Participação de adrenoceptores beta no núcleo pré-mamilar dorsal do hipotálamo avaliada no condicionamento olfatório de medo

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2010O condicionamento de medo é um modelo capaz de testar várias etapas das reações comportamentais de animais expostos a situações de perigo. As memórias para odores são geralmente associadas com experiências emocionais, e a associação entre cinco choques elétricos nas patas (estímulo incondicionado, EI) com o odor neutro (estímulo condicionado, EC) é capaz de estabelecer o condicionamento olfatório de medo (COM). O núcleo pré-mamilar dorsal do hipotálamo (PMd) dos roedores é uma estrutura chave para o processamento neural das reações de defensa decorrentes da exposição ao predador, e adrenoceptores beta no PMd estão relacionados com estas respostas de medo. O PMd também está envolvido com a expressão das respostas de medo para o odor pareado com choque nas patas. Assim, no presente trabalho o modelo do COM foi utilizado para verificar a participação de adrenoceptores beta no PMd durante a aquisição e a expressão das respostas de medo em ratos. O atenolol (ATE, antagonista adrenérgico beta1, 80 nmol) microinjetado no PMd 10 min antes da fase de aquisição do COM impediu a associação entre o odor neutro (acetato de amila) e o EI. O ATE (10 e 40 nmol) microinjetados 10 min antes da exposição ao odor (EC1) reduziu as respostas de medo provocadas pelo estímulo olfatório, e impediu o condicionamento de segunda ordem associado ao contexto (EC2). Estes resultados sugerem a participação de adrenoceptores beta na aquisição e expressão do COM, de modo similar à redução nas respostas de medo observada ao odor de gato. Foi então investigado se a estimulação farmacológica do PMd promoveria um estado emocional semelhante às mudanças provocadas pela exposição ao predador, e se esta estimulação poderia ser usada como EI, buscando o entendimento da modulação da aquisição do condicionamento de medo e sua expressão comportamental. Ratos foram condicionados pelo pareamento entre a microinjeção de isoproterenol (ISO, agonista beta) no PMd e o odor. O ISO (10 e 40 nmol) induziu a aquisição do COM e o condicionamento de segunda ordem pela ativação de receptores beta1 no PMd, uma vez que o ATE (40 nmol), mas não a butoxamina (antagonista adrenérgico beta2, 10 nmol), microinjetado antes do ISO impediu a associação ISO-EC. De maneira semelhante que no COM decorrente da associação entre odor e choques nas patas, o ATE (40 nmol) no PMd também impediu a expressão do comportamento defensivo ao EC1 no condicionamento promovido por ISO. A injeção sistêmica de nadolol, um antagonista beta adrenérgico periférico, não impediu o COM promovido por ISO no PMd. Considerando as densas projeções glutamatérgicas do PMd para a matéria cinzenta periaquedutal dorsal (MCPd), foi verificado se o bloqueio de receptores NMDA na MCPd poderia interferir com o condicionamento de medo. O antagonista de receptores NMDA (AP5, 6 nmol) na MCPd foi capaz de impedir a aquisição e a expressão do COM promovido por ISO no PMd. Assim, a ativação de adrenoceptores beta1 no PMd é um modelo adequado para mimetizar as mudanças emocionais a ponto de funcionar como EI e promover o COM. Além disso, a ativação do PMd é capaz de mobilizar os mesmo sistemas neurais envolvidos na aquisição e expressão do condicionamento contextual relacionado com o predador

Papel da substância cinzenta periaquedutal na modulação do comportamento maternal e lactação em ratas estressadas

