A modular platform for growth of hybrid and polymer membrane systems by vesicle fusion

The MaxSynBio research project aims to construct artificial cells through mimicking predefined cell functions by a bottom-up approach via the assembly of functional parts and modules. Together with energy, metabolism, division, signaling and motility, growth represents one of the essential cell functions. This thesis was focused on the development of a growth module for artificial cells by achieving membrane expansion via vesicle fusion. Four different growth strategies were explored based on electrostatic interactions between the membranes, physicochemical factors (mechanical stress or dehydration) or fusogenic (soluble NSF-attachment protein receptor, SNARE) proteins. Relevant protocols, such as giant unilamellar vesicles (GUVs) and proteoGUVs formation, were developed, and the efficiency of each growth mechanism was analyzed through size distribution, membrane and content mixing. The membrane-bound compartments were formed from the copolymer poly(dimethylsiloxane)-graft-poly(ethylene oxide) (PDMS-g-PEO) or its blends with lipids. Prior to exploring growth mechanisms, their biophysical characteristics (bending rigidity, lateral diffusion, membrane disorder, proton permeability, durability and chemical stability) were analyzed and compared to pure lipid compartments. Furthermore, a model membrane protein bo3 oxidase was reconstituted in GUVs and its interplay with polymer and hybrid membrane was studied. The investigated membranes interacted differently with the reconstituted protein: while insertion of bo3 oxidase in soy phosphatidylcholine (PC) decreased the fluidity, it exercised the opposite effect on the polymer by loosening its structure. Characteristics of hybrid membranes were shown to be not always intermediate between lipid and polymer ones – blending the membrane led to overall increased proton permeability, but after proton pump insertion the compartments were surprisingly resealed, which was attributed to beneficial hybrid membrane rearrangement. Another example of non-intermediate characteristic of hybrid membranes was the bending rigidity, whereby the prevailing component (i.e., the polymer) dictated the membrane softness. Both hybrid and polymer membranes were shown to further soften upon insertion of largely hydrophobic membrane proteins. Furthermore, PDMS-g-PEO appears to increase the functional lifetime of membrane proteins and their resistance to reactive oxygen species (ROS). The first growth mechanism investigated in the thesis was based on electrostatic attraction between the membranes. Utilizing natural anionic and synthetic cationic lipids, oppositely charged vesicles, containing predominatly PDMS-g-PEO were formed and their fusion was explored. Partially replacing lipids with synthetic polymer PDMS-g-PEO led to significantly increased fusion efficiency. Furthermore, the results revealed that charged lipids are not required in both of the fusion-intended vesicle populations; neutral hybrids could be utilized instead of anionic ones, which also led to higher content mixing. Second growth mechanism was induced by mechanical stress in presence of salt and was limited to polymersomes. The approach was shown to be compatible with essential artificial cell functions, such as encapsulation of cytosolic components and the reconstitution of membrane machinery. Furthermore, the type of salt dictated the type of newly grown polymer structures upon agitation (GUVs in KCl and long tubes and polymer beads in NaCl), while the presence of dUTP caused the formation of tightly connected PDMS-g-PEO GUVs, similar to tissues. The third growth mechanism explored here was fusion/electroformation – a two-step mechanism. In the first step, LUVs were fused by partial dehydration, and in the second step GUVs were grown via electroformation. The approach was tuned for each type of tested membranes: PDMS-g-PEO, PDMS-g-PEO/soy PC and soy PC, and protein-functionalized microcompartments were successfully grown. Moreover, this work demonstrated that the optimized approach could be utilized for different types of membrane proteins – transmembrane peptides or complex mostly hydrophobic or asymmetric proteins. The method resulted in active enzymes – tested via proton pumping for bo3 oxidase, ATP synthesis for F1FO-ATPase, and fusion for SNAREs. Finally, the approach was extended to the growth of multicompartmentalized microcompartments, which platform will enable the integration of artificial organelles into artificial cells. The last, fourth, growth approach studied in this work utilized SNARE proteins, which are key components driving membrane fusion in nature. Utilizing know-how for the formation of protein-functionalized microcompartments (obtained by optimizing the fusion/electroformation approach), 2–40 μm SNARE-functionalized GUVs were formed. Interestingly, SNAREs had an opposite effect on membrane bending rigidity than the hydrophobic membrane protein (bo3 oxidase) – SNAREs rigidified both polymer and hybrid membranes. Fusion of SNARE-functionalized microcompartments was arrested in hemifusion, meanwhile, micro- and nanocompartments proceeded into pore opening and full fusion.Die Nachahmung vordefinierter, klar abegrenzter Zellfunktionen mit Hilfe biomolekularer Teile und funktionaler Module beschreibt den Bottom-Up Ansatz in der synthetischen Biologie. Dieser Ansatz wurde in dem Forschungsprojekt MaxSynBio der Max-Planck-Gesellschaft (2014-2020) mit dem Ziel genutzt, erste Prototypen für künstliche Zellen zu erzeugen. Energieversorgung, Metabolismus, Zellwachstum, Zellteilung, Signalübertragung und Fortbewegung repräsentieren diese essentiellen Zellfunktionen. Der Fokus der vorliegenden Arbeit lag in diesem Kontext auf der Entwicklung von Wachstumsmodulen für zukünftige künstliche Zellkonstrukte, welche mittels Membranerweiterung auf dem Weg der Vesikelfusion erreicht werden sollte. Dazu