Evaluation of the relative expression of genes associated with adherence after different hours of co-culture between Streptococcus uberis and MAC-T cells

Streptococcus uberis is an environmental pathogen associated with subclinical and clinical IMI in both lactating and non-lactating cows. RC19 strain was isolated from a cow with subclinical mastitis, qualitatively classified as moderate biofilm producer in Todd Hewitt medium (THB), and it showed a high value of the adhered bacteria (CFU/ml). Hence, the aims of this study were (a) to determine ability to adhere to and internalize into epithelial cells MAC-T for 1, 2 and 3 h, (b) to evaluate the relative expression of adherence-associated genes from co-cultures of S. uberis with MAC-T cells at 1, 2 and 3 h. We hypothesized that upon contact with bovine mammary epithelial cells, S. uberis upregulates adherence-associated genes encoding adhesins, which enable it a higher adherence to and/or internalization into host cells. Four to six genes increased their R with regard to the control after initial contact with MAC-T cells (group 1) at 1, 2 and 3 h. The highest value of R was observed at 2 h after co-culture between RC19 and MAC-T cells.Fil: Fessia, Alumine Soledad. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Ciencias Exactas, Fisicoquímicas y Naturales. Departamento de Microbiología e Inmunología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba; ArgentinaFil: Odierno, Liliana Mónica. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Ciencias Exactas, Fisicoquímicas y Naturales. Departamento de Microbiología e Inmunología; Argentin

Comparison of phenotypic tests for detecting penicillin G resistance with presence of blaZ gene in Staphylococcus aureus isolated from bovine intramammary infections

Few studies have described the relationship between genotypic and phenotypic methods for detecting penicillin resistance in Staphylococcus aureus isolated from bovine intramammary infection (IMI). Six phenotypic methods for penicillinase detection were compared with a genotypic method testing the presence of the β-lactamase gene blaZ in Staph. aureus (n = 150) isolated from bovine IMI. Highest sensitivities and specificities were observed for disk diffusion (DD) (93 and 97·4%), minimum inhibitory concentration (MIC) (90·3 and 97·4%), Cefinase™ (85·9 and 97·4%) and Diatabs™ (85·7 and 98·7%). The estimated cut-off points estimated in the present study can be considered close to the ones indicated by CLSI (2013). The molecular detection of blaZ gene is the only method that may indicate the real or potential capacity of producing β-lactamase in Staph. aureus. Considering that from a clinical standpoint a false negative result from a phenotypic test is the most unfavourable situation, a combination of standard DD with Diatabs™ or Cefinase™ should be performed by routine mastitis laboratories to minimise false negative results.EEA RafaelaFil: Russi, Norma B.. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Maito, Julia. Lactodiagnóstico Sur; ArgentinaFil: Dieser, Silvana Andrea. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Ciencias Exactas, Fisicoquímicas y Naturales; ArgentinaFil: Renna, Maria Sol. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe. Instituto de Ciencias Veterinarias del Litoral. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Ciencias Veterinarias del Litoral; ArgentinaFil: Signorini, Marcelo. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Rafaela; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Camussone, Cecilia. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Rafaela; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Neder, Veronica Elizabeth. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Rafaela; ArgentinaFil: Pol, Martín. Lactodiagnóstico Sur; ArgentinaFil: Tirante, Liliana. Lactodiagnóstico Sur; ArgentinaFil: Odierno, Liliana Mónica. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Ciencias Exactas, Fisicoquímicas y Naturales. Departamento de Microbiología e Inmunología; ArgentinaFil: Calvinho, Luis Fernando. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Rafaela; Argentina. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentin

Potential factors involved in the early pathogenesis of Streptococcus uberis mastitis: a review

Bovine mastitis is an inflammation of the mammary gland, which could be the result of allergy, physical trauma, or invasion by pathogens as Streptococcus uberis. This pathogen is an environmental pathogen associated with subclinical and clinical intramammary infection (IMI) in both lactating and non-lactating cows, which can persist in the udder and cause a chronic infection in the mammary gland. In spite of the important economic losses and increased prevalence caused by S. uberis mastitis, virulence factors involved in bacterial colonization of mammary glands and the pathogenic mechanisms are not yet clear. In the last 30 years, several studies have defined adherence and internalization of S. uberis as the early stages in IMI. S. uberis adheres to and invades into mammary gland cells, and this ability has been observed in in vitro assays. Until now, these abilities have not been determined in vivo challenges since they have been difficult to study. Bacterial surface proteins are able to bind to extracellular matrix protein components such as fibronectin, collagen and laminin, as well as proteins in milk. These proteins play a role in adhesion to host cells and have been denominated microbial surface components recognizing adhesive matrix molecules (MSCRAMMs). This article aims to summarize our current knowledge on the most relevant properties of the potential factors involved in the early pathogenesis of S. uberis mastitis.Fil: Fessia, Alumine Soledad. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Ciencias Exactas, Fisicoquímicas y Naturales. Departamento de Microbiología e Inmunología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba; ArgentinaFil: Odierno, Liliana Mónica. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Ciencias Exactas, Fisicoquímicas y Naturales. Departamento de Microbiología e Inmunología; Argentin

