Suplementação dietética com simbiótico para o híbrido de pintado (Pseudoplatystoma corruscans) e cachara (P. fasciatum)

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Aquicultura, Florianópolis, 2010O presente trabalho objetivou o isolamento e seleção de bactérias com potencial probiótico para o híbrido resultante do cruzamento entre "pintado", Pseudoplatystoma corruscans e "cachara", Pseudoplatystoma fasciatum, bem como avaliação de diferentes estratégias de aplicação destas bactérias associadas à utilização de prebióticos em dietas comerciais. Na primeira etapa foi isolada e selecionada a cepa Weissela cibaria (CPQBA 001-10 DRM 02) como potencial probiótico após ser avaliada in vitro na inibição de patógenos bacterianos conhecidos para aquicultura e in vivo, colonizando o trato intestinal aumentando o numero total de eritrócitos sanguíneos e alterando a microbiologia do trato intestinal. Após esta etapa foi estudada a inclusão de 0,5 % do prebiótico (Inulina) em dieta comercial, a qual não alterou a estabilidade da dieta e proporcionou aumento na concentração bacteriana inoculada. Na avaliação in vivo, os animais alimentados com as dietas contendo apenas a bactéria probiótica e dieta suplementada com bactéria probiótica e inulina (dieta simbiótica) apresentaram aumento na concentração de imunoglobulina total sérica quando comparados aos animais suplementados somente com inulina e sem suplementação. Na última etapa do projeto após 24 horas da infecção experimental com Aeromonas hydrophila subsp hydrophila, os animais suplementados com W. cibaria apresentaram índices de mortalidade inferiores aos dos grupos controle e tratados com a cepa probiótica para tilápias Lactobacillus plantarum (7,55±3,78; 31,48±9,32 e 33,06±7,94% respectivamente). Foi observado aumento na atividade de lisozima e proteína sérica total nos peixes suplementados em relação aos não suplementados, porém as concentrações de imunoglobulinas totais dos peixes alimentados com simbiótico W. cibaria foram superiores do que as dos peixes suplementados com L. plantarum (8,34±0,19 mg.mL-1 e 7,36±0,95 mg.mL-1). Este produto biotecnológico desenvolvido neste trabalho tem como obetivo melhorar a sanidade no cultivo do surubim híbrido, melhorando os índices de sobrevivência e a imunocompetencia dos peixes

Isolation ofAeromonas hydrophila in bullfrog tadpoles in the transformation stage

O objetivo deste trabalho foi isolar o agente causador da doença-da-perna-vermelha em girinos de Rana catesbeiana em fase de transformação. Coletaram-se 20 girinos, na fase G4, apresentando prostração, anorexia, pele ressecada, pernas posteriores hemorrágicas e natação errática. Amostras do coração, fígado e partes da perna foram inoculadas em meio de cultura ágar triptona de soja e ágar sangue, a 25°C, por 48 horas. Aeromonas hydrophila foi a principal causa do surto de mortalidade. A fim de avaliar o efeito dessa bactéria nos girinos, realizou-se inoculação por via oral e intraperitoneal de 106 unidades formadoras de colônia por mililitro, e verificou-se o aparecimento de petéquias hemorrágicas na boca e nos órgãos internos.This work aimed to isolate the pathogen responsible for red-leg disease in tadpoles of Rana catesbeiana in their transformation stage. Twenty animals in G4 stage were collected presenting prostration, anorexia, desiccated skin, hemorragic legs and erratic swimming. The bacteria were isolated from samples of heart, liver and legs on tryptone soy agar and blood agar at 25°C for 48 hours. Aeromonas hydrophila was the main responsible for mortality. To evaluate the effect of bacterium, the tadpoles were orally and intraperitoneally infected with 106 CFU mL-1. The appearance of haemorrhagic petechiae on the mouth and internal organs were verified

Lactic-acid bacteria increase the survival of marine shrimp, Litopenaeus vannamei, after infection with Vibrio harveyi

