Activación de genes endógenos humanos de precursores óticos y de células ciliadas del oído interno mediante CRISPR-VP160

ntroducción: Últimas investigaciones en la biología celular y molecular del oído interno han aportado evidencias que apoyan nuevas modalidades terapéuticas en medicina regenerativa para restablecer la audición. Recientemente se ha utilizado elsistemaCRISPR-VP160paramejorarlosensayos de reprogramación celular de manera in vitro e in vivo. CRISPR-VP160 se compone de una endonucleasadesactivada(dCas9)fusionadacondominios de activacióndela transcripción (VP160),queutilizan un ARN guía para localizar un gen target y activarlo. El objetivo de este trabajo fue evaluar si el sistemaCRISPR-VP160puede activarlaexpresión de genes del oído interno (SOX2, ATOH1, POU4F3 Y GFI1)enlalíneacelularHEK293T. Material y método: Se diseñaron cuatro ARN guías que reconocieran al promotor de cada gen target, usando la herramienta de diseño CRISPR (Feng ZhangLab,MIT).LosARNguíasseclonaronenel plásmidoAddgene#47108yselipofectaronjuntoal plásmido dCas9-VP160 (Addgene#48226), en una relación de 1:1 en las células HEK293T. Las células del grupo control fueron cotransfectadas con el plásmidodCas9-VP160 yunplásmido guía vacío. Los resultados fueron analizados por RT-qPCR al día 4 post-lipofección. Resultados:ElsistemaCRISPR-VP160activósignificativamente a SOX2, ATOH1 y POU4F3(p<0.05), mientras que no se observó una activación significativa de GFI1, fenómeno que podría explicarse por la expresión preexistente de este gen en la línea celular. Conclusiones: En un futuro, el sistema CRISPRVP160 podría emplearse para mejorar las estrategias de reprogramación de células, para desarrollar nuevas terapias celulares en pacientes hipoacúsicos.Introduction: Recent researches in cell and molecular biology of the inner ear bring evidence that helps the development of new therapeutic practice in regenerative medicine to restore hearing. The CRISPR system has been used to improve cell reprogramming assays both in vitro and in vivo. This consists of the inactive DNA-nuclease Cas9 (dCas9)fusedtoactivationdomainsandco-expressedsingleguideRNAs(sgRNAs)thataredesigned to hybridize a target sequence. Combined, these elements recognize a target locus and activate a specific gene. The objective of this work was to evaluate whether CRISPR-on system fused with transcriptional activators (dCas9-VP160) could activate geneexpressionofinnereargenes(SOX2,ATOH1, POU4F3andGFI1)inHEK293Tcellline. Material and method: Four guides were designed to recognize the proximal promoter of each target gene, using the CRISPR design tool (Feng Zhang Lab,MIT).ThesgRNAswereclonedintoplasmid Addgene#47108andlipofectedtogetherwithplasmiddCas9-VP160(Addgen#48226),atamassratio of 1:1in HEK293T cells. Control group was co-lipofectedwithplasmiddCas9-VP160andanempty guide plasmid. The results were analyzed by RTqPCR at day 4 post-lipofection. Results: The CRISPR-VP160 system significantly activated SOX2, ATOH1 and POU4F3 (p<0.05), whereas it did not detect a significant activation of GFI1. This phenomenon could be explained by the preexisting expression of this gene in HEK293T cells. Conclusions:Inthefuture,theCRISPR-VP160system could be used to improve reprogramming strategies of cells, to develop new cellular therapies in hearing-impaired patients.Fil: Perez Raffo, Gabriela. Hospital Italiano; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Oficina de Coordinacion Administrativa Houssay. Instituto de Medicina Traslacional E Ingenieria Biomedica. - Hospital Italiano. Instituto de Medicina Traslacional E Ingenieria Biomedica. - Instituto Universitario Hospital Italiano de Buenos Aires. Instituto de Medicina Traslacional E Ingenieria Biomedica.; ArgentinaFil: Vigezzi, Lucía. Hospital Italiano; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Oficina de Coordinacion Administrativa Houssay. Instituto de Medicina Traslacional E Ingenieria Biomedica. - Hospital Italiano. Instituto de Medicina Traslacional E Ingenieria Biomedica. - Instituto Universitario Hospital Italiano de Buenos Aires. Instituto de Medicina Traslacional E Ingenieria Biomedica.; ArgentinaFil: Giménez, Carla Alejandra. Hospital Italiano. Instituto de Ciencias Básicas y Medicina Experimental; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Oficina de Coordinacion Administrativa Houssay. Instituto de Medicina Traslacional E Ingenieria Biomedica. - Hospital Italiano. Instituto de Medicina Traslacional E Ingenieria Biomedica. - Instituto Universitario Hospital Italiano de Buenos Aires. Instituto de Medicina Traslacional E Ingenieria Biomedica.; ArgentinaFil: Boccio, Carlos Mario. Hospital Italiano; ArgentinaFil: Pereyra Bonnet, Federico Alberto. Hospital Italiano; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Oficina de Coordinacion Administrativa Houssay. Instituto de Medicina Traslacional E Ingenieria Biomedica. - Hospital Italiano. Instituto de Medicina Traslacional E Ingenieria Biomedica. - Instituto Universitario Hospital Italiano de Buenos Aires. Instituto de Medicina Traslacional E Ingenieria Biomedica.; Argentin

