Técnica de pré-seleção em diplóides de bananeira submetidas a duplicação cromossômica.

A determinação do nível de ploidia em plantas pode ser realizada por vários métodos diretos e indiretos. Os métodos diretos são: contagem do número cromossômico e determinação do conteúdo de DNA. Já os métodos indiretos englobam a avaliação de características citoanatômicas e morfológica. Todas as técnicas apresentam vantagens e limitações. A observação de características da planta, como a espessura da folha para a determinação da ploidia também é pode ser utilizado. Apesar de ser um método simples pode ocasionar uma classificação equivocada de determinados genótipos, uma vez que essas características podem ser influenciadas pelo ambiente. Porém quando se trata de um número muito grande de plantas, poderá ser utilizado como uma pré-seleção de prováveis poliplóides (Sari et al., 1999; Souza e Queiroz, 2004).pdf 71

Multiplicação in vitro de amoreira-preta cultivar Brazos.

A micropropagação da amoreira-preta pode gerar plantas livres de vírus e em curto espaço de tempo. Com o objetivo de aprimorar técnicas de micropropagação de amoreira-preta cultivar Brazos (Rubus idaeus L.), segmentos nodais, oriundos de plântulas preestabelecidas in vitro foram excisados e inoculados em meio WPM (0, 50, 100, 150 e 200%), suplementado com diferentes concentrações de BAP (0; 0,5; 1,0; 2,0 e 4,0 mg L-1). Após a inoculação, os explantes foram transferidos para sala de crescimento a 27±1ºC, irradiância de 35 mmol m 2 s 1 e fotoperíodo de 16 horas, onde permaneceram por 60 dias. O delineamento experimental utilizado foi inteiramente casualizado, utilizando-se de quatro repetições com quatro explantes cada. Maior número de brotos foi proporcionado com 1,0 mg L-1 de BAP associado a 100% de meio WPM e maior comprimento médio dos brotos após 60 dias foi verificado em 1,0 mg L-1 de BAP associado a 200% de meio WPM. Maior peso de matéria seca da parte aérea foi obtido em meio WPM 200% acrescido de 0,5 mg L-1 de BAP

Citometria de fluxo em bananeira: doses e tempo de exposição ao iodeto de propídeo.

A citometria de fluxo é uma técnica que envolve a análise das propriedades óticas (dispersão da luz e fluorescência) de partículas (células, núcleos, cromossomos, organelas) que fluem em uma suspensão líquida (Dolezel, 1997). Esse princípio pode ser usado, por exemplo, para medir a quantidade de DNA de uma célula (Dolezel e Bartos, 2005). Em plantas, é possível obter milhões de núcleos em suspensão a partir de poucas gramas de tecido foliar em um procedimento relativamente simples que envolve a maceração desse tecido em uma solução tampão que mantém a integridade nuclear (Galbraith et al., 1983). A coloração dessa amostra com corantes específicos para o DNA (DAPI, iodeto de propídeo, brometo de etídeo) permite ao aparelho estimar a quantidade de DNA.(Dolezel e Bartos, 2005).pdf 71

Influência do tempo, temperatura e umidade na qualidade das amostras de citometria de fluxo de bananeira.

A banana é uma das frutas mais consumidas no mundo, possui alto valor nutritivo e socioeconômico, pois mobiliza um grande contingente de mão-de-obra, permite retorno rápido ao produtor e é geradora de divisas (Ganga, 2002). Em 2008 o Brasil era o quarto maior produtor mundial de banana, produzindo mais de 7 milhões de toneladas de frutos por ano, em uma área de 513 mil hectares (FAO, 2010). Embora exista um número expressivo de variedades de banana no Brasil, quando se considera preferência dos consumidores, produtividade, tolerância a pragas, porte adequado, resistência à seca e ao frio, restam poucas variedades com potencial agronômico para utilização comercial. Estratégias alternativas de melhoramento genético da bananeira, fundamentadas na duplicação de cromossomos tem a função de gerar híbridos com características desejáveis pelo programa de melhoramento genético da cultura (Vakili, 1967; Stover e Buddenhagen, 1986).pdf 186

Duração do ciclo celular em mitose de diplóide de bananeira pela técnica de citometria de fluxo.

