Simultaneous monitoring of independent gene expression patterns in two types of cocultured fibroblasts with different color-emitting luciferases

<p>Abstract</p> <p>Background</p> <p>Luciferase assay systems enable the real-time monitoring of gene expression in living cells. We have developed a dual-color luciferase assay system in which the expression of multiple genes can be tracked simultaneously using green- and red-emitting beetle luciferases. We have applied the system to monitoring independent gene expressions in two types of cocultured fibroblasts in real time.</p> <p>Results</p> <p>Two Rat-1 cell lines were established that stably express either green- or red-emitting luciferases under the control of the <it>mBmal1 </it>promoter, a canonical clock gene. We cocultured these cell lines, and gene expression profiles in both were monitored simultaneously. The circadian rhythms of these cell lines are independent, oscillating following their intrinsic circadian phases, even when cocultured. Furthermore, the independent rhythms were synchronized by medium change as an external stimulus.</p> <p>Conclusion</p> <p>Using this system, we successfully monitored independent gene expression patterns in two lines of cocultured fibroblasts.</p

Balanced Scorecard aplicada na gestão de pessoas da Empresa Solver Ambiental e Florestal Engenharia

Orientador : Egon Walter WildauerMonografia (especialização) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Sociais Aplicadas, Curso de Especialização MBA em Inteligência de NegóciosInclui referênciasResumo : Os sistemas tradicionais de gestão geralmente se restringem às medições dos aspectos financeiros da organização, reduzindo sua capacidade de criar um valor econômico futuro, devido às medidas financeiras não detectarem os elementos que podem proporcionar bons ou maus resultados para o futuro das organizações, permanecendo os planos estratégicos carentes das ações diárias. Desta forma, a Gestão de Pessoas (GRH) passa a exercer uma importância estratégica para a consecução dos objetivos e metas das Empresas e, diante dessa relevancia, o presente trabalho objetivou a aplicação do Balanced Scorecard (BSC) como ferramenta de GRH e simular a sua implantação na Empresa Solver Ambiental e Florestal Engenharia, sediada em Curitiba, Paraná, Brasil. A ferramenta de BSC é apresentada em uma ordem a ser seguida para sua implementação. O sucesso da implementação do BSC depende, fundamentalmente, das ações estratégicas, do engajamento e da motivação de todos os colaboradores da Empresa, sendo a GRH um importante parceiro neste processo. Os Indicadores de Desempenho também foram formulados e servirão de apoio na decisão estratégica da Empres

Utilização do Sistema Indonesio de Corte Seletivo para simular a produção continua de Araucaria angustifolia (Bert.) O. Ktze em floresta primaria

O objetivo deste estudo foi o de simular um manejo em regime de rendimento sustentado, com base no Sistema Indonésio de Corte Seletivo, visando somente as araucárias. Foram definidos previamente três níveis de corte. No nível 1 simulou-se o corte dos DAPcc = 40 cm, no nível 2, simulou-se o corte dos DAPcc = 50 cm e no nível 3 os DAPcc = 60 cm. Para estimativa do incremento dismétrico das araucárias, foram utilizadas amostras de rolos de incremento. Após a medição dos anéis anuais de crescimento, ajustou-se a equação de crescimento de Prodan. Para estimativa do incremento em diâmetro sem casca foi realizada a derivada primeira da equação de crescimento, em relação á variável idade. Na estimativa do incremento em volume sem casca, além da derivada primeira da equação de crescimento, foram necessárias os ajustes das equações: estimativa do diâmetro com e sem casca, relação hipsométrica e a equação de volume sem casca para árvore individual obtida do INVENTARIO (1990). A estimativa do incremento anual em volume sem casca foi realizada através de dois métodos: uma com base na araucária de diâmetro médio de todas as classes (geral) e outra com base no diâmetro médio de cada classe diamétrica. O ciclo de corte foi estimado para os três niveis de exploração, adicionando-se o incremento diamétrico anual á árvore média da última classe remanescente, até atingir o diâmetro médio da última classe diamétrica antes da exploração. Os resultados dos ajustes para a estimativa do crescimento diamétrico apresentaram coeficientes de determinação superiores a 75 % com erro padrão da estimativa entre 22,26 % a 29,65 %. A melhor equação hipsométrica ajustada (Hc=b1*LnD) apresentou o ajuste de 98,19 % e erro de 13,24 %. O incremento anual em volume sem casca com base na araucária média de todas as classes diamétricas foi de 2,68 m3/ha e o incremento com base na araucária média de cada classe diamétrica foi de 2,62 m3/ha. O volume de corte do nível 1 foi de 60,90 m3/ha; nível 2 foi de 33,00 m3/ha e o nível 3 de 14,41 m3/ha, para a exploração em 1993. O ciclo de corte estimado para o nível 1 foi de 206 anos, para o nível 2, 108 anos e para o nível 3 foi de 57 anos. Com base nos resultados obtidos, conclui-se que: apesar de tratar-se de araucária nativa com diferentes idades e posição sociológica, a equação de crescimento de Prodan ajustou-se satisfatoriamente. A equação hipsométrica utilizada ajustou-se bem. A diferença da estimativa do incremento anual em volume entre o 1º e o 2º método foi de 2,24 %, sendo considerado melhor o segundo método

