Histamine inhibits adrenocortical cell proliferation but does not affect steroidogenesis.

Histamine (HA) is a neurotransmitter synthesized in most mammalian tissues exclusively by histidine decarboxylase enzyme. Among the plethora of actions mediated by HA, the modulatory effects on steroidogenesis and proliferation in Leydig cells (LCs) have been described recently. To determine whether the effects on LCs reported could be extrapolated to all steroidogenic systems, in this study, we assessed the effect of this amine on adrenal proliferation and steroidogenesis, using two adrenocortical cell lines as experimental models, murine Y1 cells and human NCI-H295R cells. Even when steroidogenesis was not modified by HA in adrenocortical cells, the biogenic amine inhibited the proliferation of H295R cells. This action was mediated by the activation of HRH1 subtype and an increase in the production of inositol phosphates as second messengers, causing cell-cycle arrest in the G2/M phase. These results indicate a new role for HA in the proliferation of human adrenocortical cells that could contribute to a better understanding of tumor pathology as well as to the development of new therapeutic agents.Fil: Pagotto, Romina María del Luján. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental (i); ArgentinaFil: Pereyra, Elba Nora. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental (i); ArgentinaFil: Monzón, Casandra Margarita. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental (i); ArgentinaFil: Mondillo, Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental (i); ArgentinaFil: Pignataro, Omar Pedro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental (i); Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentin

Effects of heme oxygenase isozymes on Leydig cells steroidogenesis

In the present study, we demonstrate the expression of heme oxygenase (HO) isozymes, HO-1 and HO-2 (listed as HMOX1 and HMOX2 in the MGI Database), in MA-10 Leydig tumor cells and its effect on steroidogenesis. The well-known HO inducer, hemin, increased both HO-1 and HO-2 protein levels and HO-specific activity. Induction of HO by hemin inhibited basal, hCG-, and dibutyryl cAMP (db-cAMP)-induced steroidogenesis in a reversible way. When we studied the effect of HO isozymes along the steroid synthesis, we found that steroidogenic acute regulatory protein levels were decreased, and the conversion of cholesterol to pregnenolone was inhibited by hemin treatment, with no changes in the content of cholesterol side-chain cleavage enzyme (P450scc). hCG and db-cAMP also stimulated the expression of HO-1 and HO-2, and HO enzymatic activity in MA-10 cells. Basal and hCG-stimulated testosterone synthesis was also inhibited by hemin in rat normal Leydig cells. Taken together, these results suggest that: i) at least one of HO products (presumably carbon monoxide) inhibits cholesterol transport to the inner mitochondrial membrane and Leydig cell steroidogenesis by binding to the heme group of the cytochrome P450 enzymes, in a similar way as we described for nitric oxide, and ii) hCG stimulation results in the induction of an antioxidant enzymatic system (HO) acting as a cytoprotective mechanism in Leydig cells, as already demonstrated in the adrenal gland.Fil: Piotrkowski, Barbara. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica; ArgentinaFil: Monzón, Casandra Margarita. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Pagotto, Romina María del Luján. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Reche, Cecilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Besio Moreno, Marcos Alberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Cymeryng, Cora Betriz. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Pignataro, Omar Pedro. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Bioquímica Humana; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentin

Involvement of nitric oxide synthase in the mechanism of histamine-induced inhibition of Leydig cell steroidogenesis via histamine receptor subtypes in Sprague-Dawley rats

The present study was conducted to shed light on the so far unexplored intracellular mechanisms underlying negative modulation of Leydig cell steroidogenesis by histamine (HA). Using the MA-10 cell line and highly purified rat Leydig cells as experimental models, we examined the effect of the amine on biochemical steps known to be modulated by HA, or involved in LH/hCG action. In agreement with previous findings, HA at 10 microM showed a potent inhibitory effect on hCG-stimulated steroid synthesis, regardless of the gonadotropin concentration used. Moreover, HA not only decreased LH/hCG-induced cAMP production but also steroid synthesis stimulated by the permeable cAMP analog dibutyryl cAMP (db-cAMP). Considering the post-cAMP sites of HA action, it is shown herein that HA markedly inhibited db-cAMP-stimulated acute regulatory (STAR) protein expression, as well as steps catalyzed by P450-dependent enzymes, mainly the conversion of cholesterol to pregnenolone by cholesterol side-chain cleavage enzyme (CYP11A). The antisteroidogenic action of HA was blocked by addition of the PLC-inhibitor U73122, and HA significantly augmented IP3 production, suggesting a major role for the PLC/IP3 pathway in HA-induced inhibition of Leydig cell function. Finally, HA increased nitric oxide synthase (NOS) activity, and the NOS inhibitor L-N(G)-nitro-arginine methyl ester (L-NAME) markedly attenuated the effect of the amine on steroid synthesis. On the basis of our findings, HA antagonizes the gonadotropin action in Leydig cells at steps both pre- and post-cAMP formation. NOS activation is the main intracellular mechanism by which HA exerts its antisteroidogenic effects.Fil: Mondillo, Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Pagotto, Romina María del Luján. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Química Biologica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Bioquímica Humana; ArgentinaFil: Piotrkowski, Barbara. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Reche, Cecilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Patrignani, Zoraida Judith. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Bioquímica Humana; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; ArgentinaFil: Cymeryng, Cora Beatriz. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica; ArgentinaFil: Pignataro, Omar Pedro. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Química Biológica; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Bioquímica Humana; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentin

Influence of histamine in the development and the functional manteinance of testicular and adrenocortical steroidogenic tissues

La histamina (HA) es una amina biógena asociada a diversas funciones llevadas a cabo a través de cuatro subtipos de receptores pertenecientes a la familia de los GPCR. En este trabajo de Tesis se evaluó el efecto de HA sobre la esteroidogénesis y proliferación de tumores córticoadrenales utilizando dos líneas celulares, las Y1 murinas y las H295R humanas y se profundizaron estudios previos del laboratorio en células de Leydig (CL), analizando la participación de esta amina en su desarrollo. En las células córticoadrenales la esteroidogénisis no se vió modificada por HA, lo que supone que el efecto modulador reportado previamente en CL no sería extrapolable a todos los sistemas esteroidogénicos. En cambio, HA inhibió la proliferación de las células H295R a 24h, provocando un arresto de las células en la fase G2/M en un mecanismo mediado por el subtipo de receptor H1 e IP3 y DAG como segundos mensajeros. Estos resultados permitieron identificar un nuevo rol de HA sobre la proliferación de células córticoadrenales humanas que podría contribuir a una mejor comprensión de la patología tumoral y al desarrollo de nuevos agentes terapéuticos. En lo que respecta a las CL, HA fue capaz de inhibir la proliferación de CL inmaduras (CLI) en ensayos in vitro a través de la activación del subtipo de receptor H4, mientras que en estudios in vivo el tratamiento con esta amina produjo un incremento en el número de CL con morfología adulta. Estos datos sugieren que esta amina modularía la proliferación en un paso previo a la diferenciación y pone en evidencia la necesidad de continuar los estudios sobre su función en la transición de los distintos estadíos de desarrollo de CL así como en la génesis de patologías tumorales.Histamine (HA) is a biogenic amine associated with heterogeneous functions carried out through the activation of four receptor subtypes, all of them members of the GPCR family. In this doctoral thesis the effects of HA on steroidogenesis and proliferation of adrenocortical tumors were evaluated using two experimental models, the murine Y1 and the human H295R cell lines. Also previous studies in Leydig cells (LC) were continued, evaluating the participation of the cited amine in their development. Steroidogenesis was not modified by HA in adrenocortical cells, which suggests that the modulatory effect previously reported in LC can not be extrapolated to all steroidogenic systems. Nevertheless, HA inhibited the proliferation of H295R cells after a 24 h-treatment through activation of the H1 receptor subtype and an increase in the production of IP3 and DAG second messengers, causing a cell cycle arrest in the G2/M phase. These results indicate a new role of HA on human adrenocortical cells proliferation that could contribute to a better understanding of tumor pathology, and to the development of new therapeutic agents. With respect to LC, HA was able to inhibit the proliferation of immature and progenitor LC in in vitro assays via the activation of the H4 receptor subtype, whereas in in vivo studies HA caused an increase in LC number. These data suggest that the amine would modulate the proliferation of LC before differentiation takes place and highlights the need for further studies on its role on the transition of different LC development stages as well as on its influence on tumor pathogenesis.Fil:Pagotto, Romina María del Luján. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina

Effect of bitter compounds on amylase secretion in murine submandibular glands: Signaling pathway mechanisms