Genotipificación de Staphylococcus aureus: Caracterización genotípica de Staphylococcus aureus aislados de mastitis bovina

La mastitis bovina es la enfermedad de mayor prevalencia y la de mayor impacto económico en la explotación lechera a nivel mundial. Staphylococcus aureus es el patógeno contagioso más prevalente en mastitis subclínica (MSC). El objetivo del presente trabajo fue caracterizar genotípicamente especies del género Stahylococcus coagulasa positivos, aislados de MSC en establecimientos de la cuenca lechera central de Argentina. Cuarenta y tres aislamientos fueron identificados como S. aureus por PCR-RFLP del gen groEL. De los perfiles genéticos obtenidos mediante PFGE de S. aureus se identificaron 2 pulsotipos diferentes (A, 76,7% y B, 23,2%). Se detectaron genes asociados a virulencia (nuc, clfA, coa, spa-Xr, spa-IgG, hla, hlb, cap5, cap8, icaA, icaD) mediante PCR, en los 32 S. aureus con pulsotipo A. Se identificaron 23 perfiles de virulencia en S. aureus, demostrando que aislamientos con diferentes perfiles de virulencia son capaces de causar MSC. Del análisis feno y genotípico de sensibilidad a antibióticos se demostró que la resistencia a β-lactámicos, macrólidos y lincosamidas no es un problema importante en los tambos en estudio.Fil: Dieser, Silvana Andrea. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Ciencias Exactas, Fisicoquímicas y Naturales. Departamento de Microbiología e Inmunología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba; ArgentinaFil: Odierno, Liliana Mónica. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Ciencias Exactas, Fisicoquímicas y Naturales. Departamento de Microbiología e Inmunología; Argentin

Streptococcus uberis en mastitis bovina. Obtención y caracterización de mutantes deficientes en los genes pauA y sua

La mastitis bovina es la enfermedad más frecuente y costosa para la explotación lechera. La mayoría de los casos son causados por bacterias de los géneros Staphylococcus y Streptococcus siendo Streptococcus uberis el principal patógeno ambiental. La ineficacia de las medidas tradicionales para disminuir la tasa de infección ha dirigido la búsqueda al desarrollo de vacunas para complementar las medidas de control existentes. Las proteínas PauA y SUAM podrían ser empleadas como antígenos para el desarrollo de una subunidad vacunal. El presente trabajo estuvo dirigido a la obtención de mutantes de S. uberisdeficientes en los genes pauA y sua mediante mutagénesis sitio-dirigiday la caracterización de dichas mutantes. Para la obtención de mutantes se empleó el uso combinado de dos tipos de vectores con replicación condicional derivados del pWV01: pORI280 y pG+host3. Fragmentos amplificados de los genes pauA y sua se clonaron en el plásmido pORI280 y se recuperaron en la cepa E. coli EC1000 RepA+. Los plásmidos recombinantes se emplearon para transformar la cepa S.uberis seleccionada y obtener mutantes. Se describe aquí una estrategia distinta en la obtención de mutantes en S. uberis.Fil: Balmaceda, Rocio Soledad. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Ciencias Exactas, Fisicoquímicas y Naturales. Departamento de Microbiología e Inmunología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba; ArgentinaFil: Odierno, Liliana Mónica. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Ciencias Exactas, Fisicoquímicas y Naturales. Departamento de Microbiología e Inmunología; ArgentinaFil: Reinoso, Elina Beatríz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba; Argentina. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Ciencias Exactas, Fisicoquímicas y Naturales. Departamento de Microbiología e Inmunología; Argentin

Identificación de Streptococcus uberis aislados de muestras de leche bovina

La mastitis es una enfermedad multifactorial originada por interacción entre el agente etiológico, el hospedador y el medio ambiente, ocasionando grandes pérdidas económicas. Streptococcus uberis es el principal patógeno estreptocóccico ambiental responsable de mastitis clínicas y subclínicas. Los métodos precisos y rentables para identificar los patógenos de la mastitis son importantes para el diagnóstico, la vigilancia y el control de esta enfermedad. El objetivo de este trabajo fue realizar una identificación preliminar de aislamientos de Strep. uberis basada en 4 pruebas bioquímicas y su posterior confirmación mediante la detección del gen pauA, utilizando la técnica de espectrometría de masas (MALDI-TOF) como prueba de oro. Las colonias de cocos Gram positivos en cadenas, catalasa negativos fueron identificadas Strep. uberis mediante MALDI-TOF. Todos los aislamientos fueron identificados presuntivamente como Strep. uberis en base a las pruebas bioquímicas de hidrólisis de hipurato, hidrólisis de esculina, crecimiento en cloruro de sodio 6,5% y en bilis. Posteriormente, se amplificó el gen pauA en los aislamientos para confirmar la pertenencia a la especie, detectando en 32 de los 34 (94,11%) aislamientos la presencia del amplicón del gen pauA. Los resultados del presente estudio demuestran que la combinación de cuatro pruebas convencionales para realizar una identificación preliminar y su confirmación mediante la amplificación del gen pauA mediante PCR permiten la identificación de Streptococcus uberis aislados de leche de casos de mastitis bovina.Fil: Fessia, Alumine Soledad. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Ciencias Exactas, Fisicoquímicas y Naturales. Departamento de Microbiología e Inmunología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Dieser, Silvana Andrea. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Ciencias Exactas, Fisicoquímicas y Naturales. Departamento de Microbiología e Inmunología; ArgentinaFil: Odierno, Liliana Mónica. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Ciencias Exactas, Fisicoquímicas y Naturales. Departamento de Microbiología e Inmunología; Argentin

Genotyping and study of adherence-related genes of Streptococcus uberis isolates from bovine mastitis

The aim of this study was to determine the presence, conservation, and distribution of 6 potential adherence genes and their relationship with diverse molecular types in 34 S. uberis isolated from bovine mastitis in Argentina. Pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) typing with SmaI was performed. The PCR for the detection of each gene, scpA, acdA, fbp, lbp, lmb, and sua was standardized. Samples of the amplification products were purified and sequenced. The PFGE patterns revealed the high level of heterogeneity of S. uberis, with 26 types of PFGE patterns. A high prevalence of scpA, fbp, lbp, lmb and acdA genes (100%?97%) was detected, whereas 79.41% of S. uberis harbored the sua gene. A high degree of similarity in the nucleotide and amino acid sequences of the 6 genes was observed. Our results showed that all genes are conserved and are present in most S. uberis isolates despite the wide clonal heterogeneity detected. This is the first study reporting an analysis of prevalence, and nucleotides and amino acids sequences of the potential adherence genes scpA, acdA, fbp, lbp, and lmb from S. uberis strains versus reported GenBank sequences, S. uberis 0140J and S. uberis NZ01.Fil: Fessia, Alumine Soledad. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Ciencias Exactas, Fisicoquímicas y Naturales. Departamento de Microbiología e Inmunología; ArgentinaFil: Dieser, Silvana Andrea. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Ciencias Exactas, Fisicoquímicas y Naturales. Departamento de Microbiología e Inmunología; ArgentinaFil: Raspanti, Claudia Gabriela. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Ciencias Exactas, Fisicoquímicas y Naturales. Departamento de Microbiología e Inmunología; ArgentinaFil: Odierno, Liliana Mónica. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Ciencias Exactas, Fisicoquímicas y Naturales. Departamento de Microbiología e Inmunología; Argentin

Predictores a nivel de vaca y de rodeo del estatus de salud mamaria en una muestra aleatoria de tambos de Argentina

The objective of this observational study was to evaluate the relationship between cow- and herd-level factors and cow udder health status, measured by composite milk sample somatic cell count (CSCC) in dairy herds from Córdoba, Argentina. The study population was dairy farms of a size of 100 to 250 cows; 48 randomly selected dairy herds were visited during 2007. Each visit involved a milking routine inspection, an interview to the dairyman and the collection of 45 milk composite samples from cows selected by a random systematic procedure. Parity and days in milk were recorded for each cow sampled. The somatic cell count was determined with a Somacount 300, and then a natural logarithmic transformation of CSCC values was used. A general linear mixed regression model looking at herd as a random effect was fitted. The mean of somatic cell count in 2,140 cows was 5.38 (SD=1.56). Dry cow therapy, milk strip and dairymen age as herd factors, lactation days and parity as cow factors, were associated with CSCC. The incremental effect on somatic cell count for cow attributes was greater than herd factors. This information will help to device herd programs to improve udder health in Argentina.Fil: Vissio, Claudina. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Agronomía y Veterinaria. Departamento de Patología Animal. Córdoba, ArgentinaFil: Vissio, Claudina. CONICET. ArgentinaFil: Richardet, Melina. CONICET. ArgentinaFil: Dieser, Silvana Andrea. CONICET. ArgentinaFil: Odierno, Liliana Mónica. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Ciencias Exactas, Físico-Química y Naturales. Departamento de Microbiología e Inmunología. Córdoba, ArgentinaFil: Larriestra, Alejandro José. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Agronomía y Veterinaria. Departamento de Patología Animal. Córdoba, ArgentinaEl objetivo del presente estudio fue evaluar la relación entre la salud mamaria, utilizando recuento celular somático de leche compuesta, y factores a nivel de vaca y rodeo en tambos de Córdoba, Argentina. La población de estudio fueron rodeos con 100 a 250 vacas en ordeñe. En 48 tambos seleccionados aleatoriamente y visitados durante el año 2007, se inspeccionó la rutina de ordeñe, se entrevistó al tambero y se colectaron en promedio 45 muestras compuestas de leche de vacas seleccionadas aleatoriamente, de estas se registró fecha y número de parto. El recuento celular somático fue determinado con equipo Somacount 300 y su valor transformado a logaritmo natural. Se ajustó un modelo de regresión lineal generalizado mixto con el rodeo como efecto aleatorio. La media de recuento celular somático en las 2.140 vacas seleccionadas fue 5,38 (Desvío estándar =1,56). Terapia al secado, despunte y edad del tambero, como factores de rodeo, días en lactancia y número de partos, como factores a nivel de vaca, fueron asociados al recuento celular somático. El efecto incremental para los factores a nivel de vaca fue mayor que para los factores de rodeo. La información provista podría contribuir a diseñar programas para mejorar la salud mamaria en Argentina

