Biomodification of acenocoumarol by bifidobacteria

The increased interest of consumers in probiotic foods requires a deeper knowledge on the possible interactions with drugs, because their pharmacological properties could be modified. In this context, these studies are relevant for drugs such as acenocoumarol, whose dosage must be controlled due to, among other factors, food-drug interactions. Acenocoumarol is an oral anticoagulant with a narrow therapeutic range. The aim of the present research is to evaluate, in vitro, the effect of bifidobacteria on acenocoumarol. The drug was incubated with Bifidobacterium bifidum CIDCA 5310 or Bifidobacterium adolescentis CIDCA 5317 in MRS broth at 37°C for 24 h in anaerobic conditions. The effect of incubation with sterilized spent culture supernatants (SSCS) was also evaluated. Analysis by RP-HPLC showed that both bifidobacterial strains reduced the area of the acenocoumarol peak and two new peaks were evidenced. In addition, a decrease in the intensity of the bands at 1650, 1390 and 1110/cm was observed in the FTIR spectroscopic determinations. Moreover, a new band appeared at 1720/cm. No effect on the drug was observed when incubation was performed with SSCS. The present study showed a significant change in the concentration of the anticoagulant after incubation with bifidobacteria and results are compatible with biomodification of the drug due to enzymatic activity of bifidobacteria.Fil: Fragomeno, Melisa. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos; ArgentinaFil: Assad, Sabrina Eliana. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos; ArgentinaFil: Mobili, Pablo. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos; ArgentinaFil: Peruzzo, Pablo Jose. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Fisicoquímicas Teóricas y Aplicadas. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Investigaciones Fisicoquímicas Teóricas y Aplicadas; ArgentinaFil: Minnaard, Jessica. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos; ArgentinaFil: Perez, Pablo Fernando. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos; Argentin

Lipid raft-dependent adhesion of Giardia intestinalis trophozoites to a cultured human enterocyte-like Caco-2/TC7 cell monolayer leads to cytoskeleton-dependent functional injuries

Gardia intestinalis, the aetiological agent of giardiasis, one of the most common intestinal diseases in both developing and developed countries, induces a loss of epithelial barrier function and functional injuries of the enterocyte by mechanisms that remain unknown. Three possible mechanisms have been proposed: (i) Giardia may directly alter the epithelial barrier after a close interaction between the trophozoite and polarized intestinal cells, (ii) intestinal functions may be altered by factors secreted by Giardia including an ‘enterotoxin’, proteinases and lectins, and (iii) based on mouse studies, a mechanism involving the intervention of activated T lymphocytes. We used fully differentiated cultured human intestinal Caco‐2/TC7 cells forming a monolayer and expressing several polarized functions of enterocytes of small intestine to investigate the mechanisms by which G. intestinalis induces structural and functional alterations in the host intestinal epithelium. We first report that adhesion of G. intestinalis at the brush border of enterocyte‐like cells involves the lipid raft membrane microdomains of the trophozoite. We report an adhesion‐dependent disorganization of the apical F‐actin cytoskeleton that, in turn, results in a dramatic loss of distribution of functional brush border‐associated proteins, including sucrase‐isomaltase (SI), dipeptidylpeptidase IV (DPP IV) and fructose transporter, GLUT5, and a decrease in sucrose enzyme activity in G. intestinalis ‐infected enterocyte‐like cells. We observed that the G. intestinalis trophozoite promotes an adhesion‐dependent decrease in transepithelial electrical resistance (TER) accompanied by a rearrangement of functional tight junction (TJ)‐associated occludin, and delocalization of claudin‐1. Finally, we found that whereas the occludin rearrangement induced by G. intestinalis was related to apical F‐actin disorganization, the delocalization of claudin‐1 was not.Fil: Humen, Martin Andres. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos; ArgentinaFil: Perez, Pablo Fernando. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos; ArgentinaFil: Liévin Le Moal, Vanessa. Université Paris Sud; Francia. Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale; Franci

