Molecular and biological characterization of low-pathogenic H9N2 influenza viruses isolated in Israel

All Israeli H9N2-strain viruses used in the present study were subdivided among three groups: groups A and B viruses contained – in all eight segments – 90658/00-like and 1304/03-like sequences, respectively; Group C comprised viruses isolated in 2006-2010, which contained four 1304/03-like segments and four 1525/06-like segments. Molecular analysis revealed that most of the isolates had an RSSR motif at the cleavage site of haemagglutinin. Most of the viruses had an haemagglutinin with L216 typical of humans, and internal proteins associated with the avian host specificity. The studied viruses infected the majority of the directly inoculated birds. Exposure to the virus with full8length PB1-F2 protein for 24 h caused destruction of mitochondria and cell death in cultures of human macrophages, and this effect was not associated with activation of protein p53. A virus with truncated PB1-F2 protein exhibited no destructive effect on mitochondria, but induced enhanced production of pro-apoptotic P53 proteinВсі ізраїльські віруси штаму H9N2, що використовуються в цьому дослідженні, були розділені на групи: віруси груп А і В містили відповідно - у всіх восьми сегментах - 90658/00-подібні і 1304/03-подібні послідовності; група C складалася з вірусів, виділених у 2006-2010 роках, які містили чотири 1304/03-подібних сегмента і чотири 1525/06-подібних сегмента. Молекулярний аналіз показав, що більшість штамів мали RSSR-мотив в сайті розщеплення гемаглютиніну. Більшість вірусів містили гемаглютинін з типовим для людей L216, і, крім того, внутрішні білки, характерні для птахів. Вивчені віруси заразили більшість щеплених птахів безпосередньо. Вплив вірусу з повнорозмірною PB1-F2 білка протягом 24 год викликав руйнування мітохондрій і загибель клітин в культурах людських макрофагів, і цей ефект не був пов’язаний з активацією білка р53. Вірус з усіченою ланцюгом білка PB1-F2 не чинив руйнівного впливу на мітохондрії, але індукував підвищений сінтез проапоптотического білка Р53.Всі ізраїльські віруси штаму H9N2, що використовуються в цьому дослідженні, були розділені на групи: віруси груп А і В містили відповідно - у всіх восьми сегментах - 90658/00-подібні і 1304/03-подібні послідовності; група C складалася з вірусів, виділених у 2006-2010 роках, які містили чотири 1304/03-подібних сегмента і чотири 1525/06-подібних сегмента. Молекулярний аналіз показав, що більшість штамів мали RSSR-мотив в сайті розщеплення гемаглютиніну. Більшість вірусів містили гемаглютинін з типовим для людей L216, і, крім того, внутрішні білки, характерні для птахів. Вивчені віруси заразили більшість щеплених птахів безпосередньо. Вплив вірусу з повнорозмірною PB1-F2 білка протягом 24 год викликав руйнування мітохондрій і загибель клітин в культурах людських макрофагів, і цей ефект не був пов’язаний з активацією білка р53. Вірус з усіченою ланцюгом білка PB1-F2 не чинив руйнівного впливу на мітохондрії, але індукував підвищений сінтез проапоптотического білка Р53

Immunobiological Properties of <i>Francisella tularensis</i> 15/10 Strain with Deleted recA Gene

Deletion of recA gene in Francisella tularensis 15/10 genome leads to the increase in its sensitivity to ultraviolet irradiation, reduction of the homologous recombination capacity, and a slight decline of virulence for mice. Efficacy of Francisella tularensis 15/10ΔrecA reproduction within microphage-like cells, its resistance to normal rabbit serum, and protective properties on the mouse model of tularemia are the same as in original Francisella tularensis 15/10