wurden vier verschiedene Wachstumsstrategien, basierend auf elektrostatischen Interaktionen zwischen Membranen, externen Faktoren (mechanischer Stress oder Dehydration) und Fusionsproteinen (SNARE-soluble NSF-attachement protein receptor), entwickelt. Die zur Herstellung von großen unilamellaren Vesikeln (GUVs giant unilamellar vesicles) und proteinhaltigen großen unilamellaren Vesikeln (proteoGUVs) notwendigen Vorschriften wurden in dieser Arbeit entwickelt und die Effizienz des Wachstums durch Ermittlung der Größenverteilung, der Membranvermischung und der Vermischung des Vesikelinhaltes analysiert. Die membrangebundenen Kompartimente wurden mit dem Copolymer Poly(dimethylsiloxane)-graft-poly(ethylene oxide) (PDMS-g-PEO) oder aus ihrer Verbindung mit Lipiden gebildet. Deren biophysikalische Eigenschaften (Krümmungs-Steifheit, laterale Diffusion, Membranverteilung, Protonenpermeabilität, Haltbarkeit und chemische Stabilität) mussten vor der Entwicklung der Wachstumsmechanismen bestimmt werden und mit reinen Lipid-Kompartimenten verglichen werden. Weiterhin wurde ein größtenteils hydrophobes Membranprotein, die Protonenpumpe bo3-Oxidase, in GUVs rekonstituiert und sein Verhalten in Polymer- und Hybridmembranen studiert. Die untersuchten Membranen verhielten sich nach der Rekonstitution des Proteins unterschiedlich: Während der Einbau des Proteins die Fluidität von Membranen aus Soja-basierten Phosphatidycholinen (PC) herabsetzte, hatte es den entgegengesetzten Effekt auf Polymermembranen, deren Struktur durch die Rekonstitution gelockert wurde. Im Falle von hybriden Membranstrukturen hat sich gezeigt, dass deren Eigenschaften nicht immer zwischen denen der Lipid- und der Polymermembranen liegen. Eine Vermischung dieser beiden Membranarten führt zu einer erhöhten Protonenpermeabilität und zu einer breiteren Verteilung; jedoch waren nach der Rekonstitution des Proteins die Kompartimente erstaunlicherweise nahezu verschlossen. Dies ist zurückzuführen auf die vorteilhafte Neuanordnung der Makromoleküle in der hybriden Membran. Ein weiteres Beispiel dafür ist die Krümmungs-Steifheit von hybriden Membranen, in denen die vorherrschende Komponente, das polymere Makromolekül, die Weichheit der Membran vorgibt. Für beide Membranarten, Hybride und Polymere, konnte gezeigt werden, dass sie durch die Einbau von größtenteils hydrophoben Membranproteinen weicher werden. Zudem scheint das synthetische Polymer PDMS-g-PEO die funktionale Lebensdauer von Membranproteinen zu verlängern und deren Resistenz gegenüber reaktiven Sauerstoffspezies (ROS) zu erhöhen. Die ersten in dieser Arbeit untersuchten Wachstumsmechanismen basieren auf elektrostatischen Interaktionen zwischen Membranen. Unter Verwendung natürlicher anionischer und synthetischer kationischer Lipide wurden entgegengesetzt geladene Vesikel, die hauptsächlich PDMS-g-PEO enthielten, gebildet und untersucht. Das partielle Ersetzen von Lipiden durch das synthetische Polymer PDMS-g-PEO erhöhte die Fusionseffizienz. Ferner wurde herausgefunden, dass geladene Lipide in beiden fusions-gesteuerten Vesikelpopulationen während der hybriden Membranfusion nicht notwendig sind, denn neutrale Hybride können statt anionischer verwendet werden, was ebenfalls zu einer höheren Durchmischung führte. Der zweite Wachstumsmechanismus wird durch mechanischen Stress in Vorhandensein von Salz ausgelöst und ist auf Polymersome beschränkt. Es zeigte sich, dass dieser Ansatz kompatibel mit essentiellen Funktionen der künstlichen Zellen ist, wie z. B. die Enkapsulierung zytosolischer Komponenten und die Rekonstitution von membrangebundenen Prozessen. Zudem bestimmt die Art der durch das Salz hervorgerufenen Formen von neu gewachsenen, durch aktive Durhmischung entstandenen polymeren Strukturen (lange Röhren bei GUVs in KCl und Polymerkugeln in NaCl) und die Anwesenheit des Enzyms dUTP (Deoxyuridine triphosphate) bewirkt die Formierung fest verbundener PDMS-g-PEO GUVs, die wiederum gewebeähnliche Strukturen ausbilden. Der dritte in der Arbeit erforschte Wachstumsmechanismus ist die Fusion/Elektroformation - ein zweistufiger Prozess: Im ersten Schritt wurden LUVs durch partielle Dehydration fusioniert und im zweiten Schritt zu GUVs durch Elektroformation heranwachsen gelassen. Dieser Ansatz wurde genauestens für jeden Membrantyp abgestimmt: PDMS-g-PEO, PDMS-g-PEO/PC (Soja) und PC (Soja). Als Resultat konnten erfolgreich Protein-funktionale Mikrokompartimente erzeugt werden. Dabei zeigte sich, dass der gewählte Ansatz für verschiedene Arten von Membranproteinen, transmembrane Peptide oder komplexe, größtenteils hydrophobe oder asymmetrische Proteine, verwendet werden kann. Die Methode resultierte in aktiven Enzymen, wie für die Protonenpumpe bo3-Oxidase, die Synthese von ATP mit der F1FO-ATPase und die Fusion von Vesikeln durch SNARE-Proteine nachgewiesen. Letztendlich wurde der Ansatz auch auf Multi-Mikrokompartimente erweitert. In der längerfristigen Perspektive könnte die entwickelte Plattform für die Integration künstlicher Organellen in künstliche Zellen nutzbar gemacht werden. Der letzte, vierte Ansatz, der in dieser Arbeit untersucht wurde, beschäftigte sich mit SNARE-Proteinen, welche in der Natur als der Schlüsselproteinkomplex für Membranfusionen bekannt sind. Die Anwendung des in der Optimierung des Fusions-/Elektroformation-Wachstumsansatzes erworbenen Knowhows zum Aufbau Protein-funktionalisierter Mikrokompartimente führte zur Entwicklung von 2-40 μm großen SNARE-funktionalisierten GUVs. Interessanterweise hatten die SNAREs einen entgegengesetzten Effekt auf die Membran-Krümmungs-Steifheit als die größtenteils hydrophoben Membranproteine (bo3 Oxidase). Durch die SNAREs wurden sowohl die polymeren, als auch die hybriden Membransysteme steifer. Die Fusion der SNARE-funktionalisierten Mikrokompartimente verharrte in einer Hemifusion, während es bei der Fusion zwischen Mikro- und Nanokompartimenten zur Porenöffnung und vollständigen Fusion kam