多価不飽和脂肪酸を２位に結合するホスファチジルコリンの炭素アナローグの合成

Carbon analogues of Phosphatidylcholines having linoleic or arachidonic acid at the 2-position were synthesized. The synthetic route involves conversion of the polyunsaturated fatty acid iodination. The derivatives were converted to diols by LiAIH4 reduction and submitted to lipase-catalyzed monostearoylation in isopropylether. The mono-ester was converted to phoshatidylcholines by the usual phosphodiester synthesis.自然界に広く存在するホスフォリパーゼA2はグリセロリン脂質の2位のエステル結合を選択的に切断する酵素であり,消化,アラキドン酸カスケードの起動,リン脂質過酸化物の代謝等,生理作用に広く関わっている。本研究ではホスフォリパーゼA2の基質ミメテイックとしてホスファチジルコリンの2位エステル結合が炭素-炭素結合に置き換わった化合物をアラキドン酸とステアリン酸を出発原料としてリパーゼ触媒によるアシル化反応及び有機化学反応によって合成した

Coactivation of the CLOCK-BMAL1 complex by CBP mediates resetting of the circadian clock

The transcription factor CLOCK-BMAL1 is a core component of the molecular clock machinery that drives circadian gene expression and physiology in mammals. Recently, we reported that this heterodimeric transcription factor functions as a signaling molecule in response to the resetting stimuli via the Ca(2+)-dependent protein kinase C pathway. Here, we demonstrate that the CREB-binding protein (CBP) plays a key role in rapid activation of the CLOCK-BMAL1 heterodimer that leads to phase resetting of the circadian clock. Under physiological conditions, a bimolecular fluorescence complementation (BiFC) assay revealed that CLOCK and BMAL1 dimerize in the cytoplasm and subsequently translocate into the nucleus in response to serum stimuli (mean time duration was 29.2 minutes and mean velocity 0.7 mu m/minute). Concomitantly, BMAL1 rapidly recruited CBP on Per1 promoter E-box, but not p300 (a functional analog of CBP), in the discrete nuclear foci. However, recruitment of CBP by cAMP/Ca(2+) response element-binding (CREB) protein on CRE was not markedly increased upon delivery of the resetting stimuli. Furthermore, overexpression of CBP greatly potentiated the CLOCK-BMAL1-mediated Per1 transcription, and this effect was completely abolished by site-directed mutation of E-box elements, but not by the mutation of CRE in the Per1 promoter. Furthermore, molecular knockdown of CBP severely dampened circadian oscillation of clock gene expression triggered by the resetting stimuli. These findings suggest that CBP recruitment by BMAL1 mediates acute transactivation of CLOCK-BMAL1, thereby inducing immediate-early Per1 transcription and phase resetting of the circadian clock

Determination of ADAMTS13 and Its Clinical Significance for ADAMTS13 Supplementation Therapy to Improve the Survival of Patients with Decompensated Liver Cirrhosis

The liver plays a central role in hemostasis by synthesizing clotting factors, coagulation inhibitors, and fibrinolytic proteins. Liver cirrhosis (LC), therefore, impacts on both primary and secondary hemostatic mechanisms. ADAMTS13 is a metalloproteinase, produced exclusively in hepatic stellate cells, and specifically cleaves unusually large von Willebrand factor multimers (UL-VWFM). Deficiency of ADAMTS13 results in accumulation of UL-VWFM, which induces platelet clumping or thrombi under high shear stress, followed by sinusoidal microcirculatory disturbances and subsequent progression of liver injuries, eventually leading to multiorgan failure. The marked imbalance between decreased ADAMTS13 activity (ADAMTS13 : AC) and increased production of UL-VWFM indicating a high-risk state of platelet microthrombi formation was closely related to functional liver capacity, hepatic encephalopathy, hepatorenal syndrome, and intractable ascites in advanced LC. Some end-stage LC patients with extremely low ADAMTS13 : AC and its IgG inhibitor may reflect conditions similar to thrombotic thrombocytopenic purpura (TTP) or may reflect “subclinical TTP.” Hence, cirrhotic patients with severe to moderate deficiency of ADAMTS13 : AC may be candidates for FFP infusion as a source of ADAMTS13 or for recombinant ADAMTS13 supplementation. Such treatments may improve the survival of patients with decompensated LC

Purification and characterization of a [3Fe-4S] [4Fe-4S] type ferredoxin from hyperthermophilic archaeon, Pyrobaculum islandicum

金沢大学理工研究域自然システム学系A ferredoxin was purfied from the hyperthermophilic archaeon, Pyrobaculum islandicum. EPR spectra and metal content analyses suggested that the ferredoxin molecule contained one [3Fe-4S] and one [4Fe-4S] cluster. The ferredoxin was rapidly reduced by 8-oxoglutarate: ferredoxin oxidoreductase purfied from P. islandicum, indicating that it functions physiologically as an electron sink for the redox enzymes participating in glycolytic metabolism. Furthermore, the amino acid sequence of the P. islandicum ferredoxin was compared with those of several other bacterial ferredoxins

Membranous Fibrosis of the Lung

Membranous fibrosis of the lung depicts a morphological feature of the fibrous tissue which covers alveolar duct walls. Membranous sheets of fibrous tissue usually bridge and obstruct the mouths of alveoli, and attach only at the tips of the septa; i.e., the alveolar duct walls, and often provoke a collapse of alveolar spaces. There seem to be two types of membranous fibrosis. The first type is, in fact, a fibrous replacement of pre-existing hyaline membrane, while the second is a de novo formation of membranous fibrous tissue which has little or no preceding hyaline membrane. We consider that both of these changes result from damage to the alveolar duct walls and may constitute forms of the fibrosing alveolar ductitis syndrome. Recognition of this type of fibrosis gives us a better understanding of the morphogenesis of so-called diffuse alveolar damage