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Neurociências.Diversos estudos têm mostrado que a administração sistêmica ou central de opióides inibe o comportamento maternal em ratas lactantes. O sítio de atuação destes opióides é incerto, mas a substância cinzenta periaquedutal (PAG) parece ser importante, uma vez que a administração sistêmica de morfina ativa a região lateral da PAG e inibe o comportamento maternal durante a lactação em ratas. O comportamento maternal também é sensível ao estresse ambiental, como por exemplo a exposição da fêmea a um ambiente estranho ou a apresentação de um macho intruso no ambiente. O objetivo deste projeto foi investigar se diferentes tipos de estresse inibem o comportamento maternal diferentemente e se a região lateral da PAG seria ativada durante situações de estresse. Um segundo objetivo foi verificar se as alterações do comportamento maternal pelo estresse são devidas à liberação de opióides na PAG lateral. Experimento 1: Ratas Wistar (250g) foram acasaladas e monitoradas até o momento do parto. Após o parto, as ratas foram divididas em quatro grupos: C, n=5 (ratas não estressadas), E1, n=5 (ratas foram colocadas com os filhotes na presença de um macho estranho no 9º dia de lactação), E2, n=5 (ratas foram estressadas pela retirada da caixa e junto com outra fêmea lactante colocadas em outra caixa na presença de um macho durante 2h diárias por 6 dias, do 3º ao 8º dia de lactação; o comportamento foi analisado no 9º dia de lactação, na própria caixa, sem a presença de intrusos) e E1+2, n=5 (ratas foram estressadas conforme o E2 exceto que no 9º dia de lactação foram estressadas conforme o E1). Em todos os grupo o comportamento maternal foi analisado durante 1h no 9º dia de lactação. Ratas submetidas a E1 demoraram mais para recolher os filhotes, demoraram mais para iniciar a amamentação e passaram mais tempo em atividades não maternais e menos tempo amamentando os filhotes. Os grupos E2 e E1+2 não apresentaram mudança de comportamento em relação ao controle. Experimento 2: Ratas foram acasaladas e submetidas às condições de estresse anteriores (n=5 de cada grupo), 90 min após o experimento, no 9º dia de lactação, foram perfundidas e o cérebro foi retirado e processado para a detecção imunohistoquímica de Fos na PAG. Ratas do grupo E1 apresentaram aumento de Fos em relação às ratas não estressadas em todos os níveis (Bregma -5,6 a -7,6 mm) na região lateral da PAG. Ratas submetidas a E2 e E1+2 apresentaram diminuição na expressão de Fos na coluna dorsomedial e dorsolateral comparadas ao controle. Experimento 3: Ratas Wistar (250g) foram acasaladas e submetidas a cirurgia estereotáxica para a implantação unilateral de cânulas-guia na PAGl. Após o parto foram submetidas às condições comportamentais conforme o exp. 1. No dia do teste, 9º dia de lactação, foram divididas para receberem microinjeção de salina (grupo controle) ou de antagonista opióide (naltrexona, naloxonazina ou nor-BNI) e o comportamento maternal foi monitorado por 1h. Em ratas submetidas a E1, os antagonistas reverteram os efeitos do estresse no progresso do recolhimento, no início e no tempo de amamentação. Com estes resultados podemos concluir que o estresse agudo (apresentação do macho estranho) interfere com o comportamento maternal. A condição de estresse crônico isoladamente não interfere na interação das mães com os filhotes, no entanto, previne os efeitos deletérios do estresse agudo no comportamento maternal. A PAG lateral participa ativamente da resposta ao estresse agudo, enquanto que o estresse crônico impede a expressão de Fos nesta região nos animais expostos a estresse agudo. Os antagonistas opióides na PAGl revertem os efeitos do estresse agudo no comportamento maternal. Um circuito inibitório opióide poderia ser responsável por uma desinibição da PAGl, levando a prejuízos no comportamento maternal das ratas. O estresse crônico, por outro lado, promove mudanças plásticas nesta circuitaria e impede o efeito inibitório do estresse agudo no comportamento das mães

O aprendizado de bioquímica por meio de metodologias ativas: um estudo transversal

Artigo apresentado na forma de "banner" na Primeira Mostra Científica e Tecnológica da UFSC CuritibanosA disciplina de Bioquímica é obrigatória nas primeiras fases dos cursos de Agronomia, Engenharia Florestal e Medicina Veterinária. Normalmente os estudantes enfrentam dificuldades com o conteúdo dessa disciplina, resultando em alto índice de reprovação e desinteresse na busca do conhecimento nessa área. O objetivo desse projeto foi promover a melhora da aprendizagem utilizando metodologias ativas. Assim, durante o primeiro e segundo semestre de 2019, foram realizadas atividades de ensino desenvolvidas por meio de trabalhos em equipes utilizando a Instrução entre Pares e Aprendizado Baseado em Problemas com os temas considerados mais difíceis em semestres anteriores. Como critério de acompanhamento da disciplina aplicou-se um formulário eletrônico de pesquisa. Responderam ao formulário 47 estudantes, onde a maioria (85,7%) afirmou ter tido contato com esse conteúdo pela primeira vez, mas consideram (71,4%) que o desempenho em química e biologia no Ensino Médio estaria entre 7-9. Com relação as dificuldades encontradas em Bioquímica, os assuntos considerados “difícil” foi o ciclo de Krebs (2 a cada 8) e cadeia respiratória (2 a cada 7). Foi perguntado sobre o aproveitamento em sala de aula em diferentes metodologias de ensino e a maioria respondeu que obteve melhor aproveitamento durante a realização de trabalho em grupo (33,3%) e nas discussões de questões por Instrução entre Pares (23,8%). Esse trabalho demonstrou que a utilização de metodologias ativas no ensino de Bioquímica, produziu maior participação e interesse pelo conteúdo ministrado