Cow and herd predictors of udder health status in a random sample of argentinian dairy herds

The objective of this observational study was to evaluate the relationship between cow- and herd-level factors and cow udder health status, measured by composite milk sample somatic cell count (CSCC) in dairy herds from Córdoba, Argentina. The study population was dairy farms of a size of 100 to 250 cows; 48 randomly selected dairy herds were visited during 2007. Each visit involved a milking routine inspection, an interview to the dairyman and the collection of 45 milk composite samples from cows selected by a random systematic procedure. Parity and days in milk were recorded for each cow sampled. The somatic cell count was determined with a Somacount 300, and then a natural logarithmic transformation of SCC values was used. A general linear mixed regression model looking at herd as a random effect was fitted. The mean of somatic cell count in 2,140 cows was 5.38 (SD=1.56). Dry cow therapy, milk strip and dairymen age as herd factors, lactation days and parity as cow factors, were associated with somatic cell count. The incremental effect on somatic cell count for cow attributes was greater than herd factors. This information will help to device herd programs to improve udder health in Argentina. Fil: Vissio, Claudina. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Agronomía y Veterinaria. Departamento de Patología Animal; ArgentinaFil: Richardet, Melina. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Agronomía y Veterinaria. Departamento de Patología Animal; ArgentinaFil: Dieser, Silvana Andrea. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Ciencias Exactas, Fisicoquímicas y Naturales. Departamento de Microbiología e Inmunología; ArgentinaFil: Odierno, Liliana Mónica. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Ciencias Exactas, Fisicoquímicas y Naturales. Departamento de Microbiología e Inmunología; ArgentinaFil: Larriestra, Alejandro Jose. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Agronomía y Veterinaria; Argentin

Relative expression of genes associated with adhesion to bovine mammary epithelial cells by Streptococcus uberis

Streptococcus uberis is one of the most prevalent environmental pathogens of bovine mastitis. Biofilm growth ability by S. uberis looks to depend first upon the adherence of cells to a surface. The S. uberis ability to adhere to mammary gland epithelia might provide an advantage to colonize the lactating mammary gland. The objectives of this study were (a) to select S.uberis strains according to their ability to form biofilm, (b) to determine adherence to and internalization into MAC-T cells and (c) to investigate the expression profile adherence genes in these S. uberis strains. For the assays, the MAC-T bovine mammary epithelial cell line was used. Relative expression of genes acdA, lmb, scpA, sua, fbp and lbp was quantified by RT-qPCR. We observed that the RC38 strain from clinical bovine mastitis showed in the six genes higher values than control in both conditions. While the strain with greater ability to adhere, from clinical mastitis and biofilm producer (RC29) evidenced higher values in group 1 (G1) (bacteria after the initial contact with MAC-T cells) and decrease in group 2 (G2) (both adhered and internalized bacteria) than control. Strains with a moderate or strong capacity for biofilm production showed significantly lower relative expression values in the G2. In all adherence associated genes, strain RC19 showed relative expression values incremented in G1, while in G2 decreased expression. In conclusion, we did not find a single profile of relative expression because the relative expression levels of each gene differed depending on the strain and the co-culture stage of S. uberis cells from which RNA was obtained.Fil: Fessia, Alumine Soledad. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Ciencias Exactas, Fisicoquímicas y Naturales. Departamento de Microbiología e Inmunología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Dieser, Silvana Andrea. Universidad Nacional de Río Cuarto; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Renna, Maria Sol. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe. Instituto de Ciencias Veterinarias del Litoral. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Ciencias Veterinarias del Litoral; ArgentinaFil: Raspanti, Claudia Gabriela. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Odierno, Liliana Mónica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin