Teste ELISA para diagnóstico da cisticercose suína usando antígenos de larvas de Taenia solium e Taenia crassiceps

Foi padronizado o teste ELISA para o diagnóstico da cisticercose suína. Após confirmação por exame post-mortem, os soros dos respectivos animais foram empregados como controles positivos e negativos. Soros de suínos portadores de infecções heterólogas foram ensaiados para determinação de reações cruzadas. Os quatro antígenos testados na fase de padronização foram líquido vesicular (VF) e extrato total (T) de larvas de Taenia crassiceps (Tcra) e de extrato de escólex (S) e de cisticercos (T) de Taenia solium (Tso). A titulação em bloco das ótimas concentrações de antígenos e diluições de soros e de conjugado, bem como o emprego de Tween-20 e de leite desnatado nas soluções bloqueadora e de lavagem exerceram nítida influência no desempenho do teste ELISA. Todos os antígenos revelaram bom desempenho na diferenciação entre soros positivos e negativos para cisticercose. O antígeno VF-Tcra apresentou as mais altas taxas de desempenho, seguido do T-Tcra. As taxas de desempenho para o antígeno VF-Tcra foram, respectivamente, para pontos de corte com 2sd e 3sd, de 96,0% e 80,0% para sensibilidade e de 97,5% e 100,0% para especificidade. Foi detectada reação cruzada com soros de hidatidose e de ascaridiose. Considerando o bom desempenho observado, o teste padronizado pode ser recomendado em matadouros no diagnóstico de animais suspeitos e no levantamento da ocorrência da doença nos segmentos de criação, sobretudo nos clandestinos, dando suporte às medidas de controle da cisticercose, integradas em toda a cadeia de produção da carne suína, exercendo efetiva contribuição à Saúde Pública.In the present study ELISA was standardized for the diagnosis of swine cysticercosis based on necropsy parameters and confirmed positive and negative control sera. Serum samples from pigs with other infections were also assayed to determine possible cross-reactions. Four antigens were assayed: from Taenia crassiceps vesicular fluid (VF-Tcra) and crude larvae extract (T-Tcra), and from Taenia solium extracts of scolex (S-Ts) and of larvae (T-Ts). A checkerboard evaluation of antigen, serum and conjugate dilutions, as well as the use of Tween-20 and skim cow milk in wash and blocking solution had a marked effect on improving ELISA performance. All the antigens showed a good performance, but VF-Tcra was the best, with 96.0% and 80.0% sensitivities for cut-offs respectively at 2sd and 3sd, and corresponding specificities of 97.5% and 100.0%. Cross-reactivity was observed only with hydatidosis and ascaridiosis. In view of the high performance observed, the ELISA test should be recommended for the diagnosis of cysticercosis in suspected swine in slaughterhouses and for the screening of cysticercosis in swine production. These results will support integrated measures of cysticercosis control throughout the chain of swine production, effectively contributing to public health

Comparison of destructive and nondestructive sampling techniques of retail chicken carcasses for enumeration of hygiene indicator microorganisms

The type of sampling technique used to obtain food samples is fundamental to the success of microbiological analysis. Destructive and nondestructive techniques, such as tissue excision and rinsing, respectively, are widely employed in obtaining samples from chicken carcasses. In this study, four sampling techniques used for chicken carcasses were compared to evaluate their performances in the enumeration of hygiene indicator microorganisms. Sixty fresh chicken carcasses were sampled by rinsing, tissue excision, superficial swabbing, and skin excision. All samples were submitted for enumeration of mesophilic aerobes, Enterobacteriaceae, coliforms, and Escherichia coli. The results were compared to determine the statistical significance of differences and correlation (P < 0.05). Tissue excision provided the highest microbial counts compared with the other procedures, with significant differences obtained only for coliforms and E. coli (P < 0.05). Significant correlations (P < 0.05) were observed for all the sampling techniques evaluated for most of the hygiene indicators. Despite presenting a higher recovery ability, tissue excision did not present significant differences for microorganism enumeration compared with other nondestructive techniques, such as rinsing, indicating its adequacy for microbiological analysis of chicken carcasses

Destructive and nondestructive procedures to obtain chicken carcass samples for Escherichia coli and Salmonella spp. detection

Destructive and nondestructive sampling procedures were compared for Escherichia coli and Salmonella spp. detection in 60 fresh chicken carcasses, which were submitted to the following sampling procedures: rinsing, skin swabbing, tissue excision, and skin excision; the proximity or not to the cloacae region was also considered. The obtained results were compared to identify significant differences (p0.05), thus indicating equivalencies between these techniques. Skin swabbing produced a statistically significant lower frequency of positive results (p0.05), possibly due to the low overall frequency of positive carcasses. No significant differences in the number of positive samples (E. coli or Salmonella spp.) were observed between samples collected near or far from the cloacae region (p>0.05), regardless of the sampling technique. The obtained results demonstrate that the tested sampling techniques were equivalent for Salmonella spp. detection in chicken carcasses, as observed for E. coli with the exception of skin swabbing

