SOX-11 regulates LINE-1 retrotransposon activity during neuronal differentiation

Activity of the human long interspersed nuclear elements-1 (LINE-1) retrotransposon occurs mainly in early embryonic development and during hippocampal neurogenesis. SOX-11, a transcription factor relevant to neuronal development, has unknown functions in the control of LINE-1 retrotransposon activity during neuronal differentiation. To study the dependence of LINE-1 activity on SOX-11 during neuronal differentiation, we induced differentiation of human SH-SY5Y neuroblastoma cells and adult adipose mesenchymal stem cells (hASCs) to a neuronal fate and found increased LINE-1 activity. We also show that SOX-11 protein binding to the LINE-1 promoter is higher in differentiating neuroblastoma cells, while knock-down of SOX-11 inhibits the induction of LINE-1 transcription in differentiating conditions. These results suggest that activation of LINE-1 retrotransposition during neuronal differentiation is mediated by SOX-11.Fil: Orqueda, Andres Javier. Hospital Italiano; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Gatti, Cintia Romina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Hospital Italiano; ArgentinaFil: Ogara, Maria Florencia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias; ArgentinaFil: Falzone, Tomas Luis. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Biología Celular y Neurociencia "Prof. Eduardo de Robertis". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Biología Celular y Neurociencia; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentin

Glucocorticoids uncover a critical role for ASH2L on BCL-X expression regulation in leukemia cells

Targeting the apoptosis machinery is a promising therapeutic approach in myeloid malignancies. BCL2L1 is a well-known glucocorticoid-responsive gene and a key apoptosis regulator that, when over-expressed, can contribute to tumor development, progression and therapeutic resistance. Moreover, synthetic glucocorticoids, like dexamethasone, are frequently used in the treatment of hematopoietic diseases due to its pro-apoptotic properties. We report here that the trithorax protein ASH2L, considered one of the core subunits of H3K4-specific MLL/SET methyltransferase complexes, contributes to anti-apoptotic BCL-XL over-expression and cell survival in patient-derived myeloid leukemia cells. We find that the unliganded glucocorticoid receptor (uGR) and ASH2L interact in a common protein complex through a chromatin looping determined by uGR and ASH2L binding to BCL2L1 specific +58 HRE and promoter region, respectively. Upon addition of dexamethasone, GR and ASH2L recruitment is reduced, BCL-XL expression diminishes and apoptosis is induced consequently. Overall, our findings indicate that uGR and ASH2L may act as key regulatory players of BCL- XL upregulation in AML cells.Fil: Rocha Viegas, Luciana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias; ArgentinaFil: Silbermins, Micaela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias; ArgentinaFil: Ogara, Maria Florencia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias; ArgentinaFil: Pellegrini, Joaquín Miguel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; ArgentinaFil: Nuñez, Sol Yanel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: García, Verónica Edith. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; ArgentinaFil: Vicent, Guillermo Pablo. Institut de Biologia Molecular de Barcelona (ibmb) ; Consejo Superior de Investigaciones Cientificas; EspañaFil: Pecci, Adali. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias; Argentin

Live Cell Imaging Unveils Multiple Domain Requirements for In Vivo Dimerization of the Glucocorticoid Receptor

