H3 mRNA level as a new proliferative marker in astrocytomas

AbstractReplication-dependent H3.1 and H3.2 histones are encoded by 11 genes. The H3 mRNA levels in brain astrocytomas using real-time RT-PCR assay was examined. The sequence of primers and probe used in amplification was designed basing on the reference sequence GenBank accession no. Z83737. The H3 mRNA levels correlated with tumor grade (R=0.56, P=0.0012), Ki-67 proliferative antigen labeling index (R=0.58, P=0.0008) and patient survival time (R=−0.50, P=0.005), discriminating low-grade and high-grade tumors. Quantification of H3 mRNA with real-time RT-PCR using the proposed pair of primers may supplement classic proliferative tests and predictive factors in brain astrocytomas

Profil ekspresji genów związanych z układem histaminergicznym wyznaczony techniką mikromacierzy oligonukleotydowych HG-U133A u kobiet z gruczolakorakiem endometrium

Introduction: Influence of histamine on tumor development remains obscure. The exact mechanism of this action is not known. Different data indicate high concentrations of histamine in tumor tissues, such as malignant melanoma, breast cancer, colon carcinoma, lymphomas and leukemia. To the best of our knowledge, the literature offers no reports about the role of histamine and of differences between expression patterns of histamine-related genes in endometrial cancer. Aim: The aim of the study was a comparative analysis of the gene expression profile involved with histaminergic system in endometrioid endometrial cancer in relation to histologically normal endometrium, and identification of differentiation genes whose transcriptional activity significantly differs in pathomorphological grades G1,G2, G3 of endometrial cancer as compared to the control group. Material and methods: Total RNA was extracted from 24 endometrial probes using TRIzol reagent (Invitrogen). The expression profile of 119 transcripts associated with histaminergic system was assessed using oligonucleotide microarrays of HG-U133A (Affymetrix). After normalization of the results with RMA Express software, differentiation genes were mined by the use of one-way analysis ANOVA and U Mann-Whitney test carried out in Gene Spring 11.5 software. Results: Among 119 transcripts, 14 expressed more than 1.5-fold change and were significant at pWstęp: Udział histaminy w patogenezie nowotworów stanowi kontrowersyjny temat, a dokładny mechanizm jej działania nie jest do końca poznany. Wysokie stężenie histaminy zostało stwierdzone w rożnych nowotworach, takich jak czerniak, rak piersi, rak jelita grubego oraz w chłoniakach i białaczkach. Dotychczas brak jest danych dotyczących roli histaminy oraz ekspresji genow związanych z aktywnością biologiczną histaminy w gruczolakoraku endometrium. Cel pracy: Celem pracy była analiza porównawcza profilu ekspresji genów związanych z układem histaminergicznym w wycinkach gruczolakoraka endometrium w odniesieniu do tkanek endometrium prawidłowego oraz wytypowanie genów, których aktywność transkrypcyjna istotnie rożni się w stopniu G1,G2, G3 gruczolakoraka w porównaniu do grupy kontrolnej. Materiał i metody: Ekstrakcję całkowitego RNA z 24 próbek endometrium przeprowadzono przy użyciu odczynnika TRIzol (Invitrogen) . Techniką mikromacierzy oligonukleotydowych HG-U133A (Affymetrix) wyznaczono profil ekspresji 119 transkryptów związanych z układem histaminergicznym. Po normalizacji wyników w programie RMA Express geny różnicujące typowano na podstawie analizy statystycznej przeprowadzonej w programie Gene Spring 11.5 testem jednoczynnikowej ANOVA oraz testem U Manna-Whitneya. Wyniki: Z grupy 119 transkryptów, dla 14 stwierdzono znamienną statystycznie różnicę ekspresji w endometrioidalnym raku endometrium w porównaniu do prawidłowego endometrium ( FC (log2) >1,5;

Ekspresja genów receptorów melatoninowych i genów związanych z regulacją ich aktywności w gruczolakoraku endometrium

