The Role of DmCatD, a Cathepsin D-Like Peptidase, and Acid Phosphatase in the Process of Follicular Atresia in Dipetalogaster maxima (Hemiptera: Reduviidae), a Vector of Chagas' Disease

In this work, we have investigated the involvement of DmCatD, a cathepsin D-like peptidase, and acid phosphatase in the process of follicular atresia of Dipetalogaster maxima, a hematophagous insect vector of Chagas' disease. For the studies, fat bodies, ovaries and hemolymph were sampled from anautogenous females at representative days of the reproductive cycle: pre-vitellogenesis, vitellogenesis as well as early and late atresia. Real time PCR (qPCR) and western blot assays showed that DmCatD was expressed in fat bodies and ovaries at all reproductive stages, being the expression of its active form significantly higher at the atretic stages. In hemolymph samples, only the immunoreactive band compatible with pro-DmCatD was observed by western blot. Acid phosphatase activity in ovarian tissues significantly increased during follicular atresia in comparison to pre-vitellogenesis and vitellogenesis. A further enzyme characterization with inhibitors showed that the high levels of acid phosphatase activity in atretic ovaries corresponded mainly to a tyrosine phosphatase. Immunofluorescence assays demonstrated that DmCatD and tyrosine phosphatase were associated with yolk bodies in vitellogenic follicles, while in atretic stages they displayed a different cellular distribution. DmCatD and tyrosine phosphatase partially co-localized with vitellin. Moreover, their interaction was supported by FRET analysis. In vitro assays using homogenates of atretic ovaries as the enzyme source and enzyme inhibitors demonstrated that DmCatD, together with a tyrosine phosphatase, were necessary to promote the degradation of vitellin. Taken together, the results strongly suggested that both acid hydrolases play a central role in early vitellin proteolysis during the process of follicular atresia.Fil: Leyria, Jimena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Fruttero, Leonardo Luis. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Nazar, Magalí. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Canavoso, Lilian Etelvina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentin

S-nitrosylation of NF-kB p65 inhibits TSH-induced Na+/I- symporter expression

Nitric oxide (NO) is a ubiquitous signaling molecule involved in a wide variety of cellular physiological processes. In thyroid cells, NO-synthase III-endogenously produced NO reduces thyrotropin (TSH)-stimulated thyroid specific gene expression, suggesting a potential autocrine role of NO in modulating thyroid function. Further studies indicate that NO induces thyroid dedifferentiation, as NO donors repress TSH-stimulated I- uptake. Here, we investigated the molecular mechanism underlying the NO inhibited Na+/I- Symporter (NIS)-mediated I- uptake in thyroid cells. We showed that NO donors reduce I- uptake in a concentration-dependent manner, which correlates with decreased NIS protein expression. NO-reduced I- uptake results from transcriptional repression of NIS gene rather than post-translational modifications reducing functional NIS expression at the plasma membrane. We observed that NO donors repress TSH-induced NIS gene expression by reducing the transcriptional activity of the NF-κB subunit p65. NO-promoted p65 S-nitrosylation reduces p65-mediated transactivation of the NIS promoter in response to TSH stimulation. Overall, our data are consistent with the notion that NO plays a role as an inhibitory signal to counterbalance TSH-stimulated NF-κB activation, thus modulating thyroid hormone biosynthesis.Fil: Nicola, Juan Pablo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Peyret, Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Nazar, Magalí. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Romero, Jorge Miguel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba; ArgentinaFil: Lucero, Ariel Maximiliano. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Montesinos, Maria del Mar. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Bocco, Jose Luis. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Pellizas, Claudia Gabriela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Masini, Ana María. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentin

Functional toll-like receptor 4 overexpression in papillary thyroid cancer by MAPK/ERK-induced ETS1 transcriptional activity