Lactobacillus delbrueckii subsp lactis (strain CIDCA 133) resists the antimicrobial activity triggered by molecules derived from enterocyte-like Caco-2 cells

Aims: The aim of the present study was to assess the ability of a potentially probiotic strain to resist, in vitro, the effect of intestinal antimicrobial molecules. Methods and results: Strain CIDCA 133 of Lactobacillus delbrueckii subsp lactis was studied. Lactobacillus delbrueckii subsp bulgaricus as well as other gram-positive and gram-negative bacteria were used for comparison purposes. The effect of different antimicrobial extracts was determined by diffusion assays, viable counts and growth kinetics. Human-defensins (hβD1 and hβD2) were also included in the study. Two types of cellular fractions from Caco-2 cells were tested: (i) cytosolic fractions, obtained by sonication of cultured human enterocytes and (ii) cationic fraction, obtained by batch extraction of the cytosolic fraction with a weak cation exchange resin. In addition, the effect of Caco-2-secreted factors was studied. Strain CIDCA 133 was neither inhibited by Caco-2 secreted, cytosolic nor cationic fractions. Of note, human-defensins were inactive against strain CIDCA 133. In contrast, a related lactobacilli: Lactobacilli delbrueckii subsp bulgaricus (strain CIDCA 331) and other species of gram-positive or gram-negative bacteria were strongly inhibited. Conclusions: Strain CIDCA 133 is able to survive and grow in the presence of enterocyte-derived antimicrobial molecules. This ability is not a general property of lactobacilli. Significance and Impact of the Study: Results could provide a new insight into the mechanisms of the probiotic effect and encourage further studies on this field. Resistance to antimicrobial peptides can be relevant to understand the interaction of potentially probiotic strains with the host′s immune system. This ability can be also relevant as a selection criterion for new probiotic strains.Fil: Hugo, Ayelen Amelia. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos; ArgentinaFil: de Antoni, Graciela Liliana. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos; ArgentinaFil: Perez, Pablo Fernando. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos; Argentin

In vitro interaction between Bacillus megaterium strains and Caco-2 cells

To further our understanding of the virulence potential of Bacillus megaterium strains, cell association and invasion assays were conducted in vitro by infecting human enterocytes (Caco-2 cells) with 53 strains of this bacterium isolated from honey. Two series of experiments were performed: (i) necrosis and cell detachment assays with the supernatants of bacterial culture fi ltrates from 16-h cultures and (ii) adhesion/invasion assays in which cultured enterocytes incubated with bacteria from 3-h cultures were resuspended in Dulbecco’s modifi ed Eagle’s medium and chloramphenicol. The detachment of Caco-2 cells was evaluated by staining the cells with crystal violet. Necrosis was assessed by fl uorescence microscopy of cells labeled with propidium iodide. Association (adhesion plus invasion) was determined by plate counts and invasion in an aminoglycoside protection assay. The results showed that spent culture supernatants detached and necrotized Caco-2 cells in a strain-dependent manner. Seven out of 53 B. megaterium fi ltered culture supernatants caused complete cell detachment. Suspensions of these same bacterial strains adhered and invaded enterocytes in 2-h infection experiments. To our knowledge, this is the fi rst report on the interaction between B. megaterium and intestinal epithelial Caco-2 cells.Fil: López, Ana Claudia. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Agrarias y Forestales. Departamento de Ciencias Biológicas. Centro en Investigación de Fitopatología; Argentina;Fil: Minnaard, Jessica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico La Plata. Centro de Investigaciones en Criotecnología de Alimentos (i); Argentina;Fil: Perez, Pablo Fernando. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico La Plata. Centro de Investigaciones en Criotecnología de Alimentos (i); Argentina; Universidad Nacional de la Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Departamento de Ciencias Biológicas. Cátedra de Microbiología General; Argentina;Fil: Alippi, Adriana Mónica. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Agrarias y Forestales. Departamento de Ciencias Biológicas. Centro en Investigación de Fitopatología; Argentina