Objectives: The aim of the study was to evaluate transcription activity of melatonin receptors and genes associated with regulation of their activity in endometrial adenocarcinoma to identify probable diagnostic and prognostic molecular markers. Material and methods: The material included endometrial adenocarcinoma tissue samples of histopathological grades G1, G2, G3, and normal endometrium. The molecular analysis was performed on 37 patient samples. Total RNA was extracted and used for the microarray HG-U133A analysis. Among 22 283 ID mRNA, only entities of genes associated with regulation of melatonin receptors activity were selected. qRT-PCR was employed for validation, what allowed to compare melatonin receptor genes activation in endometrial cancer tissues to the normal endometrium. Results: The results of the microarray experiments showed that only 18 ID mRNA were differential in endometrial cancer samples as compared to the control at p-value1.5. These genes were identified as differentially expressed in grade G2- ASMTL, GNA11, PER2, PTGDS and in grade G3- GNAI2, GNA11. Silencing of RGS4 encoding RGP4, which regulates signal transmission by G protein, was observed in all cancer groups, independently of the histopathological grade. Conclusions: The profile expression of genes associated with regulation of melatonin receptors activity was different and dependent on the histopathological grade of endometrial cancer and can be an additional diagnostic and prognostic marker. Statistically significant was the down-regulation of melatonin biosynthesis genes (ASMTL) and melatonin signal transmitters (GNA11, GNA12, RTGSCel pracy: Celem pracy była ocena aktywności transkrypcyjnej genów kodujących receptory melatoninowe oraz genów zaangażowanych w ich regulację w gruczolakoraku endometrium pod kątem poszukiwania molekularnych markerów diagnostycznych i prognostycznych tego nowotworu. Materiał i metody: Materiał do badań stanowiły wycinki gruczolakoraka endometrium typu endometrioidalnego w stopniu histologicznego zróżnicowania G1, G2, G3 oraz endometrium prawidłowego. Badania molekularne wykonano u 37 kobiet. Po izolacji RNA z tkanek techniką mikromacierzy oligonukleotydowych HG-U133A (Affymetrix) spośród 22 283 ID mRNA wyznaczono profil stężenia mRNA genów związanych z aktywnością receptorów melatoninowych. Metodą qRT-PCR oceniono zmiany aktywności transkrypcyjnej genów receptorów melatoninowych w wycinkach gruczolakoraka w porównaniu do endometrium prawidłowego. Wyniki: Analiza transkryptomów metodą mikromacierzy ekspresyjnych (Affymetrix) pozwoliła na wytypowanie 18 ID mRNA dla genów związanych z aktywnością receptorów melatoninowych różnicujących raka endometrium od kontroli, przy założeniu, że wartość p1,5. Wśród genów specyficznie różnicujących raka są: w stopniu G2- ASMTL, GNA11, PER2, PTGDS oraz w stopnia G3- GNA12, GNA11. Wyciszenie genu kodującego białko RGS4, regulujące czas i nasilenie przekazywania sygnału przy udziale białka G (negatywnego regulatora) obserwowano we wszystkich wycinkach raka, niezależnie od stopnia zróżnicowania histologicznego. Wnioski: Profil stężenia mRNA genów uczestniczących w regulacji aktywności biologicznej receptorów melatoninowych zależy od stopnia zróżnicowania histologicznego gruczolakoraka endometrium i może stanowić uzupełniający marker diagnostyczny i prognostyczny raka endometrium. Istotne statystycznie obniżenie ekspresji genów zaangażowanych w proces biosyntezy melatoniny (ASMTL) oraz genów kodujących białka związane z transdukcją sygnału receptorów melatoninowych (GNA11, GNA12, RTGS4, HTR2B i GNRH2), mogą stanowić obiecujące ogniwo w podjęciu nowych terapeutycznych rozwiązań w leczeniu gruczolakoraka endometrium

The role of epigenetics in the pathogenesis of melanoma

Epigenetics represents the mechanisms that influence the regulation and modification of the expression of genetic material not related to the alterations in DNA sequences. These mechanisms include both DNA methylation and histone modifications. In the present article, we review current views on the role of aberrations of DNA hyper- and hypomethylation processes and the acetylation of histones, associated with genes that control the cell cycle, cell differentiation, DNA repair, apoptosis, cell signaling, angiogenesis, metabolism of xenobiotics and invasion, in the pathogenesis of melanoma. In addition, new strategies for treatment of melanoma associated with epigenetics are presented.Przez pojęcie epigenetyka należy rozumieć mechanizmy wpływające na regulację i modyfi kację ekspresji materiału genetycznego, jednocześnie niezmieniające sekwencji nukleotydów. Mechanizmy te obejmują zarówno metylację DNA, jak i modyfikacje histonów. W artykule dokonano przeglądu aktualnych poglądów dotyczących zaburzeń procesów hiperihipometylacji DNA oraz acetylacji histonów w patogenezie czerniaka, związanych z genami kontrolującymi cykl komórkowy, różnicowanie, naprawę DNA, apoptozę, sygnalizację komórkową, angiogenezę, metabolizm ksenobiotyków i powstawanie przerzutów. Ponadto przedstawiono nowe strategie leczenia czerniaka związane z epigenetyką

Evaluation of Melanogenesis in A-375 Cells in the Presence of DMSO and Analysis of Pyrolytic Profile of Isolated Melanin

The increase of a skin malignant melanoma (melanoma malignum) incidence in the world has been observed in recent years. The tumour, especially in advanced stadium with metastases, is highly resistant to conventional treatment. One of the strategies is to modulate melanogenesis using chemical compounds. In this study, the processes of differentiation and melanogenesis induced by dimethylsulfoxide (DMSO) in human melanoma cells (A-375) were investigated. Natural melanin isolated from A-375 melanoma cell line treated with 0.3% DMSO was analyzed by pyrolysis-gas chromatography-mass spectrometry (Py-GC/MS) method. The products derived from pheomelanin have not been stated in the pyrolytic profile of analyzed melanin. Within all products derived from eumelanins, 1,2-benzenediol has been predominated. It has been shown that in the melanoma cells stimulated with 0.3% and 1% DMSO, the increase of transcriptional activity of the tyrosinase gene took place. It was accompanied by the rise of tyrosinase activity and an accumulation of melanin in the cells. The better knowledge about the structure of melanins can contribute to establish the uniform criteria of malignant melanoma morbidity risk

The Influence of Chain Microstructure of Biodegradable Copolyesters Obtained with Low-Toxic Zirconium Initiator to In Vitro Biocompatibility

Because of the wide use of biodegradable materials in tissue engineering, it is necessary to obtain biocompatible polymers with different mechanical and physical properties as well as degradation ratio. Novel co- and terpolymers of various composition and chain microstructure have been developed and applied for cell culture. The aim of this study was to evaluate the adhesion and proliferation of human chondrocytes to four biodegradable copolymers: lactide-coglycolide, lactide-co-ε-caprolactone, lactide-co-trimethylene carbonate, glycolide-co-ε-caprolactone, and one terpolymer glycolide-colactide-co-ε-caprolactone synthesized with the use of zirconium acetylacetonate as a nontoxic initiator. Chain microstructure of the copolymers was analyzed by means of 1H and 13C NMR spectroscopy and surface properties by AFM technique. Cell adhesion and proliferation were determined by CyQUANT Cell Proliferation Assay Kit. After 4 h the chondrocyte adhesion on the surface of studied materials was comparable to standard TCPS. Cell proliferation occurred on all the substrates; however, among the studied polymers poly(L-lactide-coglycolide) 85 : 15 that characterized the most blocky structure best supported cell growth. Chondrocytes retained the cell membrane integrity evaluated by the LDH release assay. As can be summarized from the results of the study, all the studied polymers are well tolerated by the cells that make them appropriate for human chondrocytes growth

Bioresorbable Nonwoven Patches as Taxane Delivery Systems for Prostate Cancer Treatment

Prostate cancer is the second most common cancer in males. In the case of locally advanced prostate cancer radical prostatectomy is one of the first-line therapy. However, recurrence after resection of the tumor can appear. Drug-eluting bioresorbable implants acting locally in the area of the tumor or the resection margins, that reduce the risk of recurrence would be advantageous. Electrospinning offers many benefits in terms of local delivery so fiber-forming polyesters and polyestercarbonates which are suitable to be drug-loaded were used in the study to obtain CTX or DTX-loaded electrospun patches for local delivery. After a fast verification step, patches based on the blend of poly(glycolide-ε-caprolactone) and poly(lactide-glycolide) as well as patches obtained with poly(lactide-glycolide- ε-caprolactone) were chosen for long-term study. After three months, 60% of the drug was released from (PGCL/PLGA) + CTX and it was selected for final, anticancer activity analysis with the use of PC-3 and DU145 cells to establish its therapeutic potential. CTX-loaded patches reduced cell growth to 53% and 31% respectively, as compared to drug-free patches. Extracts from drug-free patches showed excellent biocompatibility with the PC-3 cell line. Cabazitaxel-loaded bioresorbable patches are a promising drug delivery system for prostate cancer therapy