Glucocorticoids are essential for life, but are also implicated in disease pathogenesis and may produce unwanted effects when given in high doses. Glucocorticoid receptor (GR) transcriptional activity and clinical outcome have been linked to its oligomerization state. Although a point mutation within the GR DNA-binding domain (GRdim mutant) has been reported as crucial for receptor dimerization and DNA binding, this assumption has recently been challenged. Here we have analyzed the GR oligomerization state in vivo using the number and brightness assay. Our results suggest a complete, reversible, and DNA-independent ligand-induced model for GR dimerization. We demonstrate that the GRdim forms dimers in vivo whereas adding another mutation in the ligand-binding domain (I634A) severely compromises homodimer formation. Contrary to dogma, no correlation between the GR monomeric/dimeric state and transcriptional activity was observed. Finally, the state of dimerization affected DNA binding only to a subset of GR binding sites. These results have major implications on future searches for therapeutic glucocorticoids with reduced side effects.Fil: Presman, Diego Martin. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; ArgentinaFil: Ogara, Maria Florencia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; ArgentinaFil: Stortz, Martin Dario. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; ArgentinaFil: Alvarez, Lautaro Damian. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Unidad de Microanálisis y Métodos Físicos en Química Orgánica. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Unidad de Microanálisis y Métodos Físicos en Química Orgánica; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Orgánica; ArgentinaFil: Pooley, John R.. National Cancer Institute. Laboratory of Receptor Biology and Gene Expression; Estados Unidos. University of Bristol; Reino UnidoFil: Schiltz, R. Louis. National Cancer Institute. Laboratory of Receptor Biology and Gene Expression; Estados UnidosFil: Grøntved, Lars. National Cancer Institute. Laboratory of Receptor Biology and Gene Expression; Estados UnidosFil: Johnson, Thomas A.. National Cancer Institute. Laboratory of Receptor Biology and Gene Expression; Estados UnidosFil: Mittelstadt, Paul R.. National Cancer Institute. Laboratory of Immune Cell Biology; Estados UnidosFil: Ashwell, Jonathan D.. National Cancer Institute. Laboratory of Immune Cell Biology; Estados UnidosFil: Ganesan, Sundar. National Cancer Institute. Laboratory of Receptor Biology and Gene Expression; Estados Unidos. National Institute of Allergy and Infectious Diseases; Estados UnidosFil: Burton, Gerardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Unidad de Microanálisis y Métodos Físicos en Química Orgánica. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Unidad de Microanálisis y Métodos Físicos en Química Orgánica; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Orgánica; ArgentinaFil: Levi, Valeria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; ArgentinaFil: Hager, Gordon L.. National Cancer Institute. Laboratory of Receptor Biology and Gene Expression; Estados UnidosFil: Pecci, Adali. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentin

Inhibitor of growth 1 (ING1) acts at early steps of multiple DNA repair pathways

ING proteins are tumor suppressors involved in the regulation of gene transcription, cell cycle arrest, apoptosis, and senescence. Here, we show that ING1b expression is upregulated by several DNA-damaging agents, in a p53-independent manner. ING1b stimulates DNA repair of a variety of DNA lesions requiring activation of multiple DNA repair pathways. Moreover, Ing1 −/− cells showed impaired genomic DNA repair after H2O2 and neocarzinostatin treatment and this defect was reverted by overexpression of ING1b. Two tumor-derived ING1 mutants failed to promote DNA repair highlighting the physiological importance of the integrity of the PHD domain for ING1b DNA repair activity and suggesting a role in the prevention of tumor progression. Ing−/− cells showed higher basal levels of γ-H2AX and, upon DNA damage, γ-H2AX increase was greater and with faster kinetics compared to wild-type cells. Chromatin relaxation by Trichostatin A led to an exacerbated damage signal in both types of cells, but this effect was dependent on Ing1 status, and more pronounced in wild-type cells. Our results suggest that ING1 acts at early stages of the DNA damage response activating a variety of repair mechanisms and that this function of ING1 is targeted in tumors.Fil: Ceruti, Julieta María. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica; Argentina; Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Química Biológica; Argentina;Fil: Ogara, Maria Florencia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Química Biológica; Argentina; Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica; Argentina;Fil: Menéndez, Camino. Instituto de Investigaciones Biomédicas ‘‘Alberto Sols’’; España;Fil: Palmero, Ignacio. Instituto de Investigaciones Biomédicas ‘‘Alberto Sols’’; España;Fil: Canepa, Eduardo Tomas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Química Biológica; Argentina; Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica; Argentina

p19INK4d is involved in the cellular senescence mechanism contributing to heterochromatin formation