Proyecto de Investigación Aplicada 1 - IN45 - 202101

1Descripción: El curso Proyecto de Investigación Aplicada 1 es un curso de verificación en el que el estudiante desarrolla un proyecto de Ingeniería Industrial bajo las condiciones, recursos y limitaciones de un trabajo real. El proyecto se concluye en el curso de Proyecto de Investigación Aplicada 2. El curso comprende la identificación de un problema a resolver, el soporte teórico correspondiente, el análisis y diagnóstico de la situación o problema, y el diseño y desarrollo de las propuestas de mejora. A lo largo del desarrollo del proyecto, el estudiante demuestra el adecuado uso de criterios de ciencias e ingeniería, así como de técnicas y herramientas de la Ingeniería Industrial. Los proyectos se desarrollan principalmente bajo las modalidades de proyectos de mejora o investigación, correspondiendo en todos los casos al diseño o rediseño de procesos o sistemas de producción de bienes y servicios, proporcionando una solución o propuesta dentro del ámbito de la Ingeniería Industrial. Propósito: El curso Proyecto de Investigación Aplicada 1 permite al estudiante desarrollar un proyecto de Ingeniería Industrial aplicando los conceptos, técnicas y herramientas aprendidos a lo largo de la carrera, bajo condiciones, recursos y limitaciones de un trabajo real. El curso contribuye directamente al desarrollo de las competencias generales Comunicación Oral, Comunicación Escrita y Pensamiento Crítico, todas a nivel 3 y a las competencias específicas de ABET: (2) Tiene la capacidad de aplicar el diseño de ingeniería para producir soluciones que satisfagan las necesidades especificas con consideraciones de salud publica seguridad y bienestar, así como factores globales, culturales, sociales, ambientales y económicos. (nivel 3) (6) Tiene la capacidad de desarrollar y llevar a cabo una experimentación adecuada, analizar e interpretar datos, y usar el juicio de ingeniería para sacar conclusiones. (nivel 3) (7) Tiene la capacidad de adquirir y aplicar nuevos conocimientos según sea necesario, utilizando estrategias de aprendizaje apropiadas. (nivel 3) Los requisitos del curso son: IN216 Gerencia de Proyectos, IN97 Logística Integrada y Cadena de Abastecimientos e IN397 Seminario de Investigación Académica II (Ing)

Proyecto de Investigación Aplicada 2 - IN46 - 202102

Descripción: El curso Proyecto de Investigación Aplicada 2 es un curso de verificación en el que el estudiante desarrolla un proyecto de Ingeniería Industrial bajo las condiciones, recursos y limitaciones de un trabajo real. El proyecto se concluye en este curso de Proyecto de Investigación Aplicada 2. El curso comprende la identificación de un problema a resolver, el soporte teórico correspondiente, el análisis y diagnóstico de la situación o problema, y el diseño y desarrollo de las propuestas de mejora. A lo largo del desarrollo del proyecto, el estudiante demuestra el adecuado uso de criterios de ciencias e ingeniería, así como de técnicas y herramientas de la Ingeniería Industrial. Los proyectos se desarrollan principalmente bajo las modalidades de proyectos de mejora,mejora integral de proceso o investigación sectorial, correspondiendo en todos los casos al diseño o rediseño de procesos o sistemas de producción de bienes y servicios, proporcionando una solución o propuesta dentro del ámbito de la Ingeniería Industrial. Propósito: El curso Proyecto de Investigación Aplicada 2 permite al estudiante desarrollar un proyecto de Ingeniería Industrial aplicando los conceptos, técnicas y herramientas aprendidos a lo largo de la carrera, bajo condiciones, recursos y limitaciones de un trabajo real. El curso contribuye directamente al desarrollo de las competencias generales Comunicación Oral, Comunicación Escrita, Pensamiento Innovador, Ciudadanía y Razonamiento Cuantitativo, a nivel 3 y a las competencias específicas ABET : (1) Capacidad de identificar, formular y resolver problemas complejos de ingeniería aplicando los principios de ingeniería, ciencia y matemática (nivel 3) (3) Capacidad de comunicarse efectivamente con una gama de audiencias (nivel 3) (4) Capacidad de reconocer responsabilidades éticas y profesionales en situaciones de ingeniería y emitir juicios informados, que deben considerar el impacto de las soluciones de ingeniería en contextos globales, económicos, ambientales y sociales (nivel 3) (5) Capacidad de funcionar efectivamente en un equipo cuyos miembros juntos proporcionan liderazgo, crean un entorno colaborativo e inclusivo, establecen objetivos, planifican tareas y cumplen objetivos (nivel 3) Los requisitos del curso son: IN217 Gestión por Procesos e IN45 Proyecto de Investigación Aplicada 1