Not available

Foram estudados os testes ELISA e imunoblot com os propósitos de padronização para o emprego no diagnóstico da cisticercoses suína, e posterior aplicação do teste padronizado em inquérito de soros procedentes de suínos inspecionados. Após confirmação por exame post-mortem, foram empregados na padronização de ambos os testes, soros controles positivos e negativos à cisticercose e soros oriundos de suínos portadores de hidatidose, ascaridiose, macracantorrincose e de pneumonia causada por Hemophilus sp ou Mycoplasma sp, detectando-se reação cruzada somente à hidatidose e à ascaridiose. Os quatro antígenos preparados e testados na fase de padronização constituíram-se de extratos vesicular (LV) e total (LT) de larvas de Taenia crassiceps e de escólex (E) e total (CT) de Taenia solium. Foram testadas, também as quatro frações de LT obtidas em Sephadex G-50. Todos os antígenos revelaram bom desempenho na diferenciação entre soros positivos e negativos à cisticercose pelo teste ELISA. As taxas de sensibilidade para o antígeno LV no teste ELISA variaram, respectivamente, entre as fases de padronização e de inquérito de 96,0 por cento a 100,0 por cento, para o ponto de corte com 2sd e de 80,0 por cento a 76,9 por cento para 3sd e as de especificidade variaram 97,5 por cento a 79,3 por cento para 2sd e de 100,0 por cento a 97,0 por cento para 3sd. A opção de 3sd mostrou-se mais apropriada em caso de única alternativa do teste ELISA para fins de diagnóstico. Foram considerados peptídeos específicos para o diagnóstico da cisticercose suína no imunoblot os de PM: 68-72, 36-39, 23-25, 22, 21, 19-20, 17-18, 15-16 e 14kD. As diluições ótimas de sono e conjugado para o imunoblot foram 1/100 e 1/1000, respectivamente. O imunoblot revelou sensibilidade de 100,0 por cento e especificidade de 96,7 por cento. Os testes ELISA e imunoblot se complementam como excelentes recursos para diagnósticos da cisticercose suína, dada a alta sensibilidade e aplicabilidade do primeiro para situações de triagem e a alta especificidade do segundo para confirmação de resultados positivos do ELISA. A freqüência da cisticercose foi de 0,3 por cento para os suínos inspecionados e de 8,2 por cento para os não inspecionados, fornecendo uma probabilidade de ocorrência de 1,0 vez para os primeiros contra 28,5 vezes para os clandestinos, destacando a grave situação da doença nas criações com padrão higiênico-sanitário deficiente e nos canais clandestinos de comercialização dos produtos suínos. Considerando o desmpenho e os resultados obtidos nos testes imunológicos para cisticercose suína, ELISA e imunoblot, recomenda-se o seu emprego no diagnóstico de animais suspeitos em matadouros e no levantamento de ocorrência da doença nos segmentos de produção.Not availabl

A influência de diferentes grupos de soros-controle no diagnóstico da Cisticercose bovina pelo teste Elisa

Ensaios do teste Elisa foram desenvolvidos para a análise de amostras de soros de bovinos. As amostras foram constituídas de 80 soros-controle de bovinos com cisticercose, entre natural discreta e experimental maciça, sendo 60 negativos para a doença e dez positivos para outras patologias. Utilizaram-se os antígenos totais de Taenia solium e de T. crassiceps na determinação de anticorpos contra cisticercose. O referido teste revelou deficiências no diag- nóstico de animais destinados ao abate, em virtude de sua baixa sensibilidade, quando se consideraram soros de bovinos com infecção natural discreta, a mais freqüente em matadouros. No entanto, no caso de animais infectados experimentalmente, a sensibilidade aumentou. O teste ainda pode ser considerado útil na diferenciação entre a cisticercose e outras doenças, devido às suas elevadas taxas de especificidade, 81,4% a 100%, sempre alcançando o valor máximo quando os soros-controle negativos eram procedentes de animais confinados. A escolha de soros- controle para o cálculo do ponto de corte interferiu no desempenho do teste Elisa. Quando o ponto de corte envol- vendo os soros de animais confinados foi a referência para o diagnóstico da cisticercose, os valores de sensibilidade foram bastante elevados, chegando a 90%. Porém, quando o ponto de corte considerado na avaliação foi calculado a partir de todos os soros-controle negativos (situação não controlada), observou-se uma queda na capacidade do teste em identificar os verdadeiros positivos. Conclui-se que é de grande importância a seleção de soros-controle na interpretação dos resultados do teste Elisa e no estabelecimento do seu ponto de corte, visando assegurar a sua eficácia no diagnóstico da cisticercose bovina.An Elisa assay was carried out to analize bovine serum samples. The samples were constituted by 80 sera from bovine with cysticercosis, either naturally and experimentally infected, 60 samples which were negative for cysticercosis, and 10 which were positive for other pathologies. Taenia solium and Taenia crassiceps total antigens were used in the anti-cysticercosis antibody determinations. The test displayed low sensitivity and was deficient for the diagnosis of animals destined to the slaughterhouse, which often presents subclinical infections. However,for experimentally infected animals, sensitivity was considerably improved. The test can still be considered useful for the differentiation between cysticercosis and other diseases, due to its high specificity rate, from 81.4 to 100%, specially