The site of allergen expression in hematopoietic cells determines the degree and quality of tolerance induced through molecular chimerism

The transplantation of allergens (e.g. Phl p 5 or Bet v 1) expressed on BM cells as membrane-anchored full-length proteins leads to permanent tolerance at the T-cell, B-cell, and effector-cell levels. Since the exposure of complete allergens bears the risk of inducing anaphylaxis, we investigated here whether expression of Phl p 5 in the cytoplasm (rather than on the cell surface) is sufficient for tolerance induction. Transplantation of BALB/c BM retrovirally transduced to express Phl p 5 in the cytoplasm led to stable and durable molecular chimerism in syngeneic recipients (∼20% chimerism at 6 months). Chimeras showed allergen-specific T-cell hyporesponsiveness. Further, Phl p 5-specific TH1-dependent humoral responses were tolerized in several chimeras. Surprisingly, Phl p 5-specific IgE and IgG1 levels were significantly reduced but still detectable in sera of chimeric mice, indicating incomplete B-cell tolerance. No Phl p 5-specific sIgM developed in cytoplasmic chimeras, which is in marked contrast to mice transplanted with BM expressing membrane-anchored Phl p 5. Thus, the expression site of the allergen substantially influences the degree and quality of tolerance achieved with molecular chimerism in IgE-mediated allergy

Allograft rejection is associated with development of functional IgE specific for donor MHC antigens.

BACKGROUND: Donor-specific antibodies of the IgG isotype are measured routinely for diagnostic purposes in renal transplant recipients and are associated with antibody-mediated rejection and long-term graft loss. OBJECTIVE: This study aimed to investigate whether MHC-specific antibodies of the IgE isotype are induced during allograft rejection. METHODS: Anti-MHC/HLA IgE levels were measured in sera of mice grafted with skin or heart transplants from various donor strains and in sera of kidney transplant patients with high levels of HLA IgG. Mediator release was triggered in vitro by stimulating basophils that were coated with murine or human IgE-positive serum, respectively, with specific recombinant MHC/HLA antigens. Kidney tissue samples obtained from organ donors were analyzed by using flow cytometry for cells expressing the high-affinity receptor for IgE (FcεRI). RESULTS: Donor MHC class I- and MHC class II-specific IgE was found on acute rejection of skin and heart grafts in several murine strain combinations, as well as during chronic antibody-mediated heart graft rejection. Anti-HLA IgE, including donor HLA class I and II specificities, was identified in a group of sensitized transplant recipients. Murine and human anti-MHC/HLA IgE triggered mediator release in coated basophils on stimulation with specific MHC/HLA antigens. HLA-specific IgE was not linked to atopy, and allergen-specific IgE present in allergic patients did not cross-react with HLA antigens. FcεRI+ cells were found in the human renal cortex and medulla and provide targets for HLA-specific IgE. CONCLUSION: These results demonstrate that MHC/HLA-specific IgE develops during an alloresponse and is functional in mediating effector mechanisms

Adoptive transfer of allergen-expressing B cells prevents IgE-mediated allergy

IntroductionProphylactic strategies to prevent the development of allergies by establishing tolerance remain an unmet medical need. We previously reported that the transfer of autologous hematopoietic stem cells (HSC) expressing the major timothy grass pollen allergen, Phl p 5, on their cell surface induced allergen-specific tolerance in mice. In this study, we investigated the ability of allergen-expressing immune cells (dendritic cells, CD4+ T cells, CD8+ T cells, and CD19+ B cells) to induce allergen-specific tolerance in naive mice and identified CD19+ B cells as promising candidates for allergen-specific cell therapy.MethodsFor this purpose, CD19+ B cells were isolated from Phl p 5-transgenic BALB/c mice and transferred to naive BALB/c mice, pre-treated with a short course of rapamycin and an anti-CD40L antibody. Subsequently, the mice were subcutaneously sensitized three times at 4-week intervals to Phl p 5 and Bet v 1 as an unrelated control allergen. Allergen-expressing cells were followed in the blood to monitor molecular chimerism, and sera were analyzed for Phl p 5- and Bet v 1-specific IgE and IgG1 levels by RBL assay and ELISA, respectively. In vivo allergen-induced lung inflammation was measured by whole-body plethysmography, and mast cell degranulation was determined by skin testing.ResultsThe transfer of purified Phl p 5-expressing CD19+ B cells to naive BALB/c mice induced B cell chimerism for up to three months and prevented the development of Phl p 5-specific IgE and IgG1 antibody responses for a follow-up period of 26 weeks. Since Bet v 1 but not Phl p 5-specific antibodies were detected, the induction of tolerance was specific for Phl p 5. Whole-body plethysmography revealed preserved lung function in CD19+ B cell-treated mice in contrast to sensitized mice, and there was no Phl p 5-induced mast cell degranulation in treated mice.DiscussionThus, we demonstrated that the transfer of Phl p 5-expressing CD19+ B cells induces allergen-specific tolerance in a mouse model of grass pollen allergy. This approach could be further translated into a prophylactic regimen for the prevention of IgE-mediated allergy in humans

