cultivo y la suplementación proteica en la maduración "in vitro" de ovocitos bovinos

En el presente trabajo se describen los efectos del medio de maduración ovocitaria y de la suplementación proteica sobre el proceso de maduración ovocitaria in vitro de oocitos inmaduros de vacuno. Para ello se usaron tres medios de cultivo diferentes, tales como: medioTCM-199, medio DME y medio H-Y, así como cuatro suplementos proteicos distintos (fluido folicular bovino: BFF; suero fetal bovino: FCS; fracción V albuminosa del suero bovino: BSA; y liquido amniótico bovino: BAF). Los índices de maduración ovocitaria obtenidos, usando el medio TCM-199, fueron significativamente superiores (81,8 p.100; p0,05), fue superior al conseguido por los ovocitos del grupo control (45,5 p.100), aunque tales diferencias no fueron significativas. Por el contrario, los ovocitos madurados en presencia de FCS (81 p.100), BSA (86,2 p.100) o BAF (77,9 p.100) mostraron unos indices de maduración meiótica significativamente superiores (p<0,001) a los conseguidos por el grupo control. En conclusión, los resultados obtenidos en el presente trabajo indican que el medio TCM-199 fue superior, en cuanto al número de ovocitosque alcanzaron el estadio de maduración, en comparación con losmed¡os D M E y H-Y. Así mismo, la suplementación proteica contribuyó a incrementar el porcentaje de ovoc¡los que alcanzaron el estadio de metafase-II. Además, los mayores porcentajes de maduración se consiguieron cuando el medio de maduración se suplementó con FCS, BSA y BAF

Un método optimizado para el análisis cromosómico de ovocitos y cigotos obtenidos mediante técnicas de maduración y fecundación in vitro

Se logró optimizar un método rápido para analizar citogenéticamente ovocitos y cigotos de bovino obtenidos mediante técnicas de maduración y fecundación in vitro (MIV y FIV). El método, el cual utiliza una solución hipotónica con tripsina, un sistema de agitación mediante vortex y un sistema doble de fijación en frío, contribuye a eliminar fácilmente la zona pelúcida y a hinchar a los ovocitos y cigotos favoreciendo posteriormente la extensión de los cromosomas. Este método permite obtener preparaciones de muy buena calidad para el análisis tanto del número como de la morfología de los cromosomas de los ovocitos y cigotos en cualquier estadío meiótico y mitótico