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Diversidad de efectores Avr-blb1, Avr-vnt1 y Avr-blb2 de Phytophthora infestans en el linaje clonal EC-1 en relaci贸n a los genes R: Rpi- blb1 (RB), Rpi-vnt1 y Rpiblb2
USAIDSe identifica la expresi贸n diferencial de genes efectores tipo RXLR en dos cepas aisladas del centro de los andes peruanos de P. infestans EC-1 mediante secuenciamiento del transcriptoma de la interacci贸n papa-P.infestans de los primeros d铆as despu茅s de la infecci贸n, siendo confirmada por qRT-PCR. Los genes efectores fueron silenciados en una cepa para Avr-vnt1 en POX109 y para el hom贸logo Avh9.1 en POX067, pero expresados en la otra. Adem谩s, los resultados de transcriptoma fueron comparados con tres cepas adicionales del linaje EC-1. En el an谩lisis de SNPs de Avr-blb1, Avr-blb2 y Avr-vnt1, la variabilidad al茅lica no tuvo predominancia frente a la variabilidad de expresi贸n de genes. Asimismo, debido al silenciamiento g茅nico de Avr-vnt1 se evalu贸 la expresi贸n de estos en plantas transg茅nicas [Rpi-vnt1.1] a fin de encontrar si la resistencia transg茅nica era funcional. Encontrando que en ambas cepas en todos los eventos y en el control susceptible Yungay se expresan, a diferencia del resultado anterior. El descubrimiento de efectores silenciados en las poblaciones del pat贸geno pueden guiar al uso de genes R espec铆ficos en los programas de mejoramiento gen茅tico. Pudiendo el gen Rpi-vnt1 no ser recomendado.Tesi
R/Avr gene expression study of Rpi-vnt1.1 transgenic potato resistant to the Phytophthora infestans clonal lineage EC-1
Influencia de la concentraci贸n de in贸culo en la producci贸n de celulasa y xilanasa por Aspergillus niger
There is great interest in using lignocellulolytic enzymes in several industries and biomass degradation for
producing biofuels and other applications. Among microbial sources of enzymes, Aspergillus niger is one of
the most used microorganisms in producing industrial enzymes due to its high protein secretion levels and
being generally regarded as safe (GRAS). The present study was aimed at evaluating the influence of A. niger
inoculum concentration on cellulase and xylanase morphology and production in submerged cultures. 250 mL flasks containing 40 mL culture medium were thus inoculated with 3% (v/v) of either 104 or 108 spores
per millilitre suspension and incubated at 28掳C and 175 rpm for 120 hours. Lactose (10 g*L-1) was used as
carbon source. The amount of biomass, extracellular soluble protein, residual lactose, total celullase activity
and xylanase activity were determined every 24 hours in each case. Even though there was no notorious
effect on growth morphology, except pellet colour and diameter, 矛max (0.06 and 0.03 h-1 for 104 and 108
spores*mL-1, respectively) and maximum biomass concentration were affected. Additionally, while cellulase
volumetric productivity (8.2 and 8.0 UI*L-1*h-1 for 104 and 108 spores*mL-1, respectively) was similar for both
inocula, xylanase productivity was greater for the more concentrated inoculum (29.7 and 33.4 UI*L-1*h-1 for
104 and 108 spores*mL-1, respectively).The results showed that cellulase and xylanase productivity was closely
related to inoculum concentration.Existe un gran interes por el uso de enzimas lignoceluloliticas en varias industrias, y en la biodegradacion de
biomasa para la produccion de biocombustibles y otras aplicaciones. Entre las fuentes microbianas de enzimas,
Aspergillus niger es uno de los microorganismos mas utilizados en la produccion de enzimas industriales,
debido a sus niveles altos de secrecion de proteina y a su condicion GRAS (generally regarded as safe). El
objetivo del presente estudio fue evaluar la influencia de la concentracion de inoculo en la morfologia y produccion
de celulasas y xilanasas con A. niger en cultivo sumergido. Para ello, fueron inoculados matraces de
250 mL con 40 mL de medio con 3% (v/v) de una suspension de 104 o 108 esporas por mililitro e incubados
a 28 oC y 175 rpm durante 120 horas. Se utilizaron 10 g*L-1 de lactosa como fuente de carbono. En cada
caso se determino la cantidad de biomasa, la proteina extracelular soluble, lactosa residual, actividad celulasa