Este trabalho avaliou a adição de duas cepas de bactérias lácticas (2 e B6) na sobrevivência, qualidade de pós-larva e na população de bactérias na larvicultura de Litopenaeus vannamei experimentalmente infectado por Vibrio harveyi. Mil e quinhentos náuplios foram distribuídos em tanques de 20 L com quatro repetições. A sobrevivência dos animais controle foi menor (21%) do que a dos alimentados com as cepas B6 (50%) e 2 (44%). Sobrevivência de misis após desafio com V. harveyi foi maior em B6 do que nos outros tratamentos. A população total de bactérias na água e nas larvas, bem como de Vibrio ssp. na água não foi diferente entre os tratamentos. Não houve diferença, também, entre a população de Vibrio ssp. em larvas do grupo controle (5,5±0,5 log UFC/mL) e larvas alimentadas com a cepa 2 (5,4±0,1 log UFC/mL). Camarões do grupo controle e alimentados com cepa 2 apresentaram maior população de bactérias do que os alimentados com cepa B6 (1,2±0,2 log UFC/mL). Foi comprovada a menor presença de bactérias entéricas com potencial de patogenicidade nos animais alimentados com a cepa B6, apresentando também comportamento mais ativo e menor número de necroses em relação ao controle e cepa 2.This study evaluated the survival, post-larvae quality, and the population of bacteria in Litopenaeus vannamei after the addition of two strains of lactic-acid bacteria (2 and B6) experimentally infected by Vibrio harveyi. Fifteen hundred nauplii were distributed in 20 L capacity tanks with four replicates. The survival of control animals was lower (21%) than that of animals fed with the strains B6 (50%) and 2 (44%). Total bacterial population in the water and larvae, as well as of the Vibrio ssp. in water was not different among the treatments. No difference was observed in the population of Vibrio ssp. between the control larvae (5.5±0.5 log UFC/mL) and that fed with strain 2 (5.4±0.1 log UFC/mL). Shrimp from control and fed with strain 2 showed significantly higher bacterial population than those fed with strain B6 (1.2±0.2 log UFC/mL). It was detected the lower load of Vibrio ssp. bacteria with potential of pathogenicity after feeding with strain B6.Moreover, these larvae showed more active behavior and low number of necrosis in relation to the control group and to that fed with strain 2

Crescimento, digestibilidade e resistência à infecção por patógeno em tilápia-do-nilo alimentada com probióticos

The objective of this work was to evaluate the effect of dietary supplementation with probiotics Lactobacillus plantarum and Saccharomyces cerevisiae on the performance, resistance to pathogen infection and digestibility in Nile tilapia fingerlings. Three trials were performed. In the first one, six groups of 30 fingerlings (2.4±0.5 g) received supplementation with probiotics during 55 days, and other three groups received no supplementation. At the end of this period, in the second trial, fish were challenged with Aeromonas hydrophila, and survival was assessed over 96 hours. In the third trial, with eight fish per tank (230,0±10,0 g), diet digestibility after the probiotic supplementation was evaluated. Supplementation with probiotics significantly improves weight gain, feed conversion, and protein and energy retention rates, as well as the resistance to Aeromonas hydrophila after infection. Supplementation of Saccharomyces cerevisiae to the diet of Nile tilapia significantly improves the digestibility of protein, energy, and dry matter.O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da suplementação da dieta com os probióticos Lactobacillus plantarum e Saccharomyces cerevisiae, no desempenho zootécnico, digestibilidade e na resistência à infecção por patógeno, em alevinos de tilápia-do-nilo. Foram realizados três ensaios. No primeiro, durante 55 dias, seis grupos de 30 alevinos (2,4±0,5 g) receberam suplementação com probióticos, e outros três grupos não receberam suplementação. No final desse período, no segundo ensaio, os peixes foram desafiados com Aeromonas hydrophila, e a sobrevivência foi avaliada por 96 horas. No terceiro ensaio, com oito peixes por tanque (230,0±10,0 g), avaliou-se a digestibilidade da dieta após a suplementação com os probióticos. A suplementação probiótica melhora significativamente o ganho de peso, a conversão alimentar, as taxas de retenção proteica e energética, assim como a resistência dos animais a Aeromonas hydrophila, após a infecção. A suplementação com Saccharomyces cerevisiae à dieta de tilápia-do-nilo melhora significativamente a digestibilidade da proteína, energia e matéria seca

