Microanalysis of serotonin by high pressure liquid chromatography with electrochemical detection

L'analyse de la sérotonine (5-HT) par chromatographie liquide haute pression avec un détecteur électrochimique a été adaptée pour quantifier des quantités inférieures au picogramme. Nous démontrons que le potentiel d'oxydation de la sérotonine est étroitement lié au pH de la solution tampon utilisée comme phase éluente. Le comportement électrochimique de la 5-HT dans un tampon acétate à pH 4,00 ou dans un tampon phosphate à pH 6,80 permet une quantification de cette molécule jusqu'à des quantités de l'ordre de 10 (puissance -18) g. La quantité de courant d'oxydation est proportionnelle à la quantité de sérotonine analysée. La réponse électrochimique de la 5-HT est différente pour les très faibles quantités dosées dans la gamme des attogrammes et pour celles des picogrammes. Deux courbes sont enregistrées en fonction de la réponse électrochimique de la 5-HT : l'une pour des dosages dans la gamme des 10 (puissance -18) g et l'autre pour des dosages dans la gamme des picogrammes et au-delà. Dans la gamme de concentrations qui encadre le point de jonction des 2 courbes de calibration, le dosage de la 5-HT n'est pas fiable. La méthode a été appliquée pour doser la 5-HT sur des coupes à congélation de moelle épinière de rats. Cette méthode qui utilise une extraction organique en une étape pourrait ouvrir de nouvelles perspectives pour la quantification de la 5-HT dans des localisations précises du système nerveux central sans avoir recours à l'utilisation de molécules radiomarquées. (Résumé d'auteur

Drug-resistant epimastigotes of Trypanosoma cruzi and persistence of this phenotype after differentiation into amastigotes

Des formes épimastigotes du parasite #Trypanosoma cruzi ont été rendues résistantes au benznidazole en utilisant, in vitro, une pression médicamenteuse continue. Les parasites ont été sélectionnés en fonction de la caractérisation génétique antérieure de leurs loci isoenzymatiques. Tous les clones résistants sont capables de croître en culture à long terme en présence d'une concentration d'au moins 50 microM de benznidazole qui est la dose circulante de drogue chez un patient en cours de traitement. Le niveau le plus élevé de résistance atteint est 220 microM. Après la différenciation des formes épimastigotes en amastigotes, le niveau de résistance n'est pas altéré. La vitesse de croissance des formes résistantes d'épimastigotes et d'amastigotes est inférieure à celle des formes sauvages mais leur viabilité n'est pas affectée. Ces résultats peuvent avoir des conséquences à la fois pour entreprendre l'étude du phénotype résistant de clones du parasite #T. cruzi mais également pour suivre le devenir de ce phénotype résistant au cours du développement du cycle expérimental in vivo. (Résumé d'auteur

Intertwining threshold settings, biological data and database knowledge to optimize the selection of differentially expressed genes from microarray.

International audienceBACKGROUND: Many tools used to analyze microarrays in different conditions have been described. However, the integration of deregulated genes within coherent metabolic pathways is lacking. Currently no objective selection criterion based on biological functions exists to determine a threshold demonstrating that a gene is indeed differentially expressed. METHODOLOGY/PRINCIPAL FINDINGS: To improve transcriptomic analysis of microarrays, we propose a new statistical approach that takes into account biological parameters. We present an iterative method to optimise the selection of differentially expressed genes in two experimental conditions. The stringency level of gene selection was associated simultaneously with the p-value of expression variation and the occurrence rate parameter associated with the percentage of donors whose transcriptomic profile is similar. Our method intertwines stringency level settings, biological data and a knowledge database to highlight molecular interactions using networks and pathways. Analysis performed during iterations helped us to select the optimal threshold required for the most pertinent selection of differentially expressed genes. CONCLUSIONS/SIGNIFICANCE: We have applied this approach to the well documented mechanism of human macrophage response to lipopolysaccharide stimulation. We thus verified that our method was able to determine with the highest degree of accuracy the best threshold for selecting genes that are truly differentially expressed

1st INEXO Symposium: Alternative models in vitro, ex ovo and organisms: From research to applications in pathologies and aging