INTERACTION OF BIORESORBABLE COMPOSITE IMPLANTS MADE BY SOLUTION BLOW SPINNING WITH TISSUES

This work represents the results of the study of the surrounding tissues reaction to the implantation of bioresorbable implants formed by the solution blow spinning from polylactic acid and ultrafine calcium phosphate powders, depending on the time and place of implantation. Using scanning electron microscopy it is shown that implants formed from randomly interwoven fibers have interconnected open porosity. It was established that the addition of calcium phosphate ultrafine powders does not cause changes in the formed implants structure. Histological investigation of tissue specimens from the implantation site revealed a high ability of created implants to successful integration with surrounding tissue after 15 days from the moment of implantation. Complete or partial implant resorption with substitution by own tissues was registered at 90 days after implantation. It was established that implantation of composite bioresorbable implants on the ilium bone stimulates the osteogenic process better than the implantation on skull bone within the same period. It was defined that scarification of the outer cortical plate in implant contact points with bone tissue increases the implants ability to stimulate osteogenic process. It was shown that the composite implants filled with calcium phosphate dibasic dehydrate in ultrafine powder form have the largest ability to stimulate osteogenesis

Study of the UV Irradiation and Nalidicsic Acid Effect on the RecA-protein Induction in <i>Francisella tularensis</i> 15/10 Cells

Studied is the UV irradiation and nalidicsic acid effect on the RecA-protein synthesis in Francisella tularensis 15/10 cells. Obtained is the specific murine serum to the recombinant RecA-protein. The results of immunoblotting with this specific serum demonstrate that the amount of RecA-protein in Francisella tularensis 15/10 cells is not increased after the exposure to these damaging factors

Epizootic Activity of Natural and Anthropourgic Tularemia Foci in the Territory of the Jewish Autonomous Region and the Khabarovsk City Outskirts during the Amur River Flood

Widespread epizootiological investigations were performed to estimate the influence of the Amur River flood on the epizootic activity of tularemia in small rodent populations within natural and anthropourgic foci. Determined were the numbers of the rodent-carriers and epizootic activity of tularemia infection in the forest type, lowland, flood-swamped as well as anthropourgic foci. The capture and enumeration of the rodents was conducted using Gero rat traps. Tested were water and silt samples, rodent nests, pellets and excrements of carnivorous mammals. Blood sera of healthy persons living within the focal territory were examined to reveal the immune-competent cohort. Collected materials were analyzed using bacteriological, genetic diagnostic and serological methods. Extremely high numbers of the carriers were registered in the lowland meadow-field and anthropourgic foci adjacent to the flooded areas. The signs of tularemia epizootic process were observed in the meadow-field and flood-swamped foci. Failed to reveal during the period of high water were the epizooties in the forest foci

Характеристика клинических, лабораторных и иммунологических проявлений у пациентов с болезнью Шёгрена, ассоциированной с антицентромерными антителами