Bottom-up construction of the artificial mitochondrion

Synthetic life, as envisioned by a bottom-up synthetic biology, appears to be, much like it´s natural counterpart, highly energy demanding. Therefore, in this work, a versatile energy regeneration module was constructed via bottom-up hand-tailored reconstitution procedure to enable continuous supply of adenosine triphosphate (ATP) and another important co-factor, NAD+. This energy regeneration module can be considered as the artificial respiratory chain (ARC), consisting of four functional parts: the ATP synthase, a proton pump, a NADH dehydrogenase and a compartment. Due to the lack of the repair and replacement mechanisms in the current iteration of the artificial cell, to increase the stability and durability of the energy module, substitution of lipid compartments with the polymer or lipid/polymer hybrid ones was explored. The reconstitution procedure was devised, which enabled simultaneous insertion of several enzymes comprising the ARC in the mentioned polymer-based compartments. The enzyme insertion could be controlled by the choice of mediating detergent and the degree of membrane solubilization by the detergent. In this context, the orientation and reconstitution efficiency of the individual respiratory enzymes were determined in different types of compartments, and the final output of the energy module was analysed in the light of these reconstitution parameters. Moreover, the interplay between the respiratory enzymes and the man-made membranes was analysed in greater detail. In hybrid compartments, the analysis revealed the structural rearrangements and changes in membrane permeability following the enzyme insertion. Meanwhile the protective function of the graft copolymer against reactive oxygen species (ROS) was discovered in enzyme-functionalized polymer compartments in which the preserved enzymatic activity as well as structural integrity of the compartments was observed following the ROS treatment. To increase the efficiency of the ARC, two variants of the respiratory chain were constructed and tested for the activity – one featuring a proton-translocating respiratory complex I and another featuring non-translocating DT-diaphorase. The most active energy module was then coupled with the metabolic module comprising 17 different enzymes to form the minimal artificial organelle – minimal artificial mitochondrion – which was operational for more than an hour. To enable coupling between the two modules, the composition and osmolarity of the ARC were tuned. In order to examine the effects of fluctuating osmolarity on the activity of the ARC, osmotic stress was applied to the energy module and a staggering resistance of the module to hypertonic as well as hypotonic environment was discovered. Furthermore, membrane tightness was imperative for the establishment of proton gradient, used to drive ATP synthesis by the energy module. Therefore, Poloxamer 188 was used to mend the imperfection in lipid bilayers originating from enzyme insertion, and membrane resealing was achieved resulting in significantly increased ATP synthesis. Finally, an auxiliary oxygen supply system was developed to address oxygen depletion by the module. In this role, the oxygen release from the calcium peroxide particles was analysed and the effect of particles on the activity of the ARC was evaluated. With the oxygen supply system, a remarkable reoxygenation of the energy module was accomplished and the initial ATP synthesis at the highest rate by the module was significantly extended. Based on these findings, the respiratory tissue was proposed, which combines the essentials for continuous, versatile and efficient energy regeneration. To enable the step-wise assembly of multiprotein artificial respiratory chains with the preserved optimal configuration of each individual enzyme, membrane fusion mediated by fusogenic proteins was explored. The latter were incorporated into polymer and hybrid compartments to form a versatile and widely biocompatible minimal fusion platform. The insertion of fusogenic proteins in polymer and hybrid compartments was analysed in greater detail with respect to the protein orientation and insertion efficiency, as well as membrane architecture. In addition, protein-mediated fusion of polymer and hybrid compartments was inspected via membrane mixing, as well as the functional coupling between two respiratory enzymes. For the first time it was found that synthetic amphiphile membranes also undergo fusion, mediated by the protein machinery for synaptic secretion, and the remarkably high membrane and content mixing was observed. To elucidate the reasons for successful and efficient fusion, the pore opening dynamics were investigated, which revealed the increased stability of the pores in polymer membranes. Finally, key fusion intermediates of protein-mediated polymer and hybrid fusion were observed with cryo electron microscopy and described, offering unprecedented insights of the fusion process in this novel system.Das künstliche Leben, so wie es von der Synthetischen Biologie mit einem bottom-up Ansatz vergegenwärtigt wird, scheint, wie sein natürliches