The Dorsolateral Periaqueductal Gray and Its Role in Mediating Fear Learning to Life Threatening Events

The dorsolateral column of the periaqueductal gray (dlPAG) integrates aversive emotional experiences and represents an important site responding to life threatening situations, such as hypoxia, cardiac pain and predator threats. Previous studies have shown that the dorsal PAG also supports fear learning; and we have currently explored how the dlPAG influences associative learning. We have first shown that N-methyl-D-aspartate (NMDA) 100 pmol injection in the dlPAG works as a valuable unconditioned stimulus (US) for the acquisition of olfactory fear conditioning (OFC) using amyl acetate odor as conditioned stimulus (CS). Next, we revisited the ascending projections of the dlPAG to the thalamus and hypothalamus to reveal potential paths that could mediate associative learning during OFC. Accordingly, the most important ascending target of the dlPAG is the hypothalamic defensive circuit, and we were able to show that pharmacological inactivation using beta-adrenoceptor blockade of the dorsal premammillary nucleus, the main exit way for the hypothalamic defensive circuit to thalamo-cortical circuits involved in fear learning, impaired the acquisition of the OFC promoted by NMDA stimulation of the dlPAG. Moreover, our tracing study revealed multiple parallel paths from the dlPAG to several thalamic targets linked to cortical-hippocampal-amygdalar circuits involved in fear learning. Overall, the results point to a major role of the dlPAG in the mediation of aversive associative learning via ascending projections to the medial hypothalamic defensive circuit, and perhaps, to other thalamic targets, as well. These results provide interesting perspectives to understand how life threatening events impact on fear learning, and should be useful to understand pathological fear memory encoding in anxiety disorders.Brazilian public funding agencies CAPES (Coordenadoria de Aperfeicoamento de Pessoal de Nivel Superior)Brazilian public funding agencies CAPES (Coordenadoria de Aperfeicoamento de Pessoal de Nivel Superior)FAPESP (Fundacao de Amparo a Pesquisa do Estado de Sao Paulo)Fundacao de Amparo a Pesquisa do Estado de Sao Paulo (FAPESP)CNPq (Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientifico e Tecnologico)Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientifico e Tecnologico (CNPq

Abortamento incompleto na gravidez ectopica cervical: um relato de caso / Incomplete abortion in cervical ectopic pregnancy: a case report

A gravidez ectópica cervical representa 0,1% das gestações e menos de 1% das implantações ectópicas. Caracteriza-se por sangramento vaginal volumoso no 1° trimestre e o diagnóstico se dá por ?-hCG positivo e ultrassonografia transvaginal (USTV) ou ressonância magnética (RM). O presente trabalho se propõe a apresentar o manejo conservador optado perante um caso de abortamento incompleto em uma gestação ectópica cervical, uma vez que não foi encontrado na literatura nenhum suporte objetivo para o manejo do caso da paciente em questão

Burnout Syndrome in Primary Health Care professionals during the COVID-19 pandemic

Workers in Primary Health Care (PHC) play a key role in coping with COVID-19, which required personal and work-flow changes, causing physical and emotional overload and stress, which could lead to Burnout Syndrome (BS). The objective of this study was to check the prevalence of BS in health professionals working in PHC in the municipality of Curitibanos, state of Santa Catarina, Brazil. The research was carried out between November 2020 and May 2021, a sociodemographic questionnaire, and the Brazilian version of the Maslach Burnout Inventory - Human Services Survey (MBI-HSS), which contains 22 questions and three dimensions - Emotional Exhaustion (EE), Depersonalization (DP) and Personal Fulfillment (PF), were applied. Data were collected and analyzed descriptively with subsequent statistical comparison. Participants were50 volunteers aged 40.1 ± 9.5 years, time in the profession of 10.8 ± 7.9 years. Results of the MBI-HSS showed the prevalence of risk was moderate for EE and high for DP and PF. However, no significant difference was detected between the MBI-HSS dimensions and sociodemographic variables. In conclusion, the prevalence of risk was 17.6+11.4 points in EE (moderate); 6.6+5.0 points in DP (moderate) and 36.8+6.6 points in RP (high), indicating that the evaluated population already demands some need for contingency or preventive care because it has a clear predisposition to BS. However, there was no statistical association with sociodemographic variables

Inactivation of the dorsolateral periaqueductal gray matter impairs the promoting influence of stress on fear memory during retrieval

