Hsp12 influencia a fagocitose e resposta ao estresse em Cryptococcus gattii

Cryptococcus gattii é uma das espécies causadoras da criptococose, a qual pode acometer tanto indivíduos imunocomprometidos quanto imunocompetentes. Devido a relevância clínica dessa doença, estudos para compreensão dos mecanismos de virulência deste patógeno são importantes. Sabe-se que proteínas de choque térmico (Hsp) são fundamentais para homeostase e influenciam fatores de virulência importantes durante a infecção. Contudo, ainda há uma falta de conhecimento quanto a pequenas Hsps (sHsp) em células fúngicas e seu papel durante infecção. Considerando o exposto, esse trabalho propõe-se a caracterizar uma Hsp12 de C. gattii através da construção de uma linhagem mutante nula (Δhsp12). Os níveis de expressão relativa do gene HSP12 apresentaram um aumento significativo durante condição de choque térmico, enquanto a exposição a concentração subinibitória de fluconazol levou a sua redução. A linhagem Δhsp12 também apresentou maior sensibilidade ao estresse oxidativo e de membrana, quando comparado com a linhagem selvagem. Além disso, durante ensaio de interação com macrófagos a linhagem Δhsp12 apresentou uma maior taxa de fagocitose quando comparada com a linhagem selvagem. Dessa forma, Hsp12 possui importante papel durante o estresse oxidativo e de membrana, além de influenciar a taxa de fagocitose de C. gattii

The transcription factor Pdr802 regulates Titan cell formation and pathogenicity of Cryptococcus neoformans

The pathogenic yeast Cryptococcus neoformansC. neoforman

Validation of a Multiplex Tandem Mass Spectrometry Method for the Detection of Selected Lysosomal Storage Diseases in Dried Blood Spots

Background: Interest in screening methods for lysosomal storage diseases (LSDs) has increased in recent years, since early diagnosis and treatment are essential to prevent or attenuate the onset of symptoms and the complications of these diseases. In the current work, we evaluated the performance of tandem mass spectrometry (MS/MS) for the detection of some LSDs, aiming the future use of this methodology for the screening of these disorders. Methods: Standard curves and quality control dried blood spots were assayed to evaluate the precision, linearity, and accuracy. A total of 150 controls were grouped according to age and subjected to measurement of lysosomal enzymes deficient in Niemann-Pick A/B, Krabbe, Gaucher, Fabry, Pompe, and Mucopolysaccharidosis type I diseases. Samples from 59 affected patients with a diagnosis of LSDs previously confirmed by fluorimetric methods were analyzed. Results: Data from standard calibration demonstrated good linearity and accuracy and the intra- and interassay precisions varied from 1.17% to 11.60% and 5.39% to 31.24%, respectively. Except for galactocerebrosidase and α- l -iduronidase, enzyme activities were significantly higher in newborns compared to children and adult controls. Affected patients presented enzymatic activities significantly lower compared to all control participants. Conclusion: Our results show that MS/MS is a promising methodology, suitable for the screening of LSDs, but accurate diagnoses will depend on its correlation with other biochemical and/or molecular analyses

A Predicted Mannoprotein Participates in Cryptococcus gattii Capsular Structure

Submitted by Fabricia Pimenta ([email protected]) on 2019-01-02T15:54:34Z No. of bitstreams: 1 ve_Marcio_Lourenço_CDTS_2018.pdf: 2818130 bytes, checksum: ebe8857bb055ac12339905fddb49b711 (MD5)Approved for entry into archive by Fabricia Pimenta ([email protected]) on 2019-01-11T16:34:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 ve_Marcio_Lourenço_CDTS_2018.pdf: 2818130 bytes, checksum: ebe8857bb055ac12339905fddb49b711 (MD5)Made available in DSpace on 2019-01-11T16:34:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ve_Marcio_Lourenço_CDTS_2018.pdf: 2818130 bytes, checksum: ebe8857bb055ac12339905fddb49b711 (MD5) Previous issue date: 2018-03Universidade Federal do Rio Grande do Sul. Centro de Biotecnologia. Laboratório de Fungos de Importância Médica e Biotecnológica. Porto Alegre, RS, Brasil.Universidade Federal do Rio Grande do Sul. Centro de Biotecnologia. Laboratório de Fungos de Importância Médica e Biotecnológica. Porto Alegre, RS, Brasil.Universidade Federal do Rio Grande do Sul. Centro de Biotecnologia. Laboratório de Fungos de Importância Médica e Biotecnológica. Porto Alegre, RS, Brasil.Universidade Federal do Rio Grande do Sul. Centro de Biotecnologia. Laboratório de Fungos de Importância Médica e Biotecnológica. Porto Alegre, RS, Brasil.Universidade Federal do Rio Grande do Sul. Centro de Biotecnologia. Laboratório de Fungos de Importância Médica e Biotecnológica. Porto Alegre, RS, Brasil.Universidade Federal do Rio Grande do Sul. Centro de Biotecnologia. Laboratório de Fungos de Importância Médica e Biotecnológica. Porto Alegre, RS, Brasil.Universidade Federal do Rio de Janeiro. Instituto de Microbiologia Paulo de Goés. Laboratório de Biologia Celular de Leveduras Patogênicas. Rio de Janeiro, RJ, Brazil.Universidade Federal do Rio Grande do Sul. Centro de Biotecnologia. Laboratório de Fungos de Importância Médica e Biotecnológica. Porto Alegre, RS, Brasil.Universidade Federal do Rio de Janeiro. Instituto de Biofísica Carlos Chagas Filho. Laboratório de Ultraestrutura Celular Hertha Meyer. Rio de Janeiro, RJ, Brazil.Universidade Federal do Rio Grande do Sul. Centro de Biotecnologia. Laboratório de Fungos de Importância Médica e Biotecnológica. Porto Alegre, RS, Brasil.Universidade Federal do Rio Grande do Sul. Centro de Biotecnologia. Laboratório de Fungos de Importância Médica e Biotecnológica. Porto Alegre, RS, Brasil.Universidade Federal do Rio Grande do Sul. Centro de Biotecnologia. Laboratório de Fungos de Importância Médica e Biotecnológica. Porto Alegre, RS, Brasil.Universidade de Santa Cruz do Sul. Departamento de Biologia e Farmácia. Programa de Pós-Graduação em Promoção da Saúde. Santa Cruz do Sul, RS, Brazil.Universidade Federal do Rio Grande do Sul. Centro de Biotecnologia. Departamento de Biologia Molecular e Biotecnologia. Laboratório de Fungos de Importância Médica e Biotecnológica. Porto Alegre, RS, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Desenvolvimento Tecnológico em Saúde. Rio de Janeiro, RJ, Brazil / Universidade Federal do Rio de Janeiro. Instituto de Microbiologia Paulo de Goés. Laboratório de Biologia Celular de Leveduras Patogênicas. Rio de Janeiro, RJ, Brazil.Universidade Federal do Rio Grande do Sul. Centro de Biotecnologia. Departamento de Biologia Molecular e Biotecnologia. Laboratório de Fungos de Importância Médica e Biotecnológica. Porto Alegre, RS, Brasil.Universidade Federal do Rio Grande do Sul. Centro de Biotecnologia. Departamento de Biologia Molecular e Biotecnologia. Laboratório de Fungos de Importância Médica e Biotecnológica. Porto Alegre, RS, Brasil.Universidade Federal do Rio Grande do Sul. Centro de Biotecnologia. Departamento de Biologia Molecular e Biotecnologia. Laboratório de Fungos de Importância Médica e Biotecnológica. Porto Alegre, RS, Brasil.The yeast-like pathogen Cryptococcus gattii is an etiological agent of cryptococcosis. The major cryptococcal virulence factor is the polysaccharide capsule, which is composed of glucuronoxylomannan (GXM), galactoxylomannan (GalXM), and mannoproteins (MPs). The GXM and GalXM polysaccharides have been extensively characterized; however, there is little information about the role of mannoproteins in capsule assembly and their participation in yeast pathogenicity. The present study characterized the function of a predicted mannoprotein from C. gattii, designated Krp1. Loss-of-function and gain-of-function mutants were generated, and phenotypes associated with the capsular architecture were evaluated. The null mutant cells were more sensitive to a cell wall stressor that disrupts beta-glucan synthesis. Also, these cells displayed increased GXM release to the culture supernatant than the wild-type strain did. The loss of Krp1 influenced cell-associated cryptococcal polysaccharide thickness and phagocytosis by J774.A1 macrophages in the early hours of interaction, but no difference in virulence in a murine model of cryptococcosis was observed. In addition, recombinant Krp1 was antigenic and differentially recognized by serum from an individual with cryptococcosis, but not with serum from an individual with candidiasis. Taken together, these results indicate that C. gattii Krp1 is important for the cell wall structure, thereby influencing capsule assembly, but is not essential for virulence in vivo. Importance: Cryptococcus gattii has the ability to escape from the host's immune system through poorly understood mechanisms and can lead to the death of healthy individuals. The role of mannoproteins in C. gattii pathogenicity is not completely understood. The present work characterized a protein, Kpr1, that is essential for the maintenance of C. gattii main virulence factor, the polysaccharide capsule. Our data contribute to the understanding of the role of Kpr1 in capsule structuring, mainly by modulating the distribution of glucans in C. gattii cell wall