Pendant energetisch sehr anspruchsvoll zu sein. Zur Gewährleistung einer kontinuierlichen Zufuhr von Adenosintriphosphat (ATP) und Nicotinamidadenindinukleotid (NAD) wurde in dieser Arbeit ein vielfältiges Energieregenerationsmodul durch maßgeschneiderte Rekonstitution entwickelt. Dieses Modul besteht im Wesentlichen aus einer künstlichen Atmungskette (ARC - artificial respiratory chain), die sich aus vier funktionalen Einheiten zusammensetzt: der ATP-Synthase, einer Protonenpumpe, der NADH-Dehydrogenase und einem Kompartiment. Zur Erhöhung der Stabilität und Beständigkeit des Energiemoduls wurden, auf Grund der mangelnden Reparatur- und Austauschmöglichkeiten derzeitiger künstlicher Zellen, der Austausch von Lipid-Kompartimenten durch Polymer- oder Lipid/Polymer-Kompartimenten, sogenannten Hybriden, untersucht. Für die Entstehung der ARC wurde eine Rekonstitutionsmethode entwickelt, welche den simultanen Einbau mehrerer Enzyme in die erwähnten Polymer-basierten Kompartimente ermöglicht. Die Insertion der Enzyme kann zum einen durch die Wahl des Rekonstitutions-vermittelnden Detergens und zum anderen durch den Grad der Membransolubilisierung durch das Detergens bestimmt kontrolliert werden. In diesem Kontext wurden die Orientierung und die Effizienz der Rekonstitution der einzelnen respiratorischen Enzyme in den verschiedenen Kompartimenten bestimmt und die endgültige Leistung des Energiemoduls mit diesen Rekonstitutionsparametern in Beziehung gesetzt. Zudem wurden die Wechselwirkungen zwischen den Enzymen und den künstlich geschaffenen Membranen ausführlich analysiert. Untersuchungen der Hybrid-Kompartimente ergaben, dass es durch den Einbau von Enzymen zu strukturellen Umlagerungen und Veränderungen in der Permeabilität der Membran kommt, während in einem mit Enzymen funktionalisiertem Polymer-Kompartiment eine schützende Funktion des Graft-Co-polymers gegen reaktive Sauerstoffspezies (ROS) festgestellt werden konnte, nachdem diese mit ROS behandelt wurden. Die Enzymaktivität und die strukturelle Integrität der Kompartimente blieb erhalten. Zur Erhöhung der ARC-Effizienz wurden zwei Varianten der Atmungskette entwickelt und auf deren Aktivität hin überprüft. Eine Variante enthielt den Protonen-translozierenden Komplex I und die andere die nicht-translozierende DT-diaphorase. Das aktivste Energiemodul wurde im Anschluss mit einem aus siebzehn Enzymen bestehenden Stoffwechselmodul gekoppelt, mit dem Ziel, ein minimales künstliches Organell - ein minimales künstliches Mitochondrium - aufzubauen, wobei das entstandene Konstrukt über eine Stunde funktionsfähig war. Um beide Module zu koppeln, wurden die Zusammensetzung und die Osmolarität der ARC angepasst. Die Auswirkung von wechselnder Osmolarität auf die Aktivität wurde durch osmotischen Stress untersucht und eine erstaunliche Widerstandsfähigkeit sowohl gegen hypertonische als auch gegen hypotonische Umgebungen festgestellt. Zudem war die Dichtheit der Membran eine feste Voraussetzung für die Schaffung eines pH-Gradienten, der wiederum zur Synthese von ATP befähigt. Fehlordnungen in der Lipiddoppelschicht, welche aufgrund der Enzym-Rekonstitutionen entstanden waren, wurden mittels Poloxamer 188 behoben und die erneute Membranversiegelung führte zu einer deutlich höheren ATP-Synthese. Um die Erschöpfung von Sauerstoff durch das Energiemodul zu beseitigen, wurde mittels Calciumperoxid-Partikeln ein zusätzliches Versorgungssystem mit Sauerstoff entwickelt und dessen Effekt auf die Aktivität der ARC untersucht. Die Freisetzung von Sauerstoff von diesen Partikeln führte zu einer erheblichen Sauerstoffanreicherung und verlängerte die höchste Anfangsrate der ATP-Synthese wesentlich. Bezüglich dieser Erkenntnisse ist die Entwicklung respiratorischer Gewebe vorstellbar, welche alle wesentlichen Voraussetzungen für eine kontinuierliche, vielseitige und effiziente Energieregenerierung besitzen. Zur schrittweisen Assemblierung multienzymatischer ARC, deren individuelle Enzyme bereits optimal konfiguriert worden sind, wurden Membranfusion-vermittelnde Proteine untersucht. Diese wurden in Polymer- und Hybridkompartimente eingebracht, um eine vielfältige und weitgehend biokompatible minimale Fusionsplattform zu errichten. Die Rekonstitution der Fusionsproteine wurde in Bezug auf die Orientierung des Proteins, die Effizienz der Insertion, wie auch auf die Membranarchitektur hin untersucht. Mit Hilfe der Membranvermischung wurde zusätzlich die Protein-vermittelte Fusion von Polymer- und Hybridkompartimenten sowie die funktionale Kopplung zwischen Enzymen der Atmungskette analysiert. Erstmals wurde festgestellt, dass auch synthetische amphiphile Membranen durch synaptische Sekretionsproteine fusionieren und zudem bemerkenswert hohe Membran- und Gehaltsvermischungen beobachtet werden konnten. Zur Ursachenfindung wurde die Porenöffnungsdynamik gemessen, die eine erhöhte Stabilität der Poren in Polymermembranen aufzeigte. Letztendlich wurden durch Kryoelektronenmikroskopie entscheidende Fusionszwischenstufen von Protein-vermittelter Polymer- und Hybridfusion beobachtet und beschrieben, die einen beispiellosen Einblick in die Fusionsprozesse in diesem neuartigen System gewährten