Emerging evidence suggests that unregulated Toll-like receptors (TLRs) signaling promotes tumor survival signals, thus favoring tumor progression. Here, the mechanism underlying TLR4 overexpression in papillary thyroid carcinomas (PTCs) mainly harboring the BRAFV600E mutation was studied. TLR4 was over expressed in PTCs compared to non-neoplastic thyroid tissue. Moreover, paired clinical specimens of primary PTC and its lymph node metastasis showed a significant up regulation of TLR4 levels in the metastatic tissues. In agreement, conditional BRAFV600E expression in normal rat thyroid cells and mouse thyroid tissue up regulated TLR4 expression levels. Furthermore, functional TLR4 expression was demonstrated in PTC cells by increased NF-κB transcriptional activity in response to the exogenous TLR4-agonist lipopolysaccharide (LPS). Of note, The Cancer Genome Atlas (TCGA) data analysis revealed that BRAFV600E-positive tumors with high TLR4 expression were associated with shorter disease-free survival. Transcriptomic data analysis indicated a positive correlation between TLR4 expression levels and MAPK/ERK signaling activation. Consistently, chemical blockade of MAPK/ERK signaling abrogated BRAFV600E-induced TLR4 expression. A detailed study of the TLR4 promoter revealed a critical MAPK/ERK-sensitive Ets binding-site involved in BRAFV600E responsiveness. Subsequent investigation revealed that the Ets-binding factor ETS1 is critical for BRAFV600E-induced MAPK/ERK signaling-dependent TLR4 gene expression. Together, these data indicate that functional TLR4 over expression in PTCs is a consequence of thyroid tumor-oncogenic driver dysregulation of MAPK/ERK/ETS1 signaling.Fil: Peyret, Victoria. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba; ArgentinaFil: Nazar, Magalí. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Martín, Mariano. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba; ArgentinaFil: Quintar, Amado Alfredo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; ArgentinaFil: Fernandez, Elmer Andres. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba; Argentina. Area de Ciencias Agrarias, Ingeniería, Ciencias Biológicas y de la Salud de la Universidad Católica de Córdoba; ArgentinaFil: Geysels, Romina Celeste. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Fuziwara, Cesar. Universidade de Sao Paulo; BrasilFil: Montesinos, Maria del Mar. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Maldonado, Cristina Alicia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud. Universidad Nacional de Córdoba. Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud; ArgentinaFil: Santisteban, Pilar. Consejo Superior de Investigaciones Científicas. Universidad Autónoma de Madrid. Centro de Investigación Biomédica en Red Cáncer; EspañaFil: Kimura, Edna T.. Universidade de Sao Paulo; BrasilFil: Pellizas, Claudia Gabriela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Nicola, Juan Pablo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Masini, Ana María. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentin

Diplomatura Diseño y Gestión de Emprendimientos de Turismo Rural : estrategias de agregado de valor a la producción agropecuaria

Trabajos Finales de Integración y Transferencia, Cohorte Cerro Colorado (Diplomatura Diseño y Gestión de Emprendimientos de Turismo Rural) -- UNC- Facultad de Ciencias Agropecuarias, 2019En esta compilación se presentan una selección de cinco (5) trabajos realizados por los alumnos de la Cohorte de la Diplomatura desarrollada en la localidad de Cerro Colorado que involucra a proyectos en los Departamentos Río Seco, Sobremonte y Tulumba (Noroeste de la provincia de Córdoba, Argentina). El primer proyecto “Tulumba y sus sendas” trata de los diferentes circuitos turísticos en la Villa de Tulumba (Departamento Tulumba); el segundo, denominado “Vivencias camperas” propone vivenciar un día de campo en el establecimiento El Bordo situado en el Departamento Río Seco. El tercer proyecto plantea una “Raíz red turística” que comprende las localidades de Caminiaga, Cerro Colorado, Pozo Nuevo, San Francisco del Chañar y Villa María de Río Seco (Departamentos Río Seco y Sobremonte). “La huella de Don Ata”, en cuarto lugar, plantea un proyecto educativo relacionado al senderismo en la Comuna del Cerro Colorado. Finalmente, en “Soy el Mapa”, los autores proyectan el diseño de un cartel de interpretación ordenado en un solo punto que permita mostrar al turista los lugares relevantes del Cerro Colorado

