LIMITING TEMPERATURES OF EXCITED NUCLEI : STATIC AND DYNAMICAL ASPECTS

Some static and dynamical calculations of hot nuclei are discussed within the framework of the mean field approximation

Intracellular distribution of Tankyrases as detected by multicolor immunofluorescence techniques

Poly(ADP-ribose) polymerases are a family of enzymes that catalyze the conversion of NAD+ into ADP-ribose. Among them, Tankyrases have been found to bind to centrosome, mitotic spindle and microsome proteins, in the cytoplasm, and to telomeres in the nucleus, where they play a relevant role in telomere metabolism. However, their precise intracellular localization during interphase has not been so far fully elucidated. We investigated this aspect in situ by double immunofluorescence experiments using antibodies recognizing Tankyrases 1–2 or other proteins residing in specific organelles (Golgi apparatus, mitochondria, lysosomes, endoplasmic reticulum). We used HeLa cells as a model system in vitro, before and after treatment with either actinomycin D or etoposide, to also investigate the possible relocation of Tankyrases during apoptosis. We observed that Tankyrases are distributed both in the nucleus and in the cytoplasm; in this latter compartment, they were found to colocate with the Golgi apparatus but never with the mitochondria; a pool of Tankyrases also colocates with the endoplasmic reticulum and lysosomes. Interestingly, in cells with clear signs of apoptosis, Tankyrases were detectable in the cytoplasmic blebs: this suggests that they are not massively cleaved during apoptosis and persist in the largely heterogeneous apoptotic remnants which are known to contain components of cytoplasmic and nuclear origin

Contribution of 3H-thymidine labelling index and flow cytometric S-phase in predicting survival of patients with non-Hodgkin's lymphoma.

The 3H-thymidine labelling index (3H-dT LI) of cell suspensions from fresh material and the flow cytometric S-phase (FCM-S) of nuclei recovered from paraffin blocks were determined on the same pathologic lymph node specimen for 190 non-Hodgkin's lymphomas (NHLs). FCM-S was defined by a planimetric method and by an optimization procedure. Poor correlation coefficients were observed among the three cell kinetic variables. All three cell kinetic variables were significant indicators of 8-year survival and median survival time. The life-regression procedure evidenced a significant relative contribution of 3H-dT LI and FCM-S, thus suggesting a different biologic meaning of the two cell kinetic variables. This finding was further supported by evidence that simultaneous use of 3H-dT LI and FCM-S can identify groups of patients with different survival better than when either modality is used alone. Multivariate analysis indicated that the risk groups as defined by cell kinetic variables are predictors of survival even in the presence of established factors such as histology and stage

Analysis of ERK3 intracellular localization: dynamic distribution during mitosis and apoptosis

Extracellular signal-regulated kinases (ERK) 1, 2 and 3 are involved in cell proliferation and differentiation, and apoptosis; although ERK1/2 have been widely studied, limited knowledge on ERK3 is available. The present work aimed at investigating ERK3 distribution during cell cycle and apoptosis in human tumor HeLa cells. The analysis performed by double immunofluorescence and immunoelectron microscopy experiments revealed that during interphase ERK3 is mainly resident in the nucleoplasm in association with ribonuclear proteins involved in early pre-mRNA splicing, it undergoes cell cycle-dependent redistribution and, during apoptosis, it remains in the nucleus in the form of massive nuclear aggregates, then moves to the cytoplasm and is finally extruded

Seleção de genes constitutivos para estudos de expressão gênica em Iinfonodo de bovinos infestados com carrapato Rhipicephalus (B.) microplus.

Um dos principais fatores em estudos de expressão gênica é a nonnalização dos dados por meio do uso de genes constitutivos. Esse é um método simples e amplamente utilizado, pois possibilita o controle de variação na quantidade inicial de material, na qualidade do RNA, na variação intrínseca do equipamento utilizado e nas diferenças na sintese de cDNA, permitindo avaliar se a variação encontrada está relacionada aos tratamentos estabelecidos ou a artefatos. O objetivo deste trabalho foi selecionar um gene constitutivo estável para análise de expressão gênica em linfonodos de bovinos resistentes e sensíveis ao carrapato Rhipicephalus (B.) microplus. Foram escolhidas cinco amostras de animais resistentes e cinco de animais sensíveis. Sei

Estudo da associação entre um SNP do gene FABP4 e espessura de gordura subcutânea em uma população de bovinos da raça Canchim.