Induced aerocystitis and hemato-immunological parameters in Nile tilapia fed supplemented diet with essential oil of Lippia alba

O presente estudo avaliou a suplementação dietária com óleo essencial de Lippia alba sobre os parâmetros hemato-imunológicos em tilápias do Nilo (Oreochromis niloticus) submetidas à inflamação aguda induzida por carragenina na bexiga natatória. Pelo período de 45 dias, 96 peixes foram divididos em quarto tratamentos em triplicata: a) peixes suplementados com óleo esencial de L. alba (4 mL kg-1 de ração) injetados com carragenina; b) peixes suplementados com álcool de cereais injetados com carragenina; peixes não suplementados com óleo essencial injetados com carragenina; c) peixes não suplementados não injetados. Os níveis de cortisol, eritrograma, leucograma e o infiltrado inflamatório foram analisados seis horas após o estímulo inflamatório. Peixes injetados com carragenina apresentaram reação inflamatória aguda na bexiga natatória caracterizada por maior infiltrado de neutrófilos e monócitos. O número de neutrófilos circulantes foi significativamente maior nos peixes suplementados com L. alba quando comparado aos outros tratamentos. Não houve diferença nos níveis de cortisol. Para a dose, o tempo e a forma de administração testada, a suplementação com óleo essencil de L. alba não apresentou atividade anti-inflamatória. Por outro lado, foi constatada influência da suplementação dietária no número de neutrófilos após a aerocistite enfatizando a sua característica imunomoduladora.The present study evaluated the dietary supplementation with essential oil of Lippia alba on the hemato-immunological parameters of Nile tilapia (Oreochromis niloticus) submitted to acute inflammation induced by carrageenin injection in the swim bladder. For a period of 45 days, 96 fish were divided in four treatments in triplicate, as follows: fish fed supplemented diet with essential oil of L. alba (4 mL kg-1 dry ration) injected with carrageenin; fish fed supplemented diet with cereal alcohol injected with carrageenin; fish fed unsupplemented diet with essential oil injected with carrageenin; fish fed unsupplemented diet and noninjected. Cortisol levels, erythrogram, leukogram and the inflammatory infiltrate were analyzed 6 h after inflammatory stimulus. Carrageenin-injected fish showed acute inflammatory reaction in the swim bladder characterized by higher infiltrate of neutrophils and monocytes. The circulating neutrophils number was significantly higher in fish fed L. alba when compared to other treatments. No difference in cortisol levels was found. For dose, time and administration form tested, supplementation with essential oil of L. alba did not present anti-inflammatory activity. On the other hand, influence of dietary supplementation was observed on the neutrophils number after induced aerocystitis highlighting its immunomodulatory characteristic