THE ROLE OF FINANCIAL RATIOS IN RECOGNIZING THE BUSINESS CRISIS AND THE PROCESS OF ENTERPRISE RESTRUCTURING

Poslovna kriza ima negativan učinak na poslovanje poduzeća uslijed djelovanja različitih vanjskih i unutarnjih faktora što može naposlijetku dovesti poduzeće do likvidacije i bankrota. Simptomi krize su mnogi, a potrebno ih je identificirati u što ranijoj fazi kako bi menadžment mogao poduzeti potrebne mjere za suzbijanje negativnog rezultata poslovanja, odnosno preokrenuti dosadašnji tijek poslovanja k pozitivnim trendovima. Cilj ovog rada je utvrditi stanje promatranog poduzeća pomoću poslovne analize koja uključuje analizu temeljnih financijskih izvještaja i analizu financijskih pokazatelja te analizu industrije u kojoj poduzeće posluje. Provedenom poslovnom analizom nastoji se identificirati postojanje krize te odrediti mjere za suzbijanje njenog utjecaja na daljnje poslovanje poduzeća. Pri samom početku restrukturiranja, potrebno je što je moguće realnije kvantificirati željene rezultate poslovanja i to korištenjem planskih financijskih izvještaja i pokazatelja. Da bi se to postiglo, potrebno je utvrditi mjere koje će dovesti do planiranog stanja poduzeća, a koje uključuju promjene u operativnom i financijskom poslovanju. Na primjeru promatranog poduzeća, određene mjere restrukturiranja dovele su do poboljšanja financijskog stanja poduzeća već u prvoj godini poslovanja, no određeni financijski pokazatelji i dalje ukazuju na loše rezultate i daju smjernice za daljnje unapređenje. Zbog toga je restrukturiranje dugotrajan proces, za kojeg nije realno očekivati da će pozitivne rezultate pokazati već u prvoj godini poslovanja. Ujedno je složen proces obzirom da ga je potrebno provesti na sveobuhvatnoj razini, uključuje sve organizacijske dijelove, a nerijetko uključuje i ostale dionike van poduzeća poput kupaca, dobavljača i vjerovnika. Prije početka provođenja mjera bitno je sagledati je li postupak restrukturiranja opravdan, odnosno potrebno je ustanoviti postoji li u poduzeću i dalje zdrava jezgra zbog koje je moguće preokrenuti poslovanje k pozitivnom smjeru. U suprotnom, oportunije je što prije započeti s procesom likvidacije poduzeća, kako bi se izbjeglo još veće umanjenje preostale vrijednosti poduzeća

THE ROLE OF FINANCIAL RATIOS IN RECOGNIZING THE BUSINESS CRISIS AND THE PROCESS OF ENTERPRISE RESTRUCTURING

Poslovna kriza ima negativan učinak na poslovanje poduzeća uslijed djelovanja različitih vanjskih i unutarnjih faktora što može naposlijetku dovesti poduzeće do likvidacije i bankrota. Simptomi krize su mnogi, a potrebno ih je identificirati u što ranijoj fazi kako bi menadžment mogao poduzeti potrebne mjere za suzbijanje negativnog rezultata poslovanja, odnosno preokrenuti dosadašnji tijek poslovanja k pozitivnim trendovima. Cilj ovog rada je utvrditi stanje promatranog poduzeća pomoću poslovne analize koja uključuje analizu temeljnih financijskih izvještaja i analizu financijskih pokazatelja te analizu industrije u kojoj poduzeće posluje. Provedenom poslovnom analizom nastoji se identificirati postojanje krize te odrediti mjere za suzbijanje njenog utjecaja na daljnje poslovanje poduzeća. Pri samom početku restrukturiranja, potrebno je što je moguće realnije kvantificirati željene rezultate poslovanja i to korištenjem planskih financijskih izvještaja i pokazatelja. Da bi se to postiglo, potrebno je utvrditi mjere koje će dovesti do planiranog stanja poduzeća, a koje uključuju promjene u operativnom i financijskom poslovanju. Na primjeru promatranog poduzeća, određene mjere restrukturiranja dovele su do poboljšanja financijskog stanja poduzeća već u prvoj godini poslovanja, no određeni financijski pokazatelji i dalje ukazuju na loše rezultate i daju smjernice za daljnje unapređenje. Zbog toga je restrukturiranje dugotrajan proces, za kojeg nije realno očekivati da će pozitivne rezultate pokazati već u prvoj godini poslovanja. Ujedno je složen proces obzirom da ga je potrebno provesti na sveobuhvatnoj razini, uključuje sve organizacijske dijelove, a nerijetko uključuje i ostale dionike van poduzeća poput kupaca, dobavljača i vjerovnika. Prije početka provođenja mjera bitno je sagledati je li postupak restrukturiranja opravdan, odnosno potrebno je ustanoviti postoji li u poduzeću i dalje zdrava jezgra zbog koje je moguće preokrenuti poslovanje k pozitivnom smjeru. U suprotnom, oportunije je što prije započeti s procesom likvidacije poduzeća, kako bi se izbjeglo još veće umanjenje preostale vrijednosti poduzeća