Objective: to study clinical and laboratory features in patients with anticentromere antibody (ACA)-positive SjЪgren's disease (SD), as well as the sensitivity of different methods for determination of ACA, and to elaborate an algorithm for differential diagnosis in ACA-positive patients.Patients and methods. The V.A. Nasonova Research Institute of Rheumatology followed up 136 patients who were highly positive for ACA. The investigators used the 2001 Russian criteria for the diagnosis for SD; the 2013 ACR/European League Against Rheumatism (EULAR) criteria for that of scleroderma systematica (SDS); the guidelines of the American Association for the Study of Liver Diseases, the Russian Gastroenterological Association, and the Russian Society for the Study of the Liver for that of primary biliary cholangitis (PBC)/biliary duct epitheliitis in the presence of SD. Lymphomas were diagnosed by biopsies of affected organs according to the WHO classification. SD was diagnosed in 119 patients; SDS in 49 cases (37 with SDS concurrent with SD and 12 with isolated SDS), PBC/biliary duct epitheliitis in 23 (all cases with PBC/biliary duct epitheliitis concurrent with SD and/or SDS); 5 patients were excluded from the investigation. Further analysis included 131 ACA-positive patients. The patients were divided into three groups: SD (n=82 or 62.6%); SD+SDS (n=37 or 28.24%); SDS (n=12 or 9.16%).Results and discussion. Autoantibodies to centromere peptide (CENP) A and CENP-B in the same titers were detected in all ACA-positive patients, regardless of diagnosis. Comparative analysis of three patient groups revealed no statistically significant differences in the frequency of laboratory deviations. The signs characteristic of classical SD (rheumatoid factor (RF)), anti-Ro and anti-La antibodies, leukopenia, higher ESR values, hypergammaglobulinemia, and elevated IgG/IgA levels) were found in a small proportion of patients. The frequency and severity of glandular manifestations did not differ in SD and SD + SDS. PBC/biliary duct epitheliitis was present in 17.5% of ACA-positive patients (in most antimitochondrial antibody-positive cases); no statistically significant differences in its frequency were found between the groups. Other extraglandular manifestations in SD and SD + SDS were identified in a smaller number of patients. All sclerodermic spectrum manifestations were more common in SD and SD + SDS than in BS. Pulmonary arterial hypertension was not diagnosed in any patient from the SD group. MALT lymphomas were detected in 19 ACA-positive patients. Those were present only in BS patients and absent in the SDS group. MALT lymphomas developed in the first 10 years after the onset of SD. The transformation of MALT lymphoma into diffuse large B-cell lymphoma was observed in 2 patients. The main signs of lymphomas in SD patients were persistent parotid salivary gland enlargement, decreased levels of complement C4 and peripheral blood CD19+ cells, as well as cryoglobulinemic vasculitis, serum monoclonal secretion, lymphoid infiltration in the minor salivary glands (a focus score of &gt;4), and severe damage to the salivary and lacrimal glands.Conclusion. ACA-associated SD is an independent disease subtype characterized by an increased risk for SDS, PBC, and MALT lymphomas and by a low frequency of the systemic manifestations and laboratory signs characteristic of classical SD. Regardless of the detected type of antibodies and the presence or absence of extraglandular manifestations, damage to the salivary and lacrimal glands progresses in SD, which often leads to lymphomas; therefore, the therapy that may prevent this complication should be initiated as soon as possible after SD diagnosis. The lymphoproliferation signs identified in this investigation should be taken into account in all ACA-positive patients with SD for the early diagnosis of lymphoid tumors before therapy is prescribed. An algorithm for differential diagnosis in seropositivity for ACA is presented. Determination of autoantibodies to CENP-A and CENP-B does not allow the differential diagnosis in ACA-positive patients.Цель исследования – изучение клинических и лабораторных особенностей у пациентов с болезнью Шёгрена (БШ), позитивных по антицентромерным антителам (АЦА), а также чувствительности разных методов определения АЦА, разработка алгоритма дифференциальной диагностики у АЦА-позитивных пациентов.Пациенты и методы. В ФГБНУ «Научно-исследовательский институт ревматологии им. В.А. Насоновой» под наблюдением находилось 136 высокопозитивных по АЦА пациентов. Для диагностики БШ использовались отечественные критерии 2001 г., системной склеродермии (ССД) – критерии ACR/EULAR 2013 г., первичного билиарного холангита (ПБХ)/эпителиита билиарных протоков в рамках БШ – рекомендации Американской ассоциации по изучению заболеваний печени, Российской гастроэнтерологической ассоциации и Российского общества по изучению печени. Диагностика лимфом осуществлялась на основании исследований биоптатов пораженных органов согласно классификации ВОЗ. БШ диагностирована у 119 пациентов, ССД – у 49 (у 37 в сочетании с БШ и у 12 – изолированная ССД), ПБХ/эпителиит билиарных протоков – у 23 (во всех случаях в сочетании с БШ и/или ССД), 5 пациентов были исключены из исследования. В дальнейший анализ вошел 131 АЦА-позитивный пациент. Больные были разделены на три группы: БШ (n=82, или 62,6%); БШ + ССД (n=37, или 28,24%); ССД (n=12, или 9,16%).Результаты и обсуждение. Аутоантитела к центромерному пептиду (CENP) A и CENP-B в одинаковых титрах выявлены у всех АЦА-позитивных пациентов независимо от диагноза. При сравнительном анализе трех групп пациентов статистически значимых различий в частоте лабораторных отклонений не выявлено. Характерные для классической БШ признаки – ревматоидный фактор (РФ), антитела к Ro и La, лейкопения, повышение СОЭ, гипергаммаглобулинемия, увеличение уровня IgG/IgA – обнаружены у незначительной части пациентов. Частота и выраженность железистых проявлений при БШ и БШ + ССД не различались. ПБХ/эпителиит билиарных протоков имелся у 17,5% АЦА-позитивных пациентов (в большинстве случаев позитивных по антимитохондриальным антителам), статистически значимых различий в его частоте между группами не обнаружено. Другие внежелезистые проявления при БШ и БШ + ССД выявлены у меньшего числа пациентов. Все проявления склеродермического спектра при ССД и БШ + ССД встречались чаще, чем при БШ. Легочная артериальная гипертензия не диагностирована ни у одного пациента из группы БШ. MALT-лимфомы обнаружены у 19 АЦА-позитивных пациентов. Они встречались только у пациентов с БШ, в группе ССД лимфом не было. MALT-лимфомы развивались в первые 10 лет после начала БШ. Трансформация MALT-лимфомы в диффузную В-клеточную крупноклеточную лимфому наблюдалась у 2 пациентов. Основными признаками лимфом у пациентов с БШ были: стойкое увеличение околоушных слюнных желез, снижение уровня С4-компонента комплемента, а также CD19+ клеток в периферической крови, криоглобулинемический васкулит, моноклональная секреция в сыворотке крови, лимфоидная инфильтрация малых слюнных желез &gt;4 фокуса, а также тяжелое поражение слюнных и слезных желез.Заключение. БШ, ассоциированная с АЦА, является самостоятельным субтипом заболевания, отличающимся повышенным риском возникновения ССД, ПБХ и MALT-лимфом, низкой частотой характерных для классической БШ системных проявлений и лабораторных признаков. При БШ, независимо от выявляемого типа антител и наличия или отсутствия внежелезистых проявлений, прогрессирует поражение слюнных и слезных желез, что нередко приводит к развитию лимфом, поэтому терапия, способная предотвратить возникновение данного осложнения, должна быть инициирована сразу после установления диагноза БШ. Выявленные в настоящем исследовании признаки лимфопролиферации должны учитываться у всех АЦА-позитивных пациентов с БШ для ранней диагностики лимфоидных опухолей до назначения терапии. Приведен алгоритм дифференциальной диагностики при серопозитивности по АЦА. Определение аутоантител к CENP-A и CENP-B не позволяет осуществлять дифференциальную диагностику у АЦА-позитивных пациентов