Star Formation in a Stellar Mass Selected Sample of Galaxies to z=3 from the GOODS NICMOS Survey (GNS)

We present a study of the star-forming properties of a stellar mass-selected sample of galaxies in the GOODS NICMOS Survey (GNS), based on deep Hubble Space Telescope imaging of the GOODS North and South fields. Using a stellar mass selected sample, combined with HST/ACS and Spitzer data to measure both UV and infrared derived star formation rates (SFR), we investigate the star forming properties of a complete sample of ~1300 galaxies down to log M*=9.5 at redshifts 1.5<z<3. Eight percent of the sample is made up of massive galaxies with M*>10^11 Msun. We derive optical colours, dust extinctions, and ultraviolet and infrared SFR to determine how the star formation rate changes as a function of both stellar mass and time. Our results show that SFR increases at higher stellar mass such that massive galaxies nearly double their stellar mass from star formation alone over the redshift range studied, but the average value of SFR for a given stellar mass remains constant over this 2 Gyr period. Furthermore, we find no strong evolution in the SFR for our sample as a function of mass over our redshift range of interest, in particular we do not find a decline in the SFR among massive galaxies, as is seen at z < 1. The most massive galaxies in our sample (log M*>11) have high average SFRs with values, SFR(UV,corr) = 103+/-75 Msun/yr, yet exhibit red rest-frame (U-B) colours at all redshifts. We conclude that the majority of these red high-redshift massive galaxies are red due to dust extinction. We find that A(2800) increases with stellar mass, and show that between 45% and 85% of massive galaxies harbour dusty star formation. These results show that even just a few Gyr after the first galaxies appear, there are strong relations between the global physical properties of galaxies, driven by stellar mass or another underlying feature of galaxies strongly related to the stellar mass.Comment: 18 pages, 10 figures, accepted for publication in MNRA

Suitability of kefir powder production using spray drying

Spray drying was applied for the production of kefir powder. The survival of microorganisms after drying, storage and simulated gastrointestinal (GI) conditions was investigated. Kefir was obtained by fermentation of milk and whey permeate, and was dehydrated directly (traditional kefir) or using different carriers (skim milk, whey permeate and maltodextrin). Low survival (5.5 log and <2 log CFU/g for lactic acid bacteria and yeast respectively) of microorganisms was achieved when kefir was dehydrated without thermoprotectants (carriers). In contrast, survival of the microorganisms was significantly improved in the presence of different carriers. When skim milk (SM) was used as the carrier medium, lactic acid bacteria (LAB) survival was above 9 log CFU/g. In contrast, viability of yeast was dramatically reduced after spray drying in these conditions. When whey permeate was used as the carrier medium, LAB survival was 8 log CFU/g and yeast survival was above 4 log CFU/g. LAB in the kefir powder survived better the simulated GI conditions when spray drying was conducted in SM. LAB in kefir powder sample dehydrated in SM and SM plus maltodextrin remained stable for at least 60 days at 4 °C. Our results demonstrated that spray drying of kefir is a suitable approach to obtain a concentrated kefir-derived product.Fil: Teijeiro, Manuel. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Universidad Nacional de la Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos; ArgentinaFil: Perez, Pablo Fernando. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Universidad Nacional de la Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos; ArgentinaFil: de Antoni, Graciela Liliana. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Departamento de Ciencias Biológicas. Cátedra de Microbiología General; ArgentinaFil: Golowczyc, Marina Alejandra. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Departamento de Ciencias Biológicas. Cátedra de Microbiología General; Argentina. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Universidad Nacional de la Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos; Argentin

Clinical and molecular characterization of a cardiac ryanodine receptor founder mutation causing catecholaminergic polymorphic ventricular tachycardia