THE ROLE OF FINANCIAL RATIOS IN RECOGNIZING THE BUSINESS CRISIS AND THE PROCESS OF ENTERPRISE RESTRUCTURING

Poslovna kriza ima negativan učinak na poslovanje poduzeća uslijed djelovanja različitih vanjskih i unutarnjih faktora što može naposlijetku dovesti poduzeće do likvidacije i bankrota. Simptomi krize su mnogi, a potrebno ih je identificirati u što ranijoj fazi kako bi menadžment mogao poduzeti potrebne mjere za suzbijanje negativnog rezultata poslovanja, odnosno preokrenuti dosadašnji tijek poslovanja k pozitivnim trendovima. Cilj ovog rada je utvrditi stanje promatranog poduzeća pomoću poslovne analize koja uključuje analizu temeljnih financijskih izvještaja i analizu financijskih pokazatelja te analizu industrije u kojoj poduzeće posluje. Provedenom poslovnom analizom nastoji se identificirati postojanje krize te odrediti mjere za suzbijanje njenog utjecaja na daljnje poslovanje poduzeća. Pri samom početku restrukturiranja, potrebno je što je moguće realnije kvantificirati željene rezultate poslovanja i to korištenjem planskih financijskih izvještaja i pokazatelja. Da bi se to postiglo, potrebno je utvrditi mjere koje će dovesti do planiranog stanja poduzeća, a koje uključuju promjene u operativnom i financijskom poslovanju. Na primjeru promatranog poduzeća, određene mjere restrukturiranja dovele su do poboljšanja financijskog stanja poduzeća već u prvoj godini poslovanja, no određeni financijski pokazatelji i dalje ukazuju na loše rezultate i daju smjernice za daljnje unapređenje. Zbog toga je restrukturiranje dugotrajan proces, za kojeg nije realno očekivati da će pozitivne rezultate pokazati već u prvoj godini poslovanja. Ujedno je složen proces obzirom da ga je potrebno provesti na sveobuhvatnoj razini, uključuje sve organizacijske dijelove, a nerijetko uključuje i ostale dionike van poduzeća poput kupaca, dobavljača i vjerovnika. Prije početka provođenja mjera bitno je sagledati je li postupak restrukturiranja opravdan, odnosno potrebno je ustanoviti postoji li u poduzeću i dalje zdrava jezgra zbog koje je moguće preokrenuti poslovanje k pozitivnom smjeru. U suprotnom, oportunije je što prije započeti s procesom likvidacije poduzeća, kako bi se izbjeglo još veće umanjenje preostale vrijednosti poduzeća

Treg Therapy for the Induction of Immune Tolerance in Transplantation—Not Lost in Translation?

The clinical success of solid organ transplantation is still limited by the insufficiency of immunosuppressive regimens to control chronic rejection and late graft loss. Moreover, serious side effects caused by chronic immunosuppressive treatment increase morbidity and mortality in transplant patients. Regulatory T cells (Tregs) have proven to be efficient in the induction of allograft tolerance and prolongation of graft survival in numerous preclinical models, and treatment has now moved to the clinics. The results of the first Treg-based clinical trials seem promising, proving the feasibility and safety of Treg therapy in clinical organ transplantation. However, many questions regarding Treg phenotype, optimum dosage, antigen-specificity, adjunct immunosuppressants and efficacy remain open. This review summarizes the results of the first Treg-based clinical trials for tolerance induction in solid organ transplantation and recapitulates what we have learnt so far and which questions need to be resolved before Treg therapy can become part of daily clinical practice. In addition, we discuss new strategies being developed for induction of donor-specific tolerance in solid organ transplantation with the clinical aims of prolonged graft survival and minimization of immunosuppression

Combining Adoptive Treg Transfer with Bone Marrow Transplantation for Transplantation Tolerance

Purpose of Review The mixed chimerism approach is an exceptionally potent strategy for the induction of donor-specific tolerance in organ transplantation and so far the only one that was demonstrated to work in the clinical setting. Regulatory T cells (Tregs) have been shown to improve chimerism induction in experimental animal models. This review summarizes the development of innovative BMT protocols using therapeutic Treg transfer for tolerance induction. Recent Findings Treg cell therapy promotes BM engraftment in reduced conditioning protocols in both, mice and non-human primates. In mice, transfer of polyclonal recipient Tregs was sufficient to substitute cytotoxic recipient conditioning. Treg therapy prevented chronic rejection of skin and heart allografts related to tissue-specific antigen disparities, in part by promoting intragraft Treg accumulation. Summary Adoptive Treg transfer is remarkably effective in facilitating BM engraftment in reduced-intensity protocols in mice and non-human primates. Furthermore, it promotes regulatory mechanisms that prevent chronic rejection.(VLID)356997