DIAGNOSTIC VALUE OF SEROLOGICAL MARKERS OF RHEUMATOID ARTHRITIS

Rheumatoid arthritis (RA) is a classic autoimmune disease associated with the production of wide range of autoantibodies, and their detection has diagnostic and prognostic implication. The objective of this study was to estimate the diagnostic value of antibodies against modified citrullinated vimentin (AMCV) and nuclear antigen RA33 of the IgA rheumatoid factor (RF) versus the value of routinely used profile of autoantibodies in diagnostic work-up of RA. Material and methods. 253 patients with RA prehistory of varying duration were included into the study group. The control group was comprised of 92 patients, including patients with seronegative spondyloarthropathies and diffuse connective tissue diseases, as well as sex and age matched healthy controls. Serum levels of IgM and IgA RF, antibodies against cyclic citrullinated peptide (ACCP), ACMV, anti-keratin antibodies (AKA), antibodies against RA33 antigen (ARA33) and antinuclear factor (ANF) were measured in all patients and controls. Results and discussion. Diagnostic sensitivity of AMCV equaled 78%, ACCP — 77%, IgM RF — 71%, IgA RF — 43%, AKA — 43%, ARA33 — 31% and ANF — 31%. All anti-citrullinic antibodies (AKA, ACCP, ACMV) were significantly more commonly associated with IgM RF. Among RF and ACCP seronegative patients ACMV were found in 24% cases with 20 IU/Ml detection threshold, and in 21% — with 30 IU/Ml, allowing to increase diagnostic specificity of the test up to 91% with the increment of diagnostic threshold. Incidence of ARA33 was not significantly different among the RF and ACCP positive or negative subgroups, thus making ARA33 an independent RA marker. Specificity of this marker was 87,9%, thus making it inferior to RF and ACCP by a composite of diagnostic characteristics. Conclusions. Integrated measurement of ACMV and ARA33 is a rational approach at the second stage of serologic testing work-up in suspected cases of RA onset, when initial RF and ACCP tests were negative