International audience123 gation and subsequent differentiation into complex tissue-like structures with reproducible ratios of neurons, astrocytes and oligodendrocytes. The generated neurons elicit spontaneous calcium transients and stimuli-induced neurotransmitter release. Whole-cell current-and-voltage clamp recordings show polarized neurons and voltage-dependent ion currents. Differentiated glial cells present astrocytic functions. Moreover, expression of genes involved in synaptic and ion transport machinery and the accumulation of neural proteoglycans suggests that this 3D differentiation strategy mimics the neural tissue microenvironment better than other differentiation methods. These models have applications as tools for preclinical assessment and in disease modelling. In the next session on reconstituted tissues and 3D bioprint-ing, Dr Christian Pellevoisin (Episkin Academy, Lyon, France) spoke about reconstructed skin, which is a powerful and highly versatile technology already used at all stages of cosmetic product development (toxicology, UV sensitivity, skin allergy, skin aging, skin microbiome, etc). The ability to reproduce several functions of human skin in vitro broadens the scope for industrial applications. He demonstrated that it is now possible to predict positive or negative effects of cosmetics early in their development process using in vitro skin models instead of animal testing. Reconstructed human skin is also used for screening and assessing the efficacy of new active ingredients, deciphering their mechanism of action, and optimizing the composition of formulations

Numerische und physikalische Modellierung von Ufererosion in Kiesflüssen

Bank erosion is a natural geomorphological process which affects a wide range of physical, ecological and socio-economic issues in the fluvial environment. Among the others, the impacts include loss of lands, damage to structure and infrastructures and dynamics of sediments, nutrients and contaminants. Hence, it is not surprising how riverbank retreat is closely related to the risk assessment. Despite many progresses have been made in understanding and modelling bank erosion, further investigations are needed to better understand processes occurring on riverbank totally or partially composed of relatively coarse sediments. Therefore, the general aim of this study is to give a contribution in understanding and modelling processes, with particular focusing on gravel banks. The study is organized to provide a general framework of analysis at different spatial scales, using as a reference study case the Cecina River (Pisa, Italy). At the catchment scale, riverbank processes were studied with the specific aim to identify the variability of bank features (geometry and composition), the dominant mechanisms of retreat and their spatial distribution. Different methods to predict the lateral instabilities were also undertaken in order to pinpoint causes and factors which control the occurrence of different mechanisms of retreat. At the reach scale, numerical models were employed with the aim of exploring methods for a combined analysis which couples different mechanisms of retreat, with particular focus on the inclusion of near-bank shear stresses. Moreover, based on results of the previous analyses, a framework for risk analysis due to bank erosion was developed. The objective of the analyses carried out at the bank scale, was to better understand the basic processes occurring in relatively coarse bank sediments, in particular the occurrence of mass instability in the absence of fluvial erosion. In order to address the objective, a physical model of a bank composed by gravel and sand was built, and some experiments simulating the behaviour of the bank during a hydrograph were carried out. The tests allowed for the identification of different mechanisms of failure and for the analysis of the factor affecting non cohesive bank stability.Die Ufererosion stellt einen natürlichen geomorphologischen Prozess in fluvialen Fließgewässern dar, der von großer Bedeutung für verschiedene ingenieurtechnische, ökologische und sozio-ökonomische Fragestellungen ist. Sie stellt einen wichtigen Prozess im Hinblick auf die Dynamik von Sedimenten, Nährstoffen und Schadstoffen in Fließgewässern dar und kann gleichzeitig aber auch zum Verlust von Land oder zur Gefährdung von Siedlungen und der Infrastruktur führen. Deshalb ist es nicht erstaunlich, dass der mit der Ufererosion verbundene Rückgang der Ufer in engem Zusammenhang mit der Risikobewertung steht. Bis heute führten zahlreiche Untersuchungen zu einem verbesserten Verständnis der relevanten physikalischen Prozesse und somit zu einer verbesserten Modellierung der Ufererosion. Allerdings existieren, speziell im Hinblick auf die Erosion von relativ grobkörnigen Ufern, immer noch zahlreiche offene Fragestellungen. Das Ziel der Arbeit bestand deshalb darin, zum besseren Verständnis und zur verbesserten Modellierung der Erosion von Ufern aus kiesigem Material beizutragen. Hierzu wurde anhand des Referenzgewässers des Cecina-Flusses in Italien ein übergeordneter Rahmen für die Analyse der relevanten Prozesse unter der Berücksichtigung verschiedener räumlicher Skalen geschaffen. Auf der Skala des Einzugsgebiets wurden die entsprechenden Prozesse mit dem spezifischen Ziel untersucht, die Variabilität der Ufereigenschaften (Geometrie und Zusammensetzung), die dominanten Mechanismen für den Rückgang der Ufer als auch deren räumliche Verteilung zu identifizieren. Mittels verschiedener Methoden zur Vorhersage lateraler Instabilitäten wurden die relevanten Faktoren und Prozesse aufgezeigt, welche die verschiedenen Mechanismen der Ufererosion kontrollieren. Auf der Flussabschnittsskala wurden anhand numerischer Modellierungen Methoden untersucht, die zu einer adäquaten kombinierten Analyse der verschiedenen Erosionsmechanismen herangezogen werden können. Ein spezielles Augenmerk wurde hierbei auf die Schubspannungen in Ufernähe gelegt und es wurde ein Rahmen für die Risikoanalyse im Hinblick auf die Ufererosion entwickelt. Auf der Uferskala stand die Untersuchung der relevanten physikalischen Prozesse im Vordergrund, welche die Erosion von grobkörnigen Ufersedimenten und insbesondere das Auftreten von Uferrutschungen dominieren, wenn kein Sedimenttransport im Gewässer vorliegt. Zu diesem Zweck wurde ein physikalisches Modell eines aus Kies und Sand bestehenden Ufers aufgebaut. Die Modelluntersuchungen, bei denen die Stabilität des Ufers infolge des Strömungsangriffs während eines Hochwasserereignisses unter Berücksichtigung der Ganglinie untersucht wurde, führten zur Identifikation verschiedener Versagensmechanismen und wurden zur Analyse von Faktoren herangezogen, die die Stabilität von nicht kohäsiven Ufern beeinflussen

The transcriptomic analytical level determines the human monocyte-derived macrophage response toward either the infectious agent or the host

Macrophages exhibit multifunctional activity and play a central role in the response toinfectious agents. It is commonly accepted that the plasticity of the response of macrophagesdepends on the type of stimuli. Here we re-evaluate whether the macrophage response isonly dependent on the stimulus. We analyzed the transcriptomic profile of monocyte-derivedmacrophages (MDMs) that were activated with several pathogens and multiple in vitrostimulations.The transcriptomic data were normalized using matched-pair analysis. Furtheranalysis showed a clustering association with (i) specific signatures of the infectious agentand its strategy as well as (ii) a preponderance of MDM overall responses related toindividuals. Currently, the null hypothesis H0 is that the innate MDM response is globallyassociated with the pathogen. Our results reveal that the global innate MDM response isintrinsically and predominantly associated with the individual. Thus, the hypothesis issupported or negated depending on the transcriptomic analytical level

Ganoderma lucidum : le champignon d’immortalité, nouvel allié dans la lutte contre la douleur induite lors de traitements anticancéreux

International audienceSi la phytothérapie a depuis longtemps acquis ses lettres de noblesse, le champignon demeure le parent pauvre dans le domaine dessoins naturels. Cependant, certaines espèces de champignons dont le ganoderme luisant (Ganoderma lucidum) sont utilisées depuis desmillénaires en Chine et au Japon comme aliments de longue vie et de jeunesse prolongée. Aujourd'hui, la mycothérapie est en pleinemutation, passant d'une médecine empirique à une science basée sur des preuves d’efficacité.Dans ce contexte, un nombre croissant d'études sont publiées chaque année afin de légitimer et de comprendre leurs utilisationstraditionnelles mais également de leur trouver de nouvelles propriétés pharmacologiques

Mushrooms: reservoir of biomolecules with potential therapeutic properties

International audienc

Mushrooms as natural resource of bioactive molecules

International audienc

Differential Gene Expression in Benznidazole-Resistant Trypanosoma cruzi Parasites

We analyzed the differential gene expression among representative Trypanosoma cruzi stocks in relation to benznidazole exposures using a random differentially expressed sequences (RADES) technique. Studies were carried out with drug pressure both at the natural susceptibility level of the wild-type parasite (50% inhibitory concentration for the wild type) and at different resistance levels. The pattern of differential gene expression performed with resistant stocks was compared to the population structure of this parasite, established by random amplified polymorphic DNA analysis and multilocus enzyme electrophoresis. A RADES band polymorphism was observed, and over- or underexpression was linked to the resistance level of the stock. The analysis of RADES bands suggested that different products may be involved in benznidazole resistance mechanisms. No significant association was found between phylogenetic clustering and benznidazole susceptibility. Benznidazole resistance may involve several mechanisms, depending on the level of drug exposure