Recherche de régulateurs contrôlant l'expression de gènes de réponse au stress chez Enterococcus faecalis JH2-2

Enterococcus faecalis, eubactérie à Gram-positif, est capable de supporter des changements de niches écologiques. Ces changements d'environnement provoquent des stress auxquels E. faecalis s'adapte remarquablement, en reprogrammant son expression génétique. Il est possible qu'un facteur de transcription sigma, homologue au sigma B de Bacillus subtilis, soit en partie responsable de cette reprogrammation. après une approche par "Nested P.C.R." qui n'a pas permis d'isoler un sigB chez E. faecalis, nous avons entrepris d'identifier les régulateurs contrôlant l'expression des gènes codant pour des protéines de re ponse au stress. Nous avons dans un premier temps étudié l'expression d'un gène codant pour une protéine identifiée en tant que GSP : Gsp65, et d'un opéron constitué de deux gèns : gspE et gspA codant pour des GSP potentielles. Il s'est avéré que ces trois protéines présentent une induction de leur expression suite à l'application de stress aussi bien de type environnemental que de type énergétique. [...]Nous avons ensuite tenté d'isoler des régulateurs potentiels de l'expression de ces différentes G1P. Une séquence répétée, inversée, localisée dans la région promotrice de gsp62 semble uniquement impliquée dans la réponse au stress de type environnemental. [...]Un régulateur général de réponse au stress a été démontré comme régulant l'expression des gènes gspE et gspA. Ce régulateur est en fait une enzyme, une purine nucléosides phosphorylase, impliquée dans l'anabolisme des nucléotides. Ce résultat met ainsi en évidence que le flux métabolique, tel que celui des nucléotides, semble être un censeur cellulaire du stress chez E. faecalisLORIENT-BU (561212106) / SudocSudocFranceF

EVOLUTION DES GENES VITELLOGENINE CHEZ LES SALMONIDES

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Analyses moléculaires de la production de la lacticine 481, un peptide antibactérien de type lantibiotique, synthétisé par Lactococcus lactis

La lacticine 481 est un lantibiotique qui résulte de la maturation d'un peptide précurseur synthétisé par voie ribosomique. Le gène de ce précurseur (lctA) est inclus dans un opéron dont les produits sont responsables de la production (lctAMT) de la lacticine 481 et de l'immunité (lctFEG) de la souche productrice vis-à-vis de ce peptide antibactérien. Le rôle du produit de lctT a été démontré en analysant par spectrométrie de masse MALDI-TOF des colonies bactériennes n'exprimant que lctAMFEG. Quatre variants de la lacticine 481 ont été produits en remplaçant lctA au sein de son opéron par des copies mutées. Les deux promoteurs P1 et P3 situés en amont de lctA sont prépondérants pour l'expression des gènes lctAMTFEG et une activité promotrice additionnelle assure celle des seuls gènes lctFEG. La production de lacticine 481 est contrôlée au niveau transcriptionnel et dépend principalement de l'acidification au cours de la croissance de L. lactis. La comparaison de P1 et P3 avec d'autres promoteurs de L. lactis régulés par le pH a révélé trois motifs conservés dans leur région -40. Ces motifs sont indispensables à l'activité de P1 qui ne possède pas de séquence -35 consensus.RENNES1-BU Sciences Philo (352382102) / SudocSudocFranceF

IS1675, a Novel Lactococcal Insertion Element, Forms a Transposon-Like Structure Including the Lacticin 481 Lantibiotic Operon

Two copies of IS1675, a novel lactococcal insertion element from the IS4 family, are present on a 70-kb plasmid, where they frame the lantibiotic lacticin 481 operon. The whole structure could be a composite transposon designated Tn5721. This study shows that the lacticin 481 operon does not include any regulatory gene and provides a new example of a transposon-associated bacteriocin determinant. We identified five other IS1675 copies not associated with the lacticin 481 operon. The conservation of IS1675 flanking sequences suggested a 24-bp target site

The biology of lantibiotics from the lacticin 481 group is coming of age.

International audienceLantibiotics are antimicrobial peptides from the bacteriocin family, secreted by Gram-positive bacteria. These peptides differ from other bacteriocins by the presence of (methyl)lanthionine residues, which result from enzymatic modification of precursor peptides encoded by structural genes. Several groups of lantibiotics have been distinguished, the largest of which is the lacticin 481 group. This group consists of at least 16 members, including lacticin 481, streptococcin A-FF22, mutacin II, nukacin ISK-1, and salivaricins. We present the first review devoted to this lantibiotic group, knowledge of which has increased significantly within the last few years. After updating the group composition and defining the common properties of these lantibiotics, we highlight the most recent developments. The latter concern: transcriptional regulation of the lantibiotic genes; understanding the biosynthetic machinery, in particular the ability to perform in vitro prepeptide maturation; characterization of a novel type of immunity protein; and broad application possibilities. This group differs in many aspects from the best known lantibiotic group (nisin group), but shares properties with less-studied groups such as the mersacidin, cytolysin and lactocin S groups

Molecular identification of Vibrio tapetis, the causative agent of the brown ring disease of Ruditapes philippinarum

International audienceVibrio tapetis is the marine bacterium responsible for the brown ring disease (BRD) affecting the manila clam, Ruditapes philippinarum. Identification of V. tapetis has been previously performed using biochemical criteria and serological procedures. All of these methods are time consuming and ill-adapted to individual screening. This study describes an oligonucleotidic probe (Vt446) and two PCR primers, deduced from the 16S rDNA sequence, allowing a fast and specific V. tapetis identification using dot blot hybridisation and species-specific primed PCR (SSP-PCR). The probe and primers have been tested on 60 strains, including referenced Vibrio sp., Gram negative and positive bacteria, marine bacteria samples and isolated clam bacteria. For all the 19 V. tapetis strains, the results of PCR assays consistently corroborated those of the agglutination tests. The detection limit was estimated to be 102 CFU ml− 1. The SSP-PCR method has resulted in V. tapetis detection in larvae, in diseased clams, and in asymptomatic broodstock clams that later developed BRD. In conclusion, the two SSP-PCR primers were useful for direct and fast identification of V. tapetis strains isolated in clams, and are well suited for the screening of individual R. philippinarum broodstock clams and larvae from the hatchery