Kepuasan Kerja Guru : Dintinjau Dari Komunikasi Interpersonal Dan Motivasi Kerja

           Kepuasan kerja merupakan suatu sikap yang positif yang menyangkut penyesuaian diri yang sehat dari para karyawan terhadap kondisi dan situasi kerja, termasuk di dalamnya masalah upah, kondisi sosial, kondisi fisik dan kondisi psikologis. Kenyataan menunjukkan, bahwa orang mau bekerja bukan hanya mencari dan mendapatkan upah saja (unsur ekonomis), akan tetapi dengan bekerja dia mengharapkan akan mendapatkan kepuasan kerja. Kepuasan kerja adalah sikap umum terhadap pekerjaan seseorang, yang menunjukkan perbedaan antara jumlah penghargaan yang diterima pekerja dan jumlah yang mereka yakini seharusnya mereka terima.Tujuan penelitian ini adalah mendiskripsikan dan menganalisis pengaruh antara komunikasi interpersonal  dan motivasi kerja terhadap kepuasan kerja guru SMP Negeri di Sub Rayon 16 Kab. Pasuruan. Populasi dalam penelitian ini adalah semua guru di SMP Negeri di sub Rayon 16 Kab. Pasuruan yang berjumlah 121 orang. Teknik pengambilan sampel pada penelitian ini menggunakan teknik cluster random sampling. Hasil penelitian menunjukkan bahwa variabel komunikasi interpersonal (X1), motivasi kerja (X2), berpengaruh signifikan baik secara parsial maupun secara simultan terhadap variabel kepuasan kerja guru (Y). Variabel komunikasi interpersonal memiliki kontribusi terbesar terhadap kepuasan kerja guru yakni sebesar 0,489. Variabel komunikasi interpersonal, motivasi kerja mampu menjelaskan variabel kepuasan kerja guru sebesar 60,5%

Kepemimpinan Kepala Sekolah Dan Disiplin Kerja Guru : Pengaruhnya Terhadap Kinerja Guru