Effects of once-weekly exenatide on cardiovascular outcomes in type 2 diabetes

BACKGROUND: The cardiovascular effects of adding once-weekly treatment with exenatide to usual care in patients with type 2 diabetes are unknown. METHODS: We randomly assigned patients with type 2 diabetes, with or without previous cardiovascular disease, to receive subcutaneous injections of extended-release exenatide at a dose of 2 mg or matching placebo once weekly. The primary composite outcome was the first occurrence of death from cardiovascular causes, nonfatal myocardial infarction, or nonfatal stroke. The coprimary hypotheses were that exenatide, administered once weekly, would be noninferior to placebo with respect to safety and superior to placebo with respect to efficacy. RESULTS: In all, 14,752 patients (of whom 10,782 [73.1%] had previous cardiovascular disease) were followed for a median of 3.2 years (interquartile range, 2.2 to 4.4). A primary composite outcome event occurred in 839 of 7356 patients (11.4%; 3.7 events per 100 person-years) in the exenatide group and in 905 of 7396 patients (12.2%; 4.0 events per 100 person-years) in the placebo group (hazard ratio, 0.91; 95% confidence interval [CI], 0.83 to 1.00), with the intention-to-treat analysis indicating that exenatide, administered once weekly, was noninferior to placebo with respect to safety (P<0.001 for noninferiority) but was not superior to placebo with respect to efficacy (P=0.06 for superiority). The rates of death from cardiovascular causes, fatal or nonfatal myocardial infarction, fatal or nonfatal stroke, hospitalization for heart failure, and hospitalization for acute coronary syndrome, and the incidence of acute pancreatitis, pancreatic cancer, medullary thyroid carcinoma, and serious adverse events did not differ significantly between the two groups. CONCLUSIONS: Among patients with type 2 diabetes with or without previous cardiovascular disease, the incidence of major adverse cardiovascular events did not differ significantly between patients who received exenatide and those who received placebo

Rationale, design, and baseline characteristics in Evaluation of LIXisenatide in Acute Coronary Syndrome, a long-term cardiovascular end point trial of lixisenatide versus placebo

BACKGROUND: Cardiovascular (CV) disease is the leading cause of morbidity and mortality in patients with type 2 diabetes mellitus (T2DM). Furthermore, patients with T2DM and acute coronary syndrome (ACS) have a particularly high risk of CV events. The glucagon-like peptide 1 receptor agonist, lixisenatide, improves glycemia, but its effects on CV events have not been thoroughly evaluated. METHODS: ELIXA (www.clinicaltrials.gov no. NCT01147250) is a randomized, double-blind, placebo-controlled, parallel-group, multicenter study of lixisenatide in patients with T2DM and a recent ACS event. The primary aim is to evaluate the effects of lixisenatide on CV morbidity and mortality in a population at high CV risk. The primary efficacy end point is a composite of time to CV death, nonfatal myocardial infarction, nonfatal stroke, or hospitalization for unstable angina. Data are systematically collected for safety outcomes, including hypoglycemia, pancreatitis, and malignancy. RESULTS: Enrollment began in July 2010 and ended in August 2013; 6,068 patients from 49 countries were randomized. Of these, 69% are men and 75% are white; at baseline, the mean ± SD age was 60.3 ± 9.7 years, body mass index was 30.2 ± 5.7 kg/m(2), and duration of T2DM was 9.3 ± 8.2 years. The qualifying ACS was a myocardial infarction in 83% and unstable angina in 17%. The study will continue until the positive adjudication of the protocol-specified number of primary CV events. CONCLUSION: ELIXA will be the first trial to report the safety and efficacy of a glucagon-like peptide 1 receptor agonist in people with T2DM and high CV event risk

Alirocumab and cardiovascular outcomes after acute coronary syndrome

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Alirocumab and Cardiovascular Outcomes after Acute Coronary Syndrome

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