Background: During evolution, organisms with renewable tissues have developed mechanisms to prevent tumorigenesis, including cellular senescence and apoptosis. Cellular senescence is characterized by a permanent cell cycle arrest triggered by both endogenous stress and exogenous stress. The p19INK4d, a member of the family of cyclin-dependent kinase inhibitors (INK4), plays an important role on cell cycle regulation and in the cellular DNA damage response. We hypothesize that p19INK4d is a potential factor involved in the onset and/or maintenance of the senescent state. Methods: Senescence was confirmed by measuring the cell cycle arrest and the senescence-associated β-galactosidase activity. Changes in p19INK4d expression and localization during senescence were determined by Western blot and immunofluorescence assays. Chromatin condensation was measured by microccocal nuclease digestion and histone salt extraction. Results: The data presented here show for the first time that p19INK4d expression is up-regulated by different types of senescence. Changes in senescence-associated hallmarks were driven by modulation of p19 expression indicating a direct link between p19INK4d induction and the establishment of cellular senescence. Following a senescence stimulus, p19INK4d translocates to the nucleus and tightly associates with chromatin. Moreover, reduced levels of p19INK4d impair senescence-related global genomic heterochromatinization. Analysis of p19INK4d mRNA and protein levels in tissues from differently aged mice revealed an up-regulation of p19INK4d that correlates with age. Conclusion: We propose that p19INK4d participates in the cellular mechanisms that trigger senescence by contributing to chromatin compaction. General significance: This study provides novel insights into the dynamics process of cellular senescence, a central tumor suppressive mechanism.Fil: Sonzogni, Silvina Veronica. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Ogara, Maria Florencia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Belluscio, Laura María. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Castillo, Daniela Susana. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Scassa, Maria Elida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Canepa, Eduardo Tomas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

INK4 proteins, a family of mammalian CDK inhibitors with novel biological functions

The cyclin D-Cdk4-6/INK4/Rb/E2F pathway plays a key role in controlling cell growth by integrating multiple mitogenic and antimitogenic stimuli. The members of INK4 family, comprising p16INK4a, p15INK4b, p18INK4c, and p19INK4d, block the progression of the cell cycle by binding to either Cdk4 or Cdk6 and inhibiting the action of cyclin D. These INK4 proteins share a similar structure dominated by several ankyrin repeats. Although they appear to be structurally redundant and equally potent as inhibitors, the INK4 family members are differentially expressed during mouse development. The striking diversity in the pattern of expression of INK4 genes suggested that this family of cell cycle inhibitors might have cell lineage-specific or tissue-specific functions. The INK4 proteins are commonly lost or inactivated by mutations in diverse types of cancer, and they represent established or candidate tumor suppressors. Apart from their capacity to arrest cells in the G1-phase of the cell cycle they have been shown to participate in an increasing number of cellular processes. Given their emerging roles in fundamental physiological as well as pathological processes, it is interesting to explore the diverse roles for the individual INK4 family members in different functions other than cell cycle regulation. Extensive studies, over the past few years, uncover the involvement of INK4 proteins in senescence, apoptosis, DNA repair, and multistep oncogenesis. We will focus the discussion here on these unexpected issues.Fil: Canepa, Eduardo Tomas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica. Laboratorio de Biología Molecular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Scassa, Maria Elida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica. Laboratorio de Biología Molecular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Ceruti, Julieta María. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica. Laboratorio de Biología Molecular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Marazita, Mariela Claudia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica. Laboratorio de Biología Molecular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Carcagno, Abel Luis. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica. Laboratorio de Biología Molecular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Sirkin, Pablo Federico. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica. Laboratorio de Biología Molecular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Ogara, Maria Florencia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica. Laboratorio de Biología Molecular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

Cholestenoic acid analogues as inverse agonists of the liver X receptors

Liver X Receptors (LXRs) are ligand dependent transcription factors activated by oxidized cholesterol metabolites (oxysterols) that play fundamental roles in the transcriptional control of lipid metabolism, cholesterol transport and modulation of inflammatory responses. In the last decade, LXRs have become attractive pharmacological targets for intervention in human metabolic diseases and thus, several efforts have concentrated on the development of synthetic analogues able to modulate LXR transcriptional response. In this sense, we have previously found that cholestenoic acid analogues with a modified side chain behave as LXR inverse agonists. To further investigate the structure-activity relationships and to explore how cholestenoic acid derivatives interact with the LXRs, we evaluated the LXR biological activity of new analogues containing a C24-C25 double bond. Furthermore, a microarray assay was performed to evaluate the recruitment of coregulators to recombinant LXR LBD upon ligand binding. Also, conventional and accelerated molecular dynamics simulations were applied to gain insight on the molecular determinants involved in the inverse agonism. As LXR inverse agonists emerge as very promising candidates to control LXR activity, the cholestenoic acid analogues here depicted constitute a new relevant steroidal scaffold to inhibit LXR action.Fil: Alvarez, Lautaro Damian. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Unidad de Microanálisis y Métodos Físicos en Química Orgánica. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Unidad de Microanálisis y Métodos Físicos en Química Orgánica; ArgentinaFil: Dansey, Maria Virginia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Unidad de Microanálisis y Métodos Físicos en Química Orgánica. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Unidad de Microanálisis y Métodos Físicos en Química Orgánica; ArgentinaFil: Ogara, Maria Florencia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias; ArgentinaFil: Peña, Carina Inés. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Unidad de Microanálisis y Métodos Físicos en Química Orgánica. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Unidad de Microanálisis y Métodos Físicos en Química Orgánica; ArgentinaFil: Houtman, René. Pamgene International Bv; Países BajosFil: Veleiro, Adriana Silvia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Unidad de Microanálisis y Métodos Físicos en Química Orgánica. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Unidad de Microanálisis y Métodos Físicos en Química Orgánica; ArgentinaFil: Pecci, Adali. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; ArgentinaFil: Burton, Gerardo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Orgánica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Unidad de Microanálisis y Métodos Físicos en Química Orgánica. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Unidad de Microanálisis y Métodos Físicos en Química Orgánica; Argentin