Background: Amylase is synthesized in submandibular glands (SMG) and released into the oral cavity to degrade carbohydrates in the mouth. Bitter taste receptors (T2R) belong to the G-protein coupled receptor (GPCR) family and are expressed in the taste cells and also in the digestive tract. Methods: The activity of amylase secreted by murine SMG was measured, detecting maltose by Bernfeld's method. Amylase and T2R6 were detected by imunohistochemistry and Western blot. The expression of Ggustducin, Gi, and phospholipase Cβ2 was also studied by Western blot. cAMP levels were measured by radioimmunoassay and inositol monophosphate production was quantified by ELISA. Results: Theophylline, denatonium and cycloheximide exerted a dose-dependent inhibition on amylase secretion. This effect was reverted by preincubating SMG with an anti-Gαi antibody. cAMP production was increased by the same compounds, an effect that was also abrogated by an anti-Gαi antibody. Bitter compounds reduced inositol monophosphate formation in SMG and H-89, a protein kinase A inhibitor, reverted this action, revealing that this protein kinase down regulates phospholipase C activity. General significance: We demonstrated that theophylline, denatonium and cycloheximide inhibit salivary amylase secretion, activating an intracellular signaling pathway that involves cAMP and phospholipase C, that cross talks via protein kinase A. © 2011 Elsevier B.V.Fil: Dasso, Maximiliano Carlos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos; ArgentinaFil: Pagotto, Romina María del Luján. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Pignataro, Omar Pedro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; ArgentinaFil: Diez, Roberto Alejandro. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Cátedra de Farmacología; ArgentinaFil: Sales, María Elena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos; Argentin

Proliferative effect of histamine on MA-10 Leydig tumor cells mediated through HRH2 activation, transient elevation in cAMP production, and increased extracellular signal-regulated kinase phosphorylation levels

Mast cells (MC) occur normally in the testis with a species specific distribution, yet their precise role remains unclear. Testicular MC express histidine decarboxylase (HDC), the unique enzyme responsible for histamine (HA) generation. Evidence to supports a role for HA as a local regulator of steroidogenesis via functional H1 and H2 receptor subtypes (HRH1 and HRH2, respectively) present in Leydig cells. Given that HA is a well-known modulator of physiological and pathological proliferation in many different cell types, we aimed in the present study to evaluate whether HA might contribute to the regulation of Leydig cell number as well as to the control of androgen production. Herein, we demonstrate, to our knowledge for the first time, that MA-10 Leydig tumor cells, but not normal immature Leydig cells (ILC), exhibit a proliferative response upon stimulation with HA that involves HRH2 activation, transient elevation of cAMP levels, and increased extracellular signal-regulated kinase (ERK) phosphorylation. Our results also reveal that MA-10 cells show significantly heightened HDC expression compared to normal ILC or whole-testicular lysate and that inhibition of HDC activity decreases MA-10 cell proliferation, suggesting a possible correlation between autocrine overproduction of HA and abnormally increased proliferation in Leydig cells. The facts that germ cells are also both source and target of HA and that multiple testicular cells are susceptible to HA action underline the importance of the present study, which we hope will serve as a first step for further research into regulation of non-MC-related HDC expression within the testis and its significance for testicular functionFil: Pagotto, Romina María del Luján. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Monzón, Casandra Margarita. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Besio Moreno, Marcos Alberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Pignataro, Omar Pedro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; ArgentinaFil: Mondillo, Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentin

Regulação da função esteroidogênica em testículo e glândula adrenal

Si bien las hormonas hipofisarias LH y ACTH son los reguladores primarios de la esteroidogénesis tanto en células de Leydig (CL) como en la zona fasciculada (ZF) adrenal, respectivamente, evidencias crecientes indican que diversos factores, locales y externos, modulan sutilmente (regulación fina) la fisiología de las glándulas esteroidogénicas. El paso regulatorio de la esteroidogénesis es el transporte del colesterol a la membrana interna de la mitocondria para ser transformado a pregnenolona y la proteína StAR es muy importante en este proceso. La presencia de otras poblaciones en testículo (células de Sertoli, peritubulares, macrófagos y mastocitos) y en corteza adrenal (células endoteliales, macrófagos, mastocitos y células de la médula adrenal) llevó a enfocar el estudio hacia compuestos que son secretados por esos tipos celulares o incluso por las propias CL o ZF y que regulan las acciones respectivas de la LH y de la ACTH en forma autócrina y/o parácrina. Nuestro grupo de trabajo ha demostrado que factores tales como óxido nítrico (NO), monóxido de carbono (CO) e Histamina (HA) modulan los efectos de las hormonas adenohipofisarias mencionadas. En ambos órganos, los diversos factores pueden actuar a través de distintos (o similares) sistemas transductores, ya sea para activar o inhibir la síntesis de esteroides. Además de la conocida participación del AMPc, otros segundos mensajeros están involucrados en la respuesta biológica finalAlthough steroidogenesis in both Leydig (CL) and zona fasciculata (ZF) adrenal cells are under the primary control of pituitary hormones LH and ACTH, respectively, increasing evidence suggests that local or external factors modulate (fine tunning) the physiology of steroidogenic glands. The limiting step in the synthesis of all steroid hormones is the transport of the substrate-cholesterol-from the outer to the inner mitochondrial membrane, where it is converted into pregnenolone. The participation of StAR protein in the mechanism is very important in this process. The presence of other cell types in testis (Sertoli and peritubular cells, macrophages and mast cells) and in the adrenal cortex (endothelial cells, macrophages, mast cells and the near medullary cells) led to focus this study in factors secreted by these cell types or even the same Leydig or ZF cells that are able to modulate LH and ACTH actions in an autocrine or paracrine way. These studies have shown that the NO/NOS, HO/CO and histamine systems modulate the effect of the above mentioned pituitary hormones. These factors can act through similar or different signal transduction pathways to activate or inhibit steroid synthesis. In addition to the very well documented participation of cAMP in the mechanism of action of both hormones, other second messengers are also involved in the generation of the final biological effect.Embora os hormônios hipofisários LH e ACTH sejam os reguladores primários da esteroidogênese tanto em células de Leydig (CL) quanto na zona fasciculada (ZF) adrenal, respectivamente, evidências crescentes indicam que diversos fatores, locais e externos modulam sutilmente (regulação fina) a fisiologia das glândulas esteroidogênicas. O passo regulatório da esteroidogênese é o transporte do colesterol para a membrana interna da mitocôndria para ser transformado em pregnenolona e a proteína StAR é muito importante neste processo. A presença de outras populações em testículo (células de Sertoli, peritubulares, macrófagos e mastócitos) e em córtex adrenal (células endoteliais, macrófagos, mastócitos e células da medula adrenal) levou a focar o estudo em compostos que são secretados por esses tipos celulares ou inclusive pelas próprias CL ou ZF e que regulam as ações respectivas da LH e da ACTH em forma autócrina e/ou parácrina. Nosso grupo de trabalho tem demonstrado que fatores tais como óxido nítrico (NO), monóxido de carbono (CO) e Histamina (HA) modulam os efeitos dos hormônios adenohipofisários mencionados. Em ambos os órgãos, os diversos fatores podem atuar através de diferentes (ou similares) sistemas transdutores, seja para ativar ou inibir a síntese de esteroides. Além da conhecida participação do AMPc, outros segundos mensageiros estão envolvidos na resposta biológica finalFil: Pignataro, Omar Pedro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Pagotto, Romina María del Luján. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Monzón, Casandra Margarita. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Besio Moreno, Marcos Alberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Mondillo, Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentin

Regulação da função esteroidogênica em testículo e glândula adrenal

Si bien las hormonas hipofisarias LH y ACTH son los reguladores primarios de la esteroidogénesis tanto en células de Leydig (CL) como en la zona fasciculada (ZF) adrenal, respectivamente, evidencias crecientes indican que diversos factores, locales y externos, modulan sutilmente (regulación fina) la fisiología de las glándulas esteroidogénicas. El paso regulatorio de la esteroidogénesis es el transporte del colesterol a la membrana interna de la mitocondria para ser transformado a pregnenolona y la proteína StAR es muy importante en este proceso. La presencia de otras poblaciones en testículo (células de Sertoli, peritubulares, macrófagos y mastocitos) y en corteza adrenal (células endoteliales, macrófagos, mastocitos y células de la médula adrenal) llevó a enfocar el estudio hacia compuestos que son secretados por esos tipos celulares o incluso por las propias CL o ZF y que regulan las acciones respectivas de la LH y de la ACTH en forma autócrina y/o parácrina. Nuestro grupo de trabajo ha demostrado que factores tales como óxido nítrico (NO), monóxido de carbono (CO) e Histamina (HA) modulan los efectos de las hormonas adenohipofisarias mencionadas. En ambos órganos, los diversos factores pueden actuar a través de distintos (o similares) sistemas transductores, ya sea para activar o inhibir la síntesis de esteroides. Además de la conocida participación del AMPc, otros segundos mensajeros están involucrados en la respuesta biológica finalAlthough steroidogenesis in both Leydig (CL) and zona fasciculata (ZF) adrenal cells are under the primary control of pituitary hormones LH and ACTH, respectively, increasing evidence suggests that local or external factors modulate (fine tunning) the physiology of steroidogenic glands. The limiting step in the synthesis of all steroid hormones is the transport of the substrate-cholesterol-from the outer to the inner mitochondrial membrane, where it is converted into pregnenolone. The participation of StAR protein in the mechanism is very important in this process. The presence of other cell types in testis (Sertoli and peritubular cells, macrophages and mast cells) and in the adrenal cortex (endothelial cells, macrophages, mast cells and the near medullary cells) led to focus this study in factors secreted by these cell types or even the same Leydig or ZF cells that are able to modulate LH and ACTH actions in an autocrine or paracrine way. These studies have shown that the NO/NOS, HO/CO and histamine systems modulate the effect of the above mentioned pituitary hormones. These factors can act through similar or different signal transduction pathways to activate or inhibit steroid synthesis. In addition to the very well documented participation of cAMP in the mechanism of action of both hormones, other second messengers are also involved in the generation of the final biological effect.Embora os hormônios hipofisários LH e ACTH sejam os reguladores primários da esteroidogênese tanto em células de Leydig (CL) quanto na zona fasciculada (ZF) adrenal, respectivamente, evidências crescentes indicam que diversos fatores, locais e externos modulam sutilmente (regulação fina) a fisiologia das glândulas esteroidogênicas. O passo regulatório da esteroidogênese é o transporte do colesterol para a membrana interna da mitocôndria para ser transformado em pregnenolona e a proteína StAR é muito importante neste processo. A presença de outras populações em testículo (células de Sertoli, peritubulares, macrófagos e mastócitos) e em córtex adrenal (células endoteliais, macrófagos, mastócitos e células da medula adrenal) levou a focar o estudo em compostos que são secretados por esses tipos celulares ou inclusive pelas próprias CL ou ZF e que regulam as ações respectivas da LH e da ACTH em forma autócrina e/ou parácrina. Nosso grupo de trabalho tem demonstrado que fatores tais como óxido nítrico (NO), monóxido de carbono (CO) e Histamina (HA) modulam os efeitos dos hormônios adenohipofisários mencionados. Em ambos os órgãos, os diversos fatores podem atuar através de diferentes (ou similares) sistemas transdutores, seja para ativar ou inibir a síntese de esteroides. Além da conhecida participação do AMPc, outros segundos mensageiros estão envolvidos na resposta biológica finalFil: Pignataro, Omar Pedro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Pagotto, Romina María del Luján. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Monzón, Casandra Margarita. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Besio Moreno, Marcos Alberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Mondillo, Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentin

Protective effect of an antithyroid compound against γ-radiationinduced damage in human colon cancer cells

We have previously reported the radioprotective effect of propylthiouracil (PTU) on thyroid cells. The aim of the present study was to analyze whether tumor cells and normal cells demonstrate the same response to PTU. Human colon carcinoma cells were irradiated with γ-irradiation with or without PTU. We evaluated the clonogenic survival, intracellular reactive oxygen species levels, catalase, superoxide dismutase and glutathione peroxidase activities, and apoptosis by nuclear cell morphology and caspase-3 activity assays. Cyclic AMP (cAMP) levels were measured by radioimmunoassay. PTU treatment increased surviving cell fraction at 2 Gy (SF2) from 56.9 ± 3.6 in controls to 75.0 ± 3.5 (p<0.05) and diminished radiation- induced apoptosis. In addition, we observed that the level of antioxidant enzymes’ activity was increased in cells treated with PTU. Moreover, pretreatment with PTU increased intracellular levels of cAMP. Forskolin (p<0.01) and dibutyryl cAMP (p<0.05) mimicked the effect of PTU on SF2. Co-treatment with H89, an inhibitor of protein kinase A, abolished the radioprotective effect of PTU. PTU reduces the toxicity of ionizing radiation by increasing cAMP levels and also possibly through a reduction in apoptosis levels and in radiation-induced oxidative stress damage. We therefore conclude that PTU protects both normal and cancer cells during exposure to radiation in conditions mimicking the radiotherapy.Fil: Perona, Marina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Comisión Nacional de Energía Atómica; ArgentinaFil: Dagrosa, María Alejandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Comisión Nacional de Energía Atómica; ArgentinaFil: Pagotto, Romina María del Luján. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Casal, Mariana. Comisión Nacional de Energía Atómica; ArgentinaFil: Pignataro, Omar Pedro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Pisarev, Mario Alberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Comisión Nacional de Energía Atómica; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Bioquímica Humana; ArgentinaFil: Juvenal, Guillermo Juan. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Comisión Nacional de Energía Atómica; Argentin