Prebiotic, probiotic, and symbiotic‑supplemented diet for marine shrimp farming

O objetivo deste trabalho foi avaliar o uso de suplemento prebiótico, probiótico e simbiótico, na dieta de camarões marinhos (Litopenaeus vannamei) e seus efeitos sobre o crescimento, a microbiota intestinal, a resposta imune e a resistência ao desafio experimental com Vibrio alginolyticus. Foram utilizados quatro tratamentos: prebiótico inulina; probiótico Lactobacillus plantarum; simbiótico Lactobacillus plantarum + inulina; e controle. Os camarões foram distribuídos em 16 tanques de dez mil litros de água, povoados com 200 camarões cada, cultivados por seis semanas. Avaliaram-se a microbiologia do trato intestinal dos camarões e a reposta imune, antes e após o desafio com V. alginolyticus. A concentração de Vibrio spp. no trato digestório foi menor em camarões alimentados com dieta suplementada com prebiótico, probiótico e simbiótico, enquanto a concentração de bactérias acidoláticas foi superior somente nos camarões alimentados com probiótico e simbiótico. O título aglutinante do soro contra V. alginolyticus aumentou no grupo probiótico e simbiótico, antes da infecção, e foi maior em todos os tratamentos após infecção com V. alginolyticus, em comparação ao controle. Não foi observada diferença entre os tratamentos quanto aos demais parâmetros avaliados. As dietas probióticas, prebióticas e simbióticas alteram a microbiota intestinal e aumentam o título aglutinante do soro contra V. alginolyticus; contudo, não alteram a resistência ao desafio nem o crescimento dos camarões.The objective of this work was to evaluate the use of prebiotic, probiotic, and symbiotic supplements, in the diet of shrimp (Litopenaeus vannamei), and their effects on growth, intestinal microbiota, immune response, and resistance to experimental challenge with Vibrio alginolyticus. Four treatments were used: prebiotic (inulin); probiotic (Lactobacillus plantarum); symbiotic (Lactobacillus plantarum + inulin); and a control. Shrimp were distributed in 16 tanks with ten thousand liters of water, stocked with 200 shrimp each, cultivated for six weeks. Microbiology of the intestinal tract and the immune response of shrimp were evaluated before and after the challenge with V. alginolyticus. The concentration of Vibrio spp. in the digestive tract was lower in shrimp fed prebiotic, probiotic, and symbiotic‑supplemented diet, while concentration of lactic acid bacteria was higher only in shrimp fed probiotic and symbiotic‑supplemented diet. The title of agglutinating serum against V. alginolyticus increased in shrimp fed the probiotic and symbiotic‑supplemented diet prior to infection, and was higher in all treatments after infection with V. alginolyticus, in comparison to the control. No difference was observed between treatments for the remaining parameters. Probiotic, prebiotic, and symbiotic diets change intestinal microbiota, and increase the agglutinating serum title against V. alginolyticus; however, they change neither the shrimp resistance to challenge by V. alginolyticus nor shrimp growth

INFECÇÃO COM TROFOZOÍTOS DE Ichthyophthirius multifiliis (CILIOPHORA) EM Poecilia vivipara (POECILIIDAE) COMO HOSPEDEIRO EXPERIMENTAL

Este trabalho estudou o grau de parasitismo em Poecilia vivipara infectado experimentalmente com trofozoítos de Ichthyophthirius multifiliis. Em frascos de 400 mL de água com aeração constante foram acondicionados quatro peixes, com duas réplicas e adicionadas as quantidades de 0, 1, 2, 4, 8, 16 e 20 trofozoítos/peixe. Os valores médios da temperatura da água, pH e oxigênio dissolvido foram de 19,5±0,39ºC, 6,35±0,09 e 7,02±0,45mg/L, respectivamente. Antes de se proceder à infecção, os animais foram tratados com solução de formalina 1:4000 durante uma hora por dois dias consecutivos. Obtiveram-se os parasitos de cinco alevinos de Salminus brasiliensis infectados, mantidos em placas de Petri com água por trinta minutos. Coletaram-se os trofozoítos com pipeta Pasteur e adicionou-se o número respectivo em cada tratamento. Para evitar que os parasitos ficassem aderidos às placas, cada uma foi mantida no respectivo frasco durante o período. Após sete dias, os peixes foram sacrificados e examinados, exceto os expostos a 20 trofozoítos/peixe, os quais morreram em dois dias. O valor médio do tratamento com 20 trofozoítos/peixe foi significativamente maior (

Time-related action of Lactobacillus plantarum in the bacterial microbiota of shrimp digestive tract and its action as immunostimulant