Biossíntese, armazenamento e secreção dos hormônios tireoidianos

En humanos la tiroides es el órgano más grande con exclusiva función endócrina y la única glándula endocrina capaz de almacenar sus productos hormonales en una localización extracelular. La biosíntesis y secreción de hormonas tiroideas es producto de la organización de las células foliculares tiroideas en unidades funcionales denominadas folículos tiroideos. Los folículos están constituidos por una capa simple de células epiteliales polarizadas que forman una estructura esférica y contienen en su cavidad central o lumen un material homogéneo denominado coloide. La polaridad del epitelio tiroideo es fundamental para la biosíntesis hormonal al condicionar la localización del sistema responsable de la captación de ioduro en la región externa del folículo tiroideo en contacto con los capilares sanguíneos (membrana basal), mientras que las proteínas involucradas en la producción hormonal se encuentran en la región interna en contacto con el coloide (membrana apical). La membrana apical presenta microvellosidades que se extienden hacia el coloide incrementando la superficie de la célula folicular en contacto con el coloide. Las hormonas tiroideas cumplen una función imprescindible en el crecimiento corporal, así como en el desarrollo y maduración del sistema nervioso de mamíferos durante el período fetal y neonatal. En humanos, el déficit de hormonas tiroideas en las primeras etapas de la vida conlleva a la disminución del crecimiento y retardo mental. En el organismo adulto, su principal efecto es mantener la estabilidad metabólica en la mayoría de los tejidos.Fil: Nicola, Juan Pablo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Nazar, Magalí. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Masini, Ana María. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentin

Thyroid peroxidase gene expression is induced by lipopolysaccharide involving nuclear factor (NF)-κB p65 subunit phosphorylation

Thyroid peroxidase (TPO), a tissue-specific enzyme expressed in differentiated thyroid follicular cells, is a major antigen that has been linked to autoimmune thyroid disease. We have previously reported the functional expression of the lipopolysaccharide (LPS) receptor Toll-like receptor 4 on thyroid follicular cells. Here we investigated the effect of LPS in TPO expression and analyzed the mechanisms involved. We found a dose-dependent enhancement of TSH-induced TPO expression in response to LPS stimulation. EMSAs demonstrated that LPS treatment increased thyroid transcription factor-1 and -2 binding to the B and Z regions of TPO promoter, respectively. Moreover, LPS increased TSH-stimulated TPO promoter activity. Using bioinformatic analysis, we identified a conserved binding site for transcription nuclear factor-κB (NF-κB) in the TPO promoter. Chemical inhibition of NF-κB signaling and site-directed mutagenesis of the identified κB-cis-acting element abolished LPS stimulation. Furthermore, chromatin immunoprecipitation assays confirmed that TPO constitutes a novel NF-κB p65 subunit target gene in response to LPS. Additionally, our results indicate that p65 phosphorylation of serine 536 constitutes an essential step in the p65-dependent, LPS-induced transcriptional expression of TPO. In conclusion, here we demonstrated that LPS increases TPO expression, suggesting a novel mechanism involved in the regulation of a major thyroid autoantigen. Our results provide new insights into the potential effects of infectious processes on thyroid homeostasis. Copyright © 2012 by The Endocrine Society.Fil: Nazar, Magalí. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Nicola, Juan Pablo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Velez, Maria Laura. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Pellizas, Claudia Gabriela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Masini, Ana María. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentin

Protein expression and activity levels of DmCatD in the hemolymph of <i>D</i>. <i>maxima</i>.

<p><b>(A)</b>, western blot was performed to evaluate the expression of pro-DmCatD and DmCatD. The hemolymph was obtained at pre-vitellogenesis, vitellogenesis, early and late follicular atresia (lanes 2–5 respectively, 40 μg each). In lane 1, 0.2 μg of whole cell lysate of MCF7 was used as a positive control. The arrow indicates pro-DmCatD (~43 kDa). The western blot shown was a representative experiment of three independent assays. <b>(B)</b>, specific activity of DmCatD in the hemolymph. Assays were performed as stated in Materials and Methods. Results expressed as relative units of fluorescence (RUF)/μg protein/min are the mean ± SEM (n = 3). *<i>P</i><0.05 vs. pre-vitellogenesis, early and late atresia.</p

Interaction of DmCatD and tyrosine phosphatase with vitellin in yolk bodies of vitellogenic oocytes.

<p>Vitellogenic ovaries were processed for immunofluorescence as stated in Materials and Methods. Images at the left of the panels <b>(A)</b> and <b>(B)</b> show the Z-projections calculated from maximum intensity signals derived from all focal planes of the image stacks for vitellin (Vt, green) and DmCatD or tyrosine phosphatase (both red). Donor images (Vt signal) pre- and post-photobleaching of the corresponding acceptors, DmCatD and tyrosine phosphatase, show FRET. The white boxes indicate the pre- and post-bleaching areas. Each of the arrows point out the increase in the fluorescence intensity of Vt. A gray scale image pseudocolored with the color gradient is shown within each image to enhance the visualization of the increase in the fluorescence intenstity. Similar results were obtained in 3 separate experiments. Bars: 5 μm for image on the left panel (B) and 2 μm for the other pictures.</p

Protein expression and activity of DmCatD in fat bodies and ovaries of <i>D</i>. <i>maxima</i>.

<p>The expression of pro-DmCatD and DmCatD was analyzed by western blot (A and C, top panels). Homogenates of fat body <b>(A)</b> and ovarian tissue <b>(C)</b> obtained at pre-vitellogenesis, vitellogenesis, early and late follicular atresia (lanes 2–5 respectively, 40 μg each) were probed with a polyclonal anti-cathepsin D antibody. As a positive control, 0.2 μg of whole cell lysate of MCF7 was loaded in the lane 1. The arrows indicate pro-DmCatD (~43 kDa) and DmCatD (~25 kDa). The western blots shown were a representative experiment of three independent assays. Densitometric analyses of three independent western blots (A and C, bottom panels) were performed taking into account the intensity of the bands compatible with pro-DmCatD or DmCatD detected in each lane and the amount of total proteins loaded and stained with Ponceau S. Results are expressed as mean ± SEM (n = 3). (A), *<i>P</i><0.01 vs. pre-vitellogenesis, early and late atresia; (C), *<i>P</i><0.001 vs. vitellogenesis, early and late atresia; **<i>P</i><0.001 vs. vitellogenesis and early atresia. <b>(B</b> and <b>D)</b>, activity of DmCatD in fat bodies (B) and ovarian homogenates (D) throughout the reproductive cycle. The reactions were performed using 10–30 μg of protein homogenates according to conditions stated in Material and Methods. Results are expressed as relative units of fluorescence (RUF)/μg protein/min and are the mean ± SEM (n = 3). (B), *<i>P</i><0.05 vs. pre-vitellogenesis, early and late atresia. (D), *<i>P</i><0.001 vs. pre-vitellogenesis and vitellogenesis.</p

Activity of acid phosphatase in the ovarian tissue of <i>D</i>. <i>maxima</i>.

<p><b>(A)</b>, the enzymatic assays were performed using 30 μg of ovarian homogenates from females at representative days of the reproductive cycle and measuring the amount of <i>p</i>-nitrophenol (<i>p</i>NP). The results are expressed as specific activity (nmol of <i>p</i>NP/mg protein/min) and each point represents the mean ± SEM (n = 3). *<i>P</i><0.05 vs. pre-vitellogenesis, vitellogenesis and early atresia; **<i>P</i><0.001 vs. pre-vitellogenesis and vitellogenesis. <b>(B),</b> the effect on acid phosphatase activity of several inhibitors was analyzed by pre-incubating protein homogenates of ovaries at early atresia with Na₃VO₄ (inhibitor of tyrosine phosphatase), NaF (inhibitor of serine/threonine phosphatase) or Na⁺/K⁺ tartrate (a broad spectrum phosphatase inhibitor). *<i>P</i><0.05 vs. Na₃VO₄ and Na⁺/K⁺ tartrate; **<i>P</i><0.001 vs. Na₃VO₄, NaF and Na⁺/K⁺ tartrate. Specific activity of tyrosine phosphatase <b>(C)</b> and serine/threonine phosphatase <b>(D)</b> in ovarian homogenates from females at early and late atresia. The assays were performed using specific phosphopeptides as substrates either in the presence or in the absence of NaF, Na₃VO₄ or Na⁺/K⁺ tartrate. The specific activities are expressed as pmol phosphate/μg protein/min. Each point represents the mean ± SEM (n = 3). (C), activity in early atresia: **<i>P</i><0.001 vs. Na₃VO₄ and Na⁺/K⁺ tartrate; activity in late atresia: *<i>P</i><0.05 vs. Na₃VO₄ and Na⁺/K⁺ tartrate. (D), activity in early atresia: *<i>P</i><0.01 vs. NaF and Na⁺/K⁺ tartrate; activity in late atresia: *<i>P</i><0.01 vs. NaF and Na⁺/K⁺ tartrate; **<i>P</i><0.001 vs. NaF and Na⁺/K⁺ tartrate.</p