total y xilanasa cada 24 horas. Aunque no hubo un efecto notorio en la morfologia de crecimiento, salvo en
el color y el diametro de pellets obtenidos, si se afecto la 锟矫妋ax (0,06 y 0,03 h-1 para 104 y 108 esporas*mL-1,
respectivamente) y la concentracion maxima de biomasa. Ademas, mientras que las productividades volumetricas
de celulasa (锟铰PA) (8,2 y 8,0 UI.*L-1*h-1 para 104 y 108 esporas*mL-1, respectivamente) fueron similares
para ambos inoculos, la productividad de xilanasa (锟铰IL) fue mayor para el inoculo mas concentrado (29,7 y
33,4 UI锟絅*L-1*h-1 para 104 y 108 esporas*mL-1, respectivamente). Los resultados indican que la productividad
de celulasas y xilanasas esta estrechamente relacionada con la concentracion de inoculo
Influencia de la concentraci贸n de in贸culo en la producci贸n de celulasa y xilanasa por aspergillus niger
T铆tulo en ingl茅s: Influence of inoculum concentration on the cellulase and xylanase production by Aspergillus niger Resumen Existe un gran inter茅s por el uso de enzimas lignocelulol铆ticas en varias industrias, y en la biodegradaci贸n de biomasa para la producci贸n de biocombustibles y otras aplicaciones. Entre las fuentes microbianas de enzimas, Aspergillus niger es uno de los microorganismos m谩s utilizados en la producci贸n de enzimas industriales, debido a sus niveles altos de secreci贸n de prote铆na y a su condici贸n GRAS (generally regarded as safe). El objetivo del presente estudio fue evaluar la influencia de la concentraci贸n de in贸culo en la morfolog铆a y producci贸n de celulasas y xilanasas con A. niger en cultivo sumergido. Para ello, fueron inoculados matraces de 250 mL con 40 mL de medio con 3% (v/v) de una suspensi贸n de 104 o 108 esporas por mililitro e incubados a 28 潞C y 175 rpm durante 120 horas. Se utilizaron 10 g*L-1 de lactosa como fuente de carbono. En cada caso se determin贸 la cantidad de biomasa, la prote铆na extracelular soluble, lactosa residual, actividad celulasa total y xilanasa cada 24 horas. Aunque no hubo un efecto notorio en la morfolog铆a de crecimiento, salvo en el color y el di谩metro de pellets obtenidos, s铆 se afect贸 la 碌max (0,06 y 0,03 h-1 para 104 y 108 esporas*mL-1, respectivamente) y la concentraci贸n m谩xima de biomasa. Adem谩s, mientras que las productividades volum茅tricas de celulasa (螕FPA) (8,2 y 8,0 UI.*L-1*h-1 para 104 y 108 esporas*mL-1, respectivamente) fueron similares para ambos in贸culos, la productividad de xilanasa (螕XIL) fue mayor para el in贸culo m谩s concentrado (29,7 y 33,4 UI篓*L-1*h-1 para 104 y 108 esporas*mL-1, respectivamente). Los resultados indican que la productividad de celulasas y xilanasas est谩 estrechamente relacionada con la concentraci贸n de in贸culo. Palabras clave: celulasa; xilanasa; cultivo sumergido; morfolog铆a; Aspergillus niger. Abstract There is a great interest for the use of lignocellulolytic enzymes in several industries and in biomass degradation for production of biofuels and other applications. Among the microbial sources of enzymes, Aspergillus niger is one of the most used microorganisms in the production of industrial enzymes due to its high levels of protein secretion and its GRAS (generally regarded as safe) condition. The aim of the present study was to evaluate the influence of A. niger inoculum concentration in the morphology and production of cellulases and xylanases in submerged cultures. For this, 250 mL flasks containing 40 mL culture medium were inoculated with a 3% (v/v) of either 104 or 108 spores per milliliter suspension and incubated at 28 潞 C and 175 rpm during 120 hours. Lactose (10 g*L-1) was used as the carbon source. In each case, the amount of biomass, the extracellular soluble protein, residual lactose, total celullase activity and xylanase activity were determined every 24 hours. Even thought there was not a notorious effect on the growth morphology, except in color and diameter of pellets; 碌max was affected (0.06 and 0.03 h-1 for 104 and 108 spores*mL-1, respectively) as well as maximum biomass concentration. In addition, while the volumetric productivity of cellulase (8.2 and 8.0 UI*L-1*h-1 for 104 and 108 spores*mL-1, respectively) were similar for both inocula, the productivity of xylanase was greater for the more concentrated inoculum (29.7 and 33.4 UI*L-1*h-1 for 104 and 108 spores*mL-1, respectively).The results show that cellulase and xylanase productivities are closely related to the inoculum concentration. Key words: Cellulase; xylanase; submerged culture; morphology; Aspergillus niger