O objetivo deste trabalho foi avaliar o tempo de atuação de Lactobacillus plantarum, na microbiota bacteriana intestinal de Litopenaeus vannamei, e sua relação com a contagem total de hemócitos e a atividade da fenoloxidase após a exposição a Vibrio harveyi. Os camarões foram alimentados com dieta suplementada com probióticos por oito dias e, depois, substituída por dieta comercial. Os camarões alimentados com dieta comercial constituíram o controle. As avaliações foram realizadas no oitavo dia de experimento e repetidas dois, quatro, seis e oito dias depois. A contagem total de bactérias lácticas no intestino foi maior até o quarto dia de avaliação, no grupo alimentado com probióticos. A contagem de Vibrio spp. foi superior no grupo controle nos dias zero e dois. Até o quarto dia, a contagem total de hemócitos dos camarões após a inoculação de V. harveyi foi superior no grupo alimentado com probiótico em relação ao grupo controle. Não foi observada diferença na atividade da fenoloxidase. No sexto dia, após a substituição da dieta suplementada com probióticos por dieta controle, todos os parâmetros avaliados foram iguais nos dois grupos, o que indica que o tempo de atuação de L. plantarum em camarões é curto.The objective of this work was to assess the time-related action of probiotic Lactobacillus plantarum in the bacterial microbiota of the digestive tract of Litopenaeus vannamei, and the relation of total haemocyte count and serum phenol oxidase activity of shrimp challenged with Vibrio harveyi. Shrimps were fed with a probiotic-supplemented diet, for eight days, then shifted to a commercial diet. Shrimps fed only with the commercial diet served as control. Evaluations were made on the 8th day of experiment and repeated two, four, six and eight days later. Total lactic bacteria in the digestive tract was higher until the 4th day of evaluation in the probiotic-supplemented group. Vibrio spp. counts were higher in the control at days zero and two. Until the 4th day of evaluation, the total haemocyte counts in shrimps after challenge with V. harveyi were higher in probiotic-supplemented group than in control group. Significant difference was not observed in phenol oxidase activity. On the 6th day after shifting from supplemented to control diet, all parameters were equal in both groups, suggesting that the time-related action of L. plantarum in shrimp is short

Seleção in vitro de bactérias com potencial para uso como probióticos na carcinicultura marinha

The objective of this work was to isolate strains of lactic acid bacteria with probiotic potential from the digestive tract of marine shrimp (Litopenaeus vannamei), and to carry out in vitro selection based on multiple characters. The ideotype (ideal proposed strain) was defined by the highest averages for the traits maximum growth velocity, final count of viable cells, and inhibition halo against nine freshwater and marine pathogens, and by the lowest averages for the traits duplication time and resistance of strains to NaCl (1.5 and 3%), pH (6, 8, and 9), and biliary salts (5%). Mahalanobis distance (D2) was estimated among the evaluated strains, and the best ones were those with the shortest distances to the ideotype. Ten bacterial strains were isolated and biochemically identified as Lactobacillus plantarum (3), L. brevis (3), Weissella confusa (2), Lactococcus lactis (1), and L. delbrueckii (1). Lactobacillus plantarum strains showed a wide spectrum of action and the largest inhibition halos against pathogens, both Gram‑positive and negative, high growth rate, and tolerance to all evaluated parameters. In relation to ideotype, L. plantarum showed the lowest Mahalanobis (D2) distance, followed by the strains of W. confusa, L. brevis, L. lactis, and L. delbrueckii. Among the analyzed bacterial strains, those of Lactobacillus plantarum have the greatest potential for use as a probiotic for marine shrimp.O objetivo deste trabalho foi isolar cepas de bactérias ácido‑lácticas, com potencial probiótico do trato digestório de camarões marinhos e realizar seleção in vitro baseada em múltiplos caracteres. O ideótipo (cepa ideal proposta) foi definido por meio das maiores médias para os caracteres velocidade máxima de crescimento, contagem final de células viáveis e halo de inibição contra nove patógenos de origem continental e marinha, e pelas menores médias para os caracteres tempo de duplicação e tolerância das cepas a NaCl (1,5 e 3%), pH (6, 8 e 9) e sais biliares (5%). Foram estimadas as distâncias de Mahalanobis (D2) entre as cepas avaliadas, e as melhores foram aquelas que apresentaram menor distância do ideótipo. Foram isoladas dez cepas de bactérias identificadas bioquimicamente como Lactobacillus plantarum (3), L. brevis (3), Weissella confusa (2), Lactococcus lactis (1) e L. delbrueckii (1). As cepas de L. plantarum apresentaram amplo espectro de ação e os maiores halos de inibição, tanto para patógenos Gram‑positivos quanto negativos, alta taxa de crescimento e tolerância a todos os parâmetros avaliados. Em relação ao ideótipo, L. plantarum apresentou a menor distância de Mahalanobis (D2), seguida pelas cepas de W. confusa, L. brevis, L. lactis e L. delbrueckii. Entre as cepas bacterianas avaliadas, as de L. plantarum apresentam o maior potencial para uso como probiótico para camarões marinhos