Kinerja adalah tingkat keberhasilan seseorang atau kelompok dalam melaksanakan tugas sesuai dengan tanggung jawab dan wewenangnya berdasarkan standar kinerja yang telah ditetapkan selama periode tertentu dalam kerangka mencapai tujuan organisasi. Kinerja guru berkaitan dengan tugas perencanaan, pengelolaan pembelajaran, dan penilaian hasil belajar siswa. Tujuan penelitian ini adalah mengetahui pengaruh kepemimpinan Kepala Sekolah dan disiplin kerja Guru terhadap kinerja Guru di SMPN sub rayon 18 Kabupaten Pasuruan. Populasi dalam penelitian ini sebanyak 123 Guru yang berasal dari Guru di SMP Negeri di wilayah Sub Rayon 18 Kabupaten Pasuruan. Teknik pengambilan sampel pada penelitian ini menggunakan teknik cluster random sampling. Hasil penelitian menunjukkan variabel kepemimpinan kepala sekolah (X1), dan disiplin kerja guru (X2) berpengaruh signifikan baik secara parsial maupun secara simultan terhadap variabel kinerja guru (Y). Variabel disiplin kerja guru memiliki kontribusi terbesar terhadap kinerja guru yakni sebesar 0,086. Variabel kepemimpinan kepala sekolah dan disiplin kerja guru mampu menjelaskan variabel kinerja guru sebesar 41,3

Whey usage for ice-cream and frozen desserts production

Sirutka, ta žuto zelena tekućina, koja ostaje u proizvodnji sira, svježeg sira ili kazeina, puštala se nekada u rijeke ili kanale, a u novije vrijeme počinje polako dobivati na upotrebljivosti. Počinjemo iskorištavati njezine sa-sastojke, koji mogu obogatiti određene vrste hrane

Personalentwicklung im Theater

Personalentwicklung im Theater bildet sowohl in der wissenschaftlichen Auseinandersetzung als auch in der Praxis des Theaters ein Desiderat. Die vorliegende Forschungsarbeit widmet sich der Entwicklung der Künstler als den Stakeholdern innerhalb des Theaterbetriebs und möchte der Zielgruppe – den Trägern und Leitungen der Theater sowie den Künstlern – eine Handlungsempfehlung aussprechen. Aus diesem Grund wird zu Beginn die Personalentwicklung als ein Teil des Human Ressourcen Managements aus der Perspektive der wirtschaftswissenschaftlichen Literatur behandelt. Daran anschließend wird mittels der Auswertung von zwei Umfragen der aktuelle Stand aus der Perspektive der deutschen Tanzcompagnien ermittelt, wobei die Ergebnisse sowie die daraus abgeleiteten relevanten PE-Maßnahmen anschließend in drei Segmenten ausgewertet und diskutiert werden: (1) ‚On the Job’-PE-Maßnahmen im Berufs- und Ensemblealltag. Mittels Feldforschungen an drei Tanzcompagnien wird durch Beobachtung der Kreationsprozesse von Uraufführungen und durch Befragung von Choreografen gleichzeitig ein Beitrag zu dem noch jungen Feld der Probenforschung geleistet. (2) ‚Near the Job’-PE-Maßnahmen, die schwerpunktmäßig mit der Tanzmedizin korrelieren, wobei es um den Erhalt, die Verbesserung bzw. eine schnellere Wiederherstellung der Leistungsfähigkeit von Tänzern durch die Tanzmedizin geht. (3) ‚Out of the Job’-PE-Maßnahmen. Die zeitlich begrenzte Karriere eines Tänzers und die meist fehlenden beruflichen Perspektiven zeichnen die Periode der Transition aus, weswegen Fortbildungsmaßnahmen von einer hohen Dringlichkeit und Bedeutung sind und der Bedarf an rechtzeitiger und systematischer Ermittlung der (latenten) Fertigkeiten und Fähigkeiten sowie Interessen der einzelnen Tänzer eine hohe Relevanz aufweisen. Aufgrund der hohen Anforderungen, der kurzen Karriere und nachfolgenden Transition scheint vor allem für Theatertänzer eine strategische PE unerlässlich. Durch die vorliegende Forschungsarbeit konnten erste Hinweise ermittelt werden, dass die vorgestellten Instrumente zur Durchführung von Personalentwicklungsmaßnahmen einen systematischen Einzug in die organisatorische Planung der Theater erhalten könnten bzw. sollten.Human resources development in theatre is a desideratum both in academic debate and in the practice of theatre. This research work is dedicated to the development of artists as stakeholders within the theatre business and aims to provide a recommendation for action to the target group - the sponsors and directors of the theatres as well as the artists. For this reason, the development of human resources as a part of human resource management will be initially treated from the perspective of economic science literature. Subsequently, the current status from the perspective of German dance companies will be determined by means of the evaluation of two surveys, whereby the results and the relevant HR measures derived from them will then be evaluated and discussed in three segments: (1) ‚On the Job‘-HR-measures in everyday professional and ensemble life. By means of field research on three dance companies and by observing the creation processes of a new theatre production and interviewing choreographers, simultaneous a contribution is made to the still young field of theatre rehearsal research. (2) ‚Near the Job‘-HR-measures, which correlate mainly with dance medicine, whereby it is about the maintenance, the improvement and/or a faster recovery of the performance capacity of dancers by dance medicine. (3) ‚Out of the Job‘-HR-measures. The time-limited career of a dancer and the mostly missing professional perspectives characterise the period of transition, which is why further training measures are of high urgency and importance and the need for timely and systematic identification of the (latent) skills and abilities as well as interests of the individual dancers are highly relevant. Due to the high demands, the short career and the subsequent transition, a strategic HR development seems to be indispensable especially for theatre dancers. The present research work has provided initial indications that the instruments presented for the implementation of human resources development measures could or should be systematically incorporated into the organisational planning of the theatres