Os principais entraves da bananicultura são: falta de resistência às principais doenças e pragas, baixa produtividade e porte elevado de algumas cultivares. Uma das estratégias para a solução desses problemas é a criação de novas variedades, mediante o cruzamento de diplóides melhorados (AA) com triplóides (AAB) e tetraplóides artificiais (AAAB e AAAA), gerando híbridos tetraplóide e ou triplóides secundários. Para a obtenção de tetraplóides (AAAA) sintéticos a partir de diplóides é necessário realizar a duplicação de cromossomos, mediante o uso de agentes antimitóticos como a colchicina e a orizalina (PIO, 2008). O conhecimento do tempo de duração do ciclo celular da bananeira otimizará trabalhos de duplicação de cromossomos, especificamente em relação ao período de exposição aos agentes antimitóticos, que são muito tóxicos e podem causar a morte das plantas em tempos de exposição muito prolongados. Pio (2008), em trabalhos com duplicação de cromossomos de bananeira, relatou problemas com a morte de grande parte das plantas e perda de parcelas. Esse problema não teria ocorrido se as plantas ficassem em exposição aos agentes antimitóticos apenas no tempo de duração do ciclo celular e não em períodos muito longos, como 24 e 48 h, como aqueles usados na maioria dos trabalhos de duplicação cromossômica. Este procedimento poderia diminuir também o aparecimento de mixoplóides (células com diferentes números de cromossomos na mesma planta), que é um outro problema grave neste tipo de trabalho. A técnica para a obtenção da análise do ciclo celular usando a citometria de fluxo se baseia no estágio de divisão da célula no referido ciclo, registrada nos histogramas obtidos. Galbraith et al. (2002) e Sgorbati et al. (1986) entre outros, utilizaram esta técnica para estudar as diferenças de proporção de cada fase do ciclo celular, consoante os órgãos, partes dos órgãos e idade das plantas. Sandoval et al. (2003) efetuaram um estudo ao nível do ciclo celular em tecidos in vitro de coqueiro de forma a controlar a sua regeneração. Mediante o exposto, este trabalho teve como objetivo a observação do período do ciclo celular do diplóide NBA-14 de bananeira, com o uso da técnica de citometria de fluxo.pdf 208

An approach on the in vitro maintenance of sugarcane with views for conservation and monitoring of plant nuclear DNA contents via flow cytometry.

In vitro conservation techniques can be utilized for germplasm maintenance. However, few reports on the in vitro conservation of sugarcane species are present in the literature. The objective of this study was to subject sugarcane plants to in vitro under minimal growth conditions and to evaluate the survival, regeneration, and the monitoring of nuclear DNA content levels of the plants. Shoots from 10 sugarcane varie-ties (Saccharum spp.) were introduced into two media: MC1, consisting of half-strength Murashige and Skoog (MS) salts and 3% sorbitol, or MC2, similar to the first formulation, but additionally supplemented with 3.8 ?Mabscisicacid(ABA)

Tampões de extração e utilização de RNAse na qualidade de análises de citometria de fluxo de bananeira.

A banana é um dos produtos alimentares mais produzidos no mundo atualmente, com mais de 130 países produtores, sendo muito importante, pois se torna grande geradora de fonte e renda empregando milhões de pessoas em todo o território nacional. O melhoramento desta espécie visa à obtenção de híbridos resistentes a doenças e com maior produtividade, neste sentido a duplicação cromossômica permite a geração de plantas autotetraplóides que, depois de avaliadas e selecionadas, são utilizadas em cruzamento com diplóides melhorados. Para avaliar o nível de ploidia pode-se utilizar a técnica de citometria de fluxo. Neste tipo de técnica o tampão para conservação dos núcleos mostra-se de grande importância (Stover e Buddenhagen, 1986; Bakry et al., 2007).pdf 186