O objetivo deste trabalho foi avaliar o tempo de atuação de Lactobacillus plantarum, na microbiota bacteriana intestinal de Litopenaeus vannamei, e sua relação com a contagem total de hemócitos e a atividade da fenoloxidase após a exposição a Vibrio harveyi. Os camarões foram alimentados com dieta suplementada com probióticos por oito dias e, depois, substituída por dieta comercial. Os camarões alimentados com dieta comercial constituíram o controle. As avaliações foram realizadas no oitavo dia de experimento e repetidas dois, quatro, seis e oito dias depois. A contagem total de bactérias lácticas no intestino foi maior até o quarto dia de avaliação, no grupo alimentado com probióticos. A contagem de Vibrio spp. foi superior no grupo controle nos dias zero e dois. Até o quarto dia, a contagem total de hemócitos dos camarões após a inoculação de V. harveyi foi superior no grupo alimentado com probiótico em relação ao grupo controle. Não foi observada diferença na atividade da fenoloxidase. No sexto dia, após a substituição da dieta suplementada com probióticos por dieta controle, todos os parâmetros avaliados foram iguais nos dois grupos, o que indica que o tempo de atuação de L. plantarum em camarões é curto.The objective of this work was to assess the time-related action of probiotic Lactobacillus plantarum in the bacterial microbiota of the digestive tract of Litopenaeus vannamei, and the relation of total haemocyte count and serum phenol oxidase activity of shrimp challenged with Vibrio harveyi. Shrimps were fed with a probiotic-supplemented diet, for eight days, then shifted to a commercial diet. Shrimps fed only with the commercial diet served as control. Evaluations were made on the 8th day of experiment and repeated two, four, six and eight days later. Total lactic bacteria in the digestive tract was higher until the 4th day of evaluation in the probiotic-supplemented group. Vibrio spp. counts were higher in the control at days zero and two. Until the 4th day of evaluation, the total haemocyte counts in shrimps after challenge with V. harveyi were higher in probiotic-supplemented group than in control group. Significant difference was not observed in phenol oxidase activity. On the 6th day after shifting from supplemented to control diet, all parameters were equal in both groups, suggesting that the time-related action of L. plantarum in shrimp is short