Personalentwicklung im Theater

Personalentwicklung im Theater bildet sowohl in der wissenschaftlichen Auseinandersetzung als auch in der Praxis des Theaters ein Desiderat. Die vorliegende Forschungsarbeit widmet sich der Entwicklung der Künstler als den Stakeholdern innerhalb des Theaterbetriebs und möchte der Zielgruppe – den Trägern und Leitungen der Theater sowie den Künstlern – eine Handlungsempfehlung aussprechen. Aus diesem Grund wird zu Beginn die Personalentwicklung als ein Teil des Human Ressourcen Managements aus der Perspektive der wirtschaftswissenschaftlichen Literatur behandelt. Daran anschließend wird mittels der Auswertung von zwei Umfragen der aktuelle Stand aus der Perspektive der deutschen Tanzcompagnien ermittelt, wobei die Ergebnisse sowie die daraus abgeleiteten relevanten PE-Maßnahmen anschließend in drei Segmenten ausgewertet und diskutiert werden: (1) ‚On the Job’-PE-Maßnahmen im Berufs- und Ensemblealltag. Mittels Feldforschungen an drei Tanzcompagnien wird durch Beobachtung der Kreationsprozesse von Uraufführungen und durch Befragung von Choreografen gleichzeitig ein Beitrag zu dem noch jungen Feld der Probenforschung geleistet. (2) ‚Near the Job’-PE-Maßnahmen, die schwerpunktmäßig mit der Tanzmedizin korrelieren, wobei es um den Erhalt, die Verbesserung bzw. eine schnellere Wiederherstellung der Leistungsfähigkeit von Tänzern durch die Tanzmedizin geht. (3) ‚Out of the Job’-PE-Maßnahmen. Die zeitlich begrenzte Karriere eines Tänzers und die meist fehlenden beruflichen Perspektiven zeichnen die Periode der Transition aus, weswegen Fortbildungsmaßnahmen von einer hohen Dringlichkeit und Bedeutung sind und der Bedarf an rechtzeitiger und systematischer Ermittlung der (latenten) Fertigkeiten und Fähigkeiten sowie Interessen der einzelnen Tänzer eine hohe Relevanz aufweisen. Aufgrund der hohen Anforderungen, der kurzen Karriere und nachfolgenden Transition scheint vor allem für Theatertänzer eine strategische PE unerlässlich. Durch die vorliegende Forschungsarbeit konnten erste Hinweise ermittelt werden, dass die vorgestellten Instrumente zur Durchführung von Personalentwicklungsmaßnahmen einen systematischen Einzug in die organisatorische Planung der Theater erhalten könnten bzw. sollten.Human resources development in theatre is a desideratum both in academic debate and in the practice of theatre. This research work is dedicated to the development of artists as stakeholders within the theatre business and aims to provide a recommendation for action to the target group - the sponsors and directors of the theatres as well as the artists. For this reason, the development of human resources as a part of human resource management will be initially treated from the perspective of economic science literature. Subsequently, the current status from the perspective of German dance companies will be determined by means of the evaluation of two surveys, whereby the results and the relevant HR measures derived from them will then be evaluated and discussed in three segments: (1) ‚On the Job‘-HR-measures in everyday professional and ensemble life. By means of field research on three dance companies and by observing the creation processes of a new theatre production and interviewing choreographers, simultaneous a contribution is made to the still young field of theatre rehearsal research. (2) ‚Near the Job‘-HR-measures, which correlate mainly with dance medicine, whereby it is about the maintenance, the improvement and/or a faster recovery of the performance capacity of dancers by dance medicine. (3) ‚Out of the Job‘-HR-measures. The time-limited career of a dancer and the mostly missing professional perspectives characterise the period of transition, which is why further training measures are of high urgency and importance and the need for timely and systematic identification of the (latent) skills and abilities as well as interests of the individual dancers are highly relevant. Due to the high demands, the short career and the subsequent transition, a strategic HR development seems to be indispensable especially for theatre dancers. The present research work has provided initial indications that the instruments presented for the implementation of human resources development measures could or should be systematically incorporated into the organisational planning of the theatres

Expert bases for implementation of land policy in the municipality of Vrhnika

The thesis deals with land policy in the municipality of Vrhnika. Currently applicable spatial\ud planning documents for the area of the municipality of Vrhnika are presented. Furthermore,\ud the quantity of vacant land for housing construction in estimated based on the number of\ud building permits issued between 2007 and 2015. For the same period of time real estate\ud market is analyzed as well.\ud In the end the existing public utility infrastructure within settlements is presented as well as\ud the calculation of building land development fee. The analysis carried out in the thesis could\ud contribute to a more rational planning of vacant land for housing construction, which should\ud be initially planned in the areas with existing public utility infrastructure

Protein-rich rafts in hybrid polymer/lipid giant unilamellar vesicles

Considerable attention has been dedicated to lipid rafts due to their importance in numerous cell functions such as membrane trafficking, polarization, and signaling. Next to studies in living cells, artificial micrometer-sized vesicles with a minimal set of components are established as a major tool to understand the phase separation dynamics and their intimate interplay with membrane proteins. In parallel, mixtures of phospholipids and certain amphiphilic polymers simultaneously offer an interface for proteins and mimic this segregation behavior, presenting a tangible synthetic alternative for fundamental studies and bottom-up design of cellular mimics. However, the simultaneous insertion of complex and sensitive membrane proteins is experimentally challenging and thus far has been largely limited to natural lipids. Here, we present the co-reconstitution of the proton pump bo3 oxidase and the proton consumer ATP synthase in hybrid polymer/lipid giant unilamellar vesicles (GUVs) via fusion/electroformation. Variations of the current method allow for tailored reconstitution protocols and control of the vesicle size. In particular, mixing of protein-free and protein-functionalized nanosized vesicles in the electroformation film results in larger GUVs, while separate reconstitution of the respiratory enzymes enables higher ATP synthesis rates. Furthermore, protein labeling provides a synthetic mechanism for phase separation and protein sequestration, mimicking lipid- and protein-mediated domain formation in nature. The latter means opens further possibilities for re-enacting phenomena like supercomplex assembly or symmetry breaking and enriches the toolbox of bottom-up synthetic biology.This work is funded by the Federal Ministry of Education and Research (BMBF) of Germany and the Max Planck Society. K.S. acknowledges funding from the Max Planck School Matter to Life, a joint graduate program of German Universities and Research Organizations. This work was supported by the European Union through funding from the Horizon Europe ERA Chair “hot4cryo” project number 101086665 (to P.L.K.), the Federal Ministry of Education and Research (BMBF, ZIK program) (Grant nos. 03Z22HN23, 03Z22HI2, and 03COV04 to P.L.K.), the European Regional Development Funds (EFRE) for Saxony-Anhalt (Grant no. ZS/2016/04/78115 to P.L.K.), the Deutsche Forschungsgemeinschaft (project number 391498659, RTG 2467), and the Martin-Luther University of Halle-Wittenberg. The authors are grateful to Anne Christin Reichelt for her help with microscopy and Dr. Christian Tüting for his help with cryo-TEM.Peer ReviewedPostprint (published version

Comparative analysis of real estate sales in local communities near the City of Ljubljana

V diplomski nalogi smo analizirali cene stanovanj, stanovanjskih hiš in nezazidanih stavbnih zemljišč v lokalnih skupnostih ob Mestni očini Ljubljana. Iz Trgoskopa smo pridobili podatke za leto 2017, ki smo jih prečistili po izbranih kriterijih. Stanovanjske hiše in stanovanja smo glede na lokacijo razdelili na območja znotraj občinskih središč in območja izven občinskih središč. Vsako območje smo nato razdelili še na dva dela glede na neto tlorisno površino. Nezazidana stavbna zemljišča smo razdelili samo glede na velikost zemljišča, ne glede na to, kje se nahajajo. Za vse nepremičnine smo zračunali osnovne statistike in izvedli primerjalno analizo. V nadaljevanju smo se osredotočili na prodaje stanovanj, ker je bilo v obravnavanih občinah izvedenih največ prometa s tem tipom nepremičnin. Povprečno prodajno ceno stanovanj na enoto po posameznih vrednostnih conah smo primerjali s posplošeno tržno vrednostjo referenčnega stanovanja, ki je opredeljena v modelih množičnega vrednotenja nepremičnin. Podrobno analizo smo izvedli samo po občinah, kjer so bile razlike največje. Ugotovili smo, da so razlike med vrednostjo referenčnega stanovanja na enoto in aritmetično sredino cen na enoto za analizirane prodaje stanovanj v večini občin relativno velike.In the diploma thesis we analyzed the prices of apartment, houses and uninhabited building land in local communities near the municipality Ljubljana. From Trgoskop we obtained data for year 2017, which were purified according to selected criteria. Depending on the location, we divided the apartment and houses into an area within the municipal center and an area outside the municipal center. Each area was then divided into two parts according to the net floor area. We divided the unoccupied building land only according to the size of the land, regardless of where it is located. For all real estate we calculated basic statistics and conducted a comparative analysis. In the following, we focused on the sale of apartments, because most of the properties were sold in the municipalities concerned. The average selling price of apartment per unit by individual value zones was compared with the generalized market value of the reference apartment, which is defined in the models of mass valuation of real estate. A detailed analysis of the difference was made only in the municipalities where the differences were greatest. We found that the differences in the majority of municipalities, between the value of the reference apartment per unit and the arithmetic mean of unit prices for the analyzed sales of apartments, are relatively high