Influencia de la concentraci贸n de in贸culo en la producci贸n de celulasa y xilanasa por Aspergillus niger
T铆tulo en ingl茅s: Influence of inoculum concentration on the cellulase and xylanase production by Aspergillus niger
Resumen
Existe un gran inter茅s por el uso de enzimas lignocelulol铆ticas en varias industrias, y en la biodegradaci贸n de biomasa para la producci贸n de biocombustibles y otras aplicaciones. Entre las fuentes microbianas de enzimas, Aspergillus niger es uno de los microorganismos m谩s utilizados en la producci贸n de enzimas industriales, debido a sus niveles altos de secreci贸n de prote铆na y a su condici贸n GRAS (generally regarded as safe). El objetivo del presente estudio fue evaluar la influencia de la concentraci贸n de in贸culo en la morfolog铆a y producci贸n de celulasas y xilanasas con A. niger en cultivo sumergido. Para ello, fueron inoculados matraces de 250 mL con 40 mL de medio con 3% (v/v) de una suspensi贸n de 104 o 108 esporas por mililitro e incubados a 28 潞C y 175 rpm durante 120 horas. Se utilizaron 10 g*L-1 de lactosa como fuente de carbono. En cada caso se determin贸 la cantidad de biomasa, la prote铆na extracelular soluble, lactosa residual, actividad celulasa total y xilanasa cada 24 horas. Aunque no hubo un efecto notorio en la morfolog铆a de crecimiento, salvo en el color y el di谩metro de pellets obtenidos, s铆 se afect贸 la 碌max (0,06 y 0,03 h-1 para 104 y 108 esporas*mL-1, respectivamente) y la concentraci贸n m谩xima de biomasa. Adem谩s, mientras que las productividades volum茅tricas de celulasa (螕FPA) (8,2 y 8,0 UI.*L-1*h-1 para 104 y 108 esporas*mL-1, respectivamente) fueron similares para ambos in贸culos, la productividad de xilanasa (螕XIL) fue mayor para el in贸culo m谩s concentrado (29,7 y 33,4 UI篓*L-1*h-1 para 104 y 108 esporas*mL-1, respectivamente). Los resultados indican que la productividad de celulasas y xilanasas est谩 estrechamente relacionada con la concentraci贸n de in贸culo.
Palabras clave: celulasa; xilanasa; cultivo sumergido; morfolog铆a; Aspergillus niger.
Abstract
There is a great interest for the use of lignocellulolytic enzymes in several industries and in biomass degradation for production of biofuels and other applications. Among the microbial sources of enzymes, Aspergillus niger is one of the most used microorganisms in the production of industrial enzymes due to its high levels of protein secretion and its GRAS (generally regarded as safe) condition. The aim of the present study was to evaluate the influence of A. niger inoculum concentration in the morphology and production of cellulases and xylanases in submerged cultures. For this, 250 mL flasks containing 40 mL culture medium were inoculated with a 3% (v/v) of either 104 or 108 spores per milliliter suspension and incubated at 28 潞 C and 175 rpm during 120 hours. Lactose (10 g*L-1) was used as the carbon source. In each case, the amount of biomass, the extracellular soluble protein, residual lactose, total celullase activity and xylanase activity were determined every 24 hours. Even thought there was not a notorious effect on the growth morphology, except in color and diameter of pellets; 碌max was affected (0.06 and 0.03 h-1 for 104 and 108 spores*mL-1, respectively) as well as maximum biomass concentration. In addition, while the volumetric productivity of cellulase (8.2 and 8.0 UI*L-1*h-1 for 104 and 108 spores*mL-1, respectively) were similar for both inocula, the productivity of xylanase was greater for the more concentrated inoculum (29.7 and 33.4 UI*L-1*h-1 for 104 and 108 spores*mL-1, respectively).The results show that cellulase and xylanase productivities are closely related to the inoculum concentration.
Key words: Cellulase; xylanase; submerged culture; morphology; Aspergillus niger