Nuclear translocation of p19INK4d in response to oxidative DNA damage promotes chromatin relaxation

DNA is continuously exposed to damaging agents that can lead to changes in the genetic information with adverse consequences. Nonetheless, eukaryotic cells have mechanisms such as the DNA damage response (DDR) to prevent genomic instability. The DNA of eukaryotic cells is packaged into nucleosomes, which fold the genome into highly condensed chromatin, but relatively little is known about the role of chromatin accessibility in DNA repair. p19INK4d, a cyclin-dependent kinase inhibitor, plays an important role in cell cycle regulation and cellular DDR. Extensive data indicate that p19INK4d is a critical factor in the maintenance of genomic integrity and cell survival. p19INK4d is upregulated by various genotoxics, improving the repair efficiency for a variety of DNA lesions. The evidence of p19INK4d translocation into the nucleus and its low sequence specificity in its interaction with DNA prompted us to hypothesize that p19INK4d plays a role at an early stage of cellular DDR. In the present study, we demonstrate that upon oxidative DNA damage, p19INK4d strongly binds to and relaxes chromatin. Furthermore, in vitro accessibility assays show that DNA is more accessible to a restriction enzyme when a chromatinized plasmid is incubated in the presence of a protein extract with high levels of p19INK4d. Nuclear protein extracts from cells overexpressing p19INK4d are better able to repair a chromatinized and damaged plasmid. These observations support the notion that p19INK4d would act as a chromatin accessibility factor that allows the access of the repair machinery to the DNA damage site.Fil: Sonzogni, Silvina Veronica. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica. Laboratorio de Biología Molecular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Ogara, Maria Florencia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica. Laboratorio de Biología Molecular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Castillo, Daniela Susana. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica. Laboratorio de Biología Molecular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Sirkin, Pablo Federico. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica. Laboratorio de Biología Molecular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Radicella, J. Pablo. Université Paris Diderot - Paris 7; FranciaFil: Canepa, Eduardo Tomas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica. Laboratorio de Biología Molecular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

E2F1 Transcription is Induced by Genotoxic Stress Through ATM/ATR Activation

E2F1, a member of the E2F family of transcription factors, plays a critical role in controlling both cell cycle progression and apoptotic cell death in response to DNA damage and oncogene activation. Following genotoxic stresses, E2F1 protein is stabilized by phosphorylation and acetylation driven to its accumulation. The aim of the present work was to examine whether the increase in E2F1 protein levels observed after DNA damage is only a reflection of an increase in E2F1 protein stability or is also the consequence of enhanced transcription of the E2F1 gene. The data presented here demonstrates that UV light and other genotoxics induce the transcription of E2F1 gene in an ATM/ATR dependent manner, which results in increasing E2F1 mRNA and protein levels. After genotoxic stress, transcription of cyclin E, an E2F1 target gene, was significantly induced. This induction was the result of two well-differentiated effects, one of them dependent on de novo protein synthesis and the other on the protein stabilization. Our results strongly support a transcriptional effect of DNA damaging agents on E2F1 expression. The results presented herein uncover a new mechanism involving E2F1 in response to genotoxic stress.Fil: Carcagno, Abel Luis. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Ogara, Maria Florencia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Sonzogni, Silvina Veronica. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Marazita, Mariela Claudia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Sirkin, Pablo Federico. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Ceruti, Julieta María. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Canepa, Eduardo Tomas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin