Study of polymorphisms in the TNF-alfa, TNF-beta/LT-alfa e pECAM-1/CD31 genes in osteosarcoma patients

Objetivo: Investigar uma possível relação entre os polimorfismos dos genes TNF-α, TNF-β/LT-α e PECAM-1/CD31, e parâmetros clínicos de pacientes portadores c osteossarcoma. Métodos: Foi coletado o sangue periférico de 80 pacientes portadores de osteossarcoma e de 160 indivíduos controle, pareados por sexo, idade e etnia. Após a extração de DNA do sangue periférico de pacientes e controles, foi realizada reação em cadeia da polimerase (PCR) para a amplificação dos fragmentos gênico estudados. 0 produto da PCR foi submetido à digestão, com as enzimas de restrição Ncol para os genes TNF-α (-308 da região promotora) and TNF-β (+252 do primeis íntron) genes and Alul for PECAM-1/CD31 (LEU-VAL no éxon 16). Os polimorfismo gênicos foram observados em gel de agarose 3 por cento. Resultados: Para o gene TNF-α,55 pacientes/130 controles foram homozigotos selvagem (TNF1/TNF1), 19 pacientes/25 controles heterozigotos (TNF1/TNF2), e 06 pacientes/05 controles foram homozigotos polimórfico (TNF2/TNF2). Para o gene TNF-β/LT-α, 09 pacientes/17 controles foram homozigotos selvagem (10,5Kb/10,5Kb), 37 pacientes/66 controles heterozigotos (5,5Kb/10,5Kb), e 34 pacientes/77 controles foram homozigotos polimórfico (5,5Kb/5,5Kb). Para o gene PECAM-1/CD31, 20 pacientes/44 controles fora homozigotos selvagem (L/L), 51 pacientes/67 heterozigotos (L/V), e 09 pacíentes/49 controles foram homozigotos polimórfico (V/V). Os alelos polimórficos TNF2 e 5,5kB, dos genes TNF-α e TNF-β/LT-α respectivamente, estão associados à produção de níveis mais altos de citocina e nesse estudo foram associados a uma maior suscetibilidade para o desenvolvimento de metástases e menor sobrevida livre de eventos, nos pacientes portadores de osteossarcoma. Nenhum dos genótipos do gene PECAM-1/CD31, pôde ser associado a qualquer característica facilitadora da transmigração endotelial das células de osteosarcoma. Conclusões: A freqüência genótipo (TNF2/TNF2) do gene TNF-α foi significantemente maior em um grupo de pacientes portadores de osteossarcoma, que desenvolveram metástase ao diagnóstico. 0 alelo polimórfico (5,5kB), do gene TNF-β/LT-α, em homozigoze apresentou associação com a menor sobrevida livre de eventos em pacientes portadores d osteossarcoma. Nossos achados não nos permitiriam associar nenhum alelo, do gene PECAM-1/CD31, aos aspectos de migração transendotelial que poderiam estar sendo adquiridos pelas células de osteossarcoma, por meio da molécula pecam-1/cd31.BV UNIFESP: Teses e dissertaçõe

Titulo em Ingles: Gene expression profile in the telomere maintenance and bone remodeling mechanisms in osteossarcoma

O osteossarcoma (OS) e o tumor osseo maligno mais comum entre crianca e adolescentes. Aproximadamente 15% a 20% dos pacientes com OS apresentam doenca metastatica ao diagnostico. Em relacao ao tratamento do OS, apesar do avanco nas ultimas decadas, o progresso do mesmo chegou a um plateu e o foco das pesquisas tem se voltado para um maior entendimento a respeito da biologia basica do OS. Decadas de estudos tem sido investidas para a melhor compreensao da genetica e biologia do OS, no entanto, ainda hoje a sua etiologia e desconhecida. O OS e caracterizado pelo alto nivel de instabilidade genomica, em particular uma subcategoria conhecida como instabilidade cromossomica (CIN). A manutencao de telomero e uma potencial fonte de instabilidade, tipica em OS, e esta relacionada a capacidade proliferativa ilimitada, que e uma marca registrada das celulas tumorais. Muitos estudos tem investigado os niveis de expressao de proteinas associadas ao telomero, em amostras tumorais, comparando-os com tecido nao tumorais, ou mesmo, com diferentes estagios do desenvolvimento neoplasico. Entre estas moleculas, TERF2 e um mecanismo chave, com importante propriedade anti-tumoral. Neste estudo nos comparamos os niveis de expressao genica de TERF2 em 30 amostras pareadas de OS, pre e pos-quimioterapia. Foi observado que no grupo de pacientes que nao apresentavam recidiva ou progressao de doenca, os niveis de TERF2 foram significantemente mais baixos nas amostras pos-quimioterapia. Nas ultimas decadas, aumento de interesse tem sido dedicado para a importancia do estroma na regulacao do comportamento da celula tumoral. Por isso, estudos que tem como alvo o microambiente tumoral osseo tem representado uma possibilidade de desenvolvimento de terapias para o OS. Assim como observado nas metastases osseas, tem sido sugerido um ciclo vicioso entre osteoclastos, celulas estromais osseas/osteoblastos e celulas tumorais durante a progressao dos tumores osseos primarios, incluindo o OS. Neste estudo, nos quantificamos a expressao de genes envolvidos com o mecanismo de remodelacao ossea em OS e observamos que o aumento de expressao do gene BMP7 e a diminuicao da expressao do COL11A2, em fragmentos tumorais de OS, foram correlacionados com melhor sobrevida dos pacientes. As alteracoes observadas nos niveis de expressao de genes envolvidos nos mecanismos de manutencao de telomeros e de remodelacao ossea, em amostras tumorais de osteossarcoma, foram correlacionadas com parametros clinico-patologicos dos pacientes e sugerem que esses mecanismos estao envolvidos com a biologia deste tumorBV UNIFESP: Teses e dissertaçõe

Tumor Dynamics in Response to Antiangiogenic Therapy with Oral Metronomic Topotecan and Pazopanib in Neuroblastoma Xenografts

Metronomic chemotherapy, combined with targeted antiangiogenic drugs, has demonstrated significant anticancer efficacy in various studies. Though, tumors do acquire resistance. Here, we have investigated the effect of prolonged therapy with oral metronomic topotecan and pazopanib on tumor behavior in a neuroblastoma mouse xenograft model. SK-N-BE(2) xenograft-bearing mice were treated with either of the following regimens (daily, orally): vehicle (control), 150 mg/kg pazopanib, 1.0 mg/kg topotecan, and combination of topotecan and pazopanib. Planned durations of treatment for each regimen were 28, 56, and 80 days or until the end point, after which animals were sacrificed. We found that only combination-treated animals survived until 80 days. Combination halted tumor growth for up to 50 days, after which gradual growth was observed. Unlike single agents, all three durations of combination significantly lowered microvessel densities compared to the control. However, the tumors treated with the combination for 56 and 80 days had higher pericyte coverage compared to control and those treated for 28 days. the proliferative and mitotic indices of combination-treated tumors were higher after 28 days of treatment and comparable after 56 days and 80 days of treatment compared to control. Immunohistochemistry, Western blot, and real-time polymerase chain reaction revealed that combination treatment increased the hypoxia and angiogenic expression. Immunohistochemistry for Glut-1 and hexokinase II expression revealed a metabolic switch toward elevated glycolysis in the combination-treated tumors. We conclude that prolonged combination therapy with metronomic topotecan and pazopanib demonstrates sustained antiangiogenic activity but also incurs resistance potentially mediated by elevated glycolysis.Queen Elizabeth II/Dr Dina Gordon Malkin Scholarship in Science and TechnologyJames Fund for Neuroblastoma ResearchHosp Sick Children, Div Hematol & Oncol, Dept Pediat, Toronto, ON M5G 1X8, CanadaUniv Toronto, Inst Med Sci, Toronto, ON, CanadaHosp Sick Children, Dept Pediat Lab Med, Toronto, ON M5G 1X8, CanadaUniversidade Federal de São Paulo, Oncol Sect, Dept Pediat, São Paulo, BrazilUniversidade Federal de São Paulo, Dept Morphol & Genet, Div Genet, São Paulo, BrazilUniversidade Federal de São Paulo, Oncol Sect, Dept Pediat, São Paulo, BrazilUniversidade Federal de São Paulo, Dept Morphol & Genet, Div Genet, São Paulo, BrazilWeb of Scienc

Modulation of AKT, CTNNB1, GLI1, KDM6A, KDM6B, NOTCH2, PTCH1 and Tert Genes Expression in Medulloblastoma Cell Lines Exposed to Drug Treatment

IOP GRAACC UNIFESP, Paediat Oncol Inst, Dept Paediat, Sao Paulo, BrazilUniv Fed Sao Paulo, Dept Morphol & Genet, Sao Paulo, BrazilUniv Fed Sao Paulo, Dept Neurol, Sao Paulo, BrazilUniv Fed Sao Paulo, Dept Pathol, Sao Paulo, BrazilUniv Fed Sao Paulo, Dept Clin & Expt Oncol, Sao Paulo, BrazilPaediatric Oncology Institute ‐ IOP/GRAACC/Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), Department of Paediatrics, Sao Paulo, BrazilUniversidade Federal de São Paulo (UNIFESP), Department of Morphology, Sao Paulo, BrazilUniversidade Federal de São Paulo (UNIFESP), Department of Neurology, Sao Paulo, BrazilUniversidade Federal de São Paulo (UNIFESP), Department of Pathology, Sao Paulo, BrazilFederal University of Sao Paulo, Department of Clinical and Experimental Oncology, Sao Paulo, BrazilWeb of Scienc

Expression Profiling Using a cDNA Array and Immunohistochemistry for the Extracellular Matrix Genes FN-1, ITGA-3, ITGB-5, MMP-2, and MMP-9 in Colorectal Carcinoma Progression and Dissemination

Colorectal cancer dissemination depends on extracellular matrix genes related to remodeling and degradation of the matrix structure. This investigation intended to evaluate the association between FN-1, ITGA-3, ITGB-5, MMP-2, and MMP-9 gene and protein expression levels in tumor tissue with clinical and histopathological neoplastic parameters of cancer dissemination. The expression associations between ECM molecules and selected epithelial markers EGFR, VEGF, Bcl2, P53, and KI-67 have also been examined in 114 patients with colorectal cancer who underwent primary tumor resection. Quantitative real-time PCR and immunohistochemistry tissue microarray methods were performed in samples from the primary tumors. The gene expression results showed that the ITGA-3 and ITGB-5 genes were overexpressed in tumors with lymph node and distant metastasis (III/IV-stage tumors compared with I/II tumors). The MMP-2 gene showed significant overexpression in mucinous type tumors, and MMP-9 was overexpressed in villous adenocarcinoma histologic type tumors. The ECM genes MMP9 and ITGA-3 have shown a significant expression correlation with EGFR epithelial marker. The overexpression of the matrix extracellular genes ITGA-3 and ITGB-5 is associated with advanced stage tumors, and the genes MMP-2 and MMP-9 are overexpressed in mucinous and villous adenocarcinoma type tumors, respectively. The epithelial marker EGFR overactivity has been shown to be associated with the ECM genes MMP-9 and ITGA-3 expression