O Canchim é uma raça composta, que foi criada procurando reunir a rusticidade do Nelore com a produtividade do Charolês. Esta raça vem sendo incorporada como uma opção para produção de carne no Brasil, entretanto é tardia em relação à deposição de gordura quando criada somente a pasto. Pesquisas têm sido realizadas com o objetivo identificar marcadores moleculares associados com a variação da espessura de gordura subcutânea (EGS) em bovinos de corte. O gene FABP4 é candidato para influenciar a característica em questão. O objetivo deste trabalho foi investigar a associação entre um polimorfismo de única base (SNP) localizado no gene FABP4 e EGS em bovinos da raça Canchim. Para essa análise foram utilizados 558 bovinos da raça Canchim criados a pasto. A associação entre os genótipos dos marcadores e medidas de espessura de gordura subcutânea foi analisada com um modelo animal, usando o método de máxima verossimilhança restrita através do programa ASREML. Foi observado efeito significativo (P<0,05) do SNP estudado sobre EGS nesta população da raça Canchim. Os resultados sugerem que a substituição de um alelo G por um alelo A pode conduzir à uma diminuição de 0,11 mm na média de EGS dessa população da raça Canchim

Prospecting candidate SNPs for backfat in Canchim beef cattle.

Canchim is a composite cattle breed developed in Brazil for beef production. One of the breeding objectives is to increase fat deposition. QTLs for fat thickness and/or marbling have been reported on BTA4 and BTA14. The IGFBP3 and DDEF1 genes, mapped to BTA4 and BTA14, respectively, affect adipogenesis. We looked for SNPs in the IGFBP3 and DDEF1 genes that could be associated with backfat thickness in Canchim beef cattle. For SNP identification, sires with the highest accuracy were ranked according to expected breeding value for fat thickness; the 12 extremes (six sires with the highest and six with the lowest expected breeding value for the trait) were chosen. Six regions of the IGFBP3 and 14 regions of the DDEF1 were sequenced using the Sanger method. Nine SNPs were identified in IGFBP3 and 76 in the DDEF1. After an initial analysis, two SNPs were selected to be genotyped for the whole population;these were DDEF1g.279401A>G and IGFBP3c.4394T>C(Trp>Arg). We found a significant effect (P ? 0.05) of allele substitution on backfat thickness; however, the IGFBP3 SNP did not significantly affect this trait

Expressão gênica de bovinos Nelore e cruzados Canchim X Nelore, Simental X Nelore e Angus X Nelore infestados com carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus.

O carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus é considerado um dos maiores causadores das perdas produtivas de bovinos no Brasil e no mundo. Estimativas sugerem que as perdas anuais, apenas no Brasil, sejam de dois bilhões de dólares (GRISI et al, 2002). Considerando essa perspectiva, muitos são os estudos visando entender os mecanismos de resistência de bovinos ao carrapato, assim como a interação parasita-hospedeiro. Dentre os mecanismos propostos, o sistema imune parece ser o fator mais importante na regulação desta resistência. Desta maneira, o objetivo deste projeto foi verificar a abundância de RNA mensageiro (mRNA) das citocinas IL-2, IL-4, IL-8, IL-10, IL-12, IL-13, MCP-1 e TNF-? em linfonodos de bovinos submetidos a infestação com carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus. Cinco animais resistentes e cinco animais sensíveis de cada um dos grupos genéticos Nelore, Canchim x Nelore, Simental x Nelore e Angus x Nelore foram submetidos à infestação artificial com carrapato. No nono dia da infestação foi feita a coleta dos linfonodos e então foi realizado o isolamento do RNA total e síntese de cDNA por transcrição reversa