Exposure to stressful conditions induces long-lasting neurobiological changes in selected brain areas, which could be associated with the emergence of negative emotional responses. Moreover, the interaction of a stressful experience and the retrieval of an established fear memory trace enhance both fear expression and fear retention. Related to this, the stimulation of the dorsolateral part of the mesencephalic periaqueductal gray matter (dlPAG) prior to retrieval potentiates a fear memory trace previously acquired. Therefore, the question that arises is whether the dlPAG mediates the increased fear expression and fear retention after retrieval. Rats were subjected to a contextual fear conditioning paradigm using a single footshock, and 1 day later, rats were subjected to a stressful situation. As previously reported, there was an increase of freezing response only in those rodents that were re-exposed to the associated context at 1 and 5 days after stress exposure. Muscimol intra-dlPAG prior to the restraint event prevented such increase. Conversely, Muscimol intra-dlPAG infusion immediately after the stress experience had no effect on the resulting fear memory. When the neuroendocrine response to stress was explored, intra-dlPAG infusion of muscimol prior to stress decreased Fos expression in the paraventricular nucleus and serum corticosterone levels. Moreover, this treatment prevented the enhancement of the density of hippocampal “mature” spines associated with fear memory. In conclusion, the present results suggest that the dlPAG is a key neural site for the negative valence instruction necessary to modulate the promoting influence of stress on fear memory.Fil: Giachero, Marcelo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Neurociencia Cognitiva y Traslacional. Fundación Ineco Rosario Sede del Incyt | Instituto de Neurología Cognitiva. Instituto de Neurociencia Cognitiva y Traslacional. Fundación Ineco Rosario Sede del Incyt | Fundación Favaloro. Instituto de Neurociencia Cognitiva y Traslacional. Fundación Ineco Rosario Sede del Incyt; Argentina. Universidade Federal de Santa Catarina; BrasilFil: Pavesi, Eloisa. Universidade Federal de Santa Catarina; BrasilFil: Calfa, Gaston Diego. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Farmacología Experimental de Córdoba. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Instituto de Farmacología Experimental de Córdoba; ArgentinaFil: Motta, Simone C.. Universidade de Sao Paulo; BrasilFil: Canteras, Newton S.. Departamento de Anatomia, ICB, Sao Paulo; BrasilFil: Molina, Víctor Alejandro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Farmacología Experimental de Córdoba. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Instituto de Farmacología Experimental de Córdoba; ArgentinaFil: Carobrez, Antonio P.. Universidade Federal de Santa Catarina; Brasi

Sensing danger through the olfactory system: The role of the hypothalamic dorsal premammillary nucleus

The dorsal premammillary nucleus (PMd) has a critical role on the expression of defensive responses to predator odor. Anatomical evidence suggests that the PMd should also modulate memory processing through a projecting branch to the anterior thalamus. By using a pharmacological blockade of the PMd with the NMDA-receptor antagonist 2-amino-5-phosphonopentanoic acid (AP5), we were able to confirm its role in the expression of unconditioned defensive responses, and further revealed that the nucleus is also involved in influencing associative mechanisms linking predatory threats to the related context. We have also tested whether olfactory fear conditioning, using coffee odor as CS, would be useful to model predator odor. Similar to cat odor, shock-paired coffee odor produced robust defensive behavior during exposure to the odor and to the associated context. Shock-paired coffee odor also up-regulated Fos expression in the PMd, and, as with cat odor, we showed that this nucleus is involved in the conditioned defensive responses to the shock-paired coffee odor and the contextual responses to the associated environment. (C) 2008 Elsevier Ltd. All rights reserved

Experiment 2 - Selectivity of the dlPAG NMDA injection in supporting OFC.

<p>The experimental design used is outlined above the graph, where a vertical arrow shows the moment of the dlPAG infusion associated with amyl acetate odor during the conditioning session (10 min) in the conditioning box. Histograms represent the mean (+SEM) of the percentage of approach time (A), hide time (B), and head-out time (C). The hatched horizontal line represents the mean and the confidence limits (within 95%) for the familiarization session in the odor box. Subjects were grouped according to the different schedules of the dlPAG injection and training conditions during the acquisition phase: PBS/no odor (n = 8) - PBS infusion without amyl acetate odor pairing during conditioning; PBS/odor (n = 8) - PBS infusion with amyl acetate odor pairing during conditioning; NMDA/no odor (n = 8) - NMDA 100 pmol infusion without amyl acetate odor pairing during conditioning; NMDA/odor (n = 10) NMDA 100 pmol infusion with amyl acetate odor pairing during conditioning; and NMDA out/odor (n = 8) - NMDA 100 pmol infusion outside the dlPAG (in the midbrain reticular nucleus) with amyl acetate odor pairing during conditioning. CS1 represents the first-order CS exposure and CS2 represents the second-order context (no odor) exposure. *<i>p<0.05</i> and ***<i>p<0.0005</i> compared with the PBS/no odor group (repeated measures ANOVA followed by Newman-Keuls test).</p