Background Catecholaminergic polymorphic ventricular tachycardia (CPVT) is a difficult-to-diagnose cause of sudden cardiac death (SCD). We identified a family of 1400 individuals with multiple cases of CPVT, including 36 SCDs during youth. Objectives We sought to identify the genetic cause of CPVT in this family, to preventively treat and clinically characterize the mutation-positive individuals, and to functionally characterize the pathogenic mechanisms of the mutation. Methods Genetic testing was performed for 1404 relatives. Mutation-positive individuals were preventively treated with β-blockers and clinically characterized with a serial exercise treadmill test (ETT) and Holter monitoring. In vitro functional studies included caffeine sensitivity and store overload–induced calcium release activity of the mutant channel in HEK293 cells. Results We identified the p.G357S_RyR2 mutation, in the cardiac ryanodine receptor, in 179 family members and in 6 SCD cases. No SCD was observed among treated mutation-positive individuals over a median follow-up of 37 months; however, 3 relatives who had refused genetic testing (confirmed mutation-positive individuals) experienced SCD. Holter monitoring did not provide relevant information for CPVT diagnosis. One single ETT was unable to detect complex cardiac arrhythmias in 72% of mutation-positive individuals, though the serial ETT improved the accuracy. Functional studies showed that the G357S mutation increased caffeine sensitivity and store overload–induced calcium release activity under conditions that mimic catecholaminergic stress. Conclusion Our study supports the use of genetic testing to identify individuals at risk of SCD to undertake prophylactic interventions. We also show that the pathogenic mechanisms of p.G357S_RyR2 appear to depend on β-adrenergic stimulation

ALIMENTOS PROBIÓTICOS: INTERACCIÓN CON ANTICOAGULANTES ORALES

Los alimentos probióticos han adquirido relevancia debido a la gran demanda de los consumidores de alimentos saludables. En ese mismo contexto, existe una prevalencia de enfermedades crónicas para las cuales no hay cura pero sí tratamiento, y por ende hay una gran cantidad de pacientes polimedicados por diversas enfermedades crónicas (hipertensión e hipercolesterolemia son algunos ejemplos). Esto lleva a que tanto el consumidor como la industria demanden del conocimiento de la acción específica que cada microorganismo probiótico o sustancia bioactiva tiene sobre el individuo y cómo afectan los factores intrínsecos y extrínsecos del individuo al producto, así como las interacciones de los alimentos funcionales con los medicamentos. Esto es particularmente importante en medicamentos de estrecho margen terapéutico como algunos anticoagulantes, cuya dosificación es afectada por interacciones con los alimentos u otros medicamentos, variaciones genéticas del individuo y podría ser afectada por factores que alteren su solubilidad, ya que pertenecen a la clase II del Sistema de Clasificación Biofarmacéutica (SCB). Este sistema clasifica a las drogas orales según su solubilidad y permeabilidad; las drogas de la clase II son de baja solubilidad y alta permeabilidad y se conoce que las sales biliares aumentan su solubilidad. &nbsp; Este plan de trabajo propone seleccionar cepas potencialmente probióticas con actividad enzimática sobre sales biliares, para luego estudiar in vitro en condiciones de simulación intestinal, el efecto que tiene el metabolismo de los ácidos biliares mediado por estas cepas sobre la solubilidad de formulaciones orales de anticoagulantes pertenecientes a la clase II del SCB (baja solubilidad y alta permeabilidad). Además, propone estudiar, en presencia de las bacterias probióticas y las drogas, la permeabilidad de monocapas intestinales, la modulación de los transportadores tipo ABC implicados y la respuesta celular (expresión y producción de citoquinas, expresión de citocromos, vías de señalización, distribución de moléculas de uniones estrechas). Finalmente, en base a los resultados obtenidos in vitro se seleccionará una combinación cepa-droga para evaluar in vivo la actividad anticoagulante y la respuesta del hospedador. Los resultados obtenidos en el plan propuesto contribuirán a la comprensión de la interacción de alimentos a base de probióticos con anticoagulantes orales, para ampliar la base del conocimiento que contribuya a establecer la posología de este tipo de medicamentos. &nbsp