Antibacterial activity of propolis-based toothpastes for endodontic treatment

This study evaluated the antibacterial activity of propolis-based toothpastes used as intracanal medication in endodontic treatment. The propolis-based toothpastes were prepared using an extract established in previous studies (identified as A70D and D70D). Calcium hydroxide paste was used as a control. The bacteria employed were Streptococcus mutans (ATCC 25175), Staphylococcus aureus (ATCC 6538), Staphylococcus aureus (ATCC 25923), Kocuria rhizophila (ATCC 9341), Escherichia coli (ATCC 10538), Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853), Enterococcus hirae (ATCC 10541), Streptococcus mutans (ATCC 25175). Five field strains isolated from saliva were used: Staphylococcus spp. (23.1 - coagulase positive), Staphylococcus spp. (23.5 - coagulase negative), Staphylococcus spp. (26.1 - coagulase positive), Staphylococcus spp. (26.5 - coagulase negative) and Staphylococcus epidermidis (6epi). The diffusion-well method on double-layer agar was used in a culture medium of Tryptic Soy Agar. The plates were kept at room temperature for two hours to allow the diffusion of pastes in the culture medium, and then incubated at 35º C for twenty-four hours in aerobiosis and in microaerophilia (S. mutans). After this period, the total diameter of the inhibition halo was measured. The results were analyzed by ANOVA analysis of variance, followed by the Tukey test at p<0.05. The propolis-based toothpastes presented antibacterial activity against 83.3% of the analyzed bacteria. For 66.7% of these bacteria, the propolis-based toothpastes exhibited greater antibacterial activity than calcium hydroxide. The present results allow us to conclude that the experimental pastes A70D and D70D showed good activity against aerobic bacteria, proving more effective than calcium hydroxide.O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade antibacteriana de formas farmacêuticas a base de própolis para uso no tratamento endodôntico como medicação intracanal. As formulações de própolis, em forma de pastas, foram preparadas a partir de um extrato pré-estabelecido em estudos anteriores e identificadas como A70D e D70D. Como controle, foi utilizado pasta de hidróxido de cálcio. As bactérias utilizadas foram: Streptococcus mutans (ATCC 25175), Staphylococcus aureus (ATCC 6538), Staphylococcus aureus (ATCC 25923), Kocuria rhizophila (ATCC 9341), Escherichia coli (ATCC 10538), Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853), Enterococcus hirae (ATCC 10541), Streptococcus mutans (ATCC 25175) e 5 cepas de campo isoladas da saliva: Staphylococcus spp. (23.1 - coagulase positiva), Staphylococcus spp. (23.5 - coagulase negativa), Staphylococcus spp. (26.1 - coagulase positiva), Staphylococcus spp. (26.5 - coagulase negativa) e Staphylococcus epidermidis (6epi). Foi utilizado o método poço difusão em camada dupla de ágar, em meio de cultura Tryptic Soy Agar. As placas foram mantidas à temperatura ambiente por 2 h para permitir a difusão das pastas no meio de cultura, e então incubadas a 35 ºC por 24 h em aerobiose e em microaerofilia (S. mutans). Após este período, foi medido o diâmetro total do halo de inibição. Os resultados foram submetidos ao teste de análise de variância ANOVA seguido do teste de Tukey com p<0,05. As pastas a base de própolis apresentaram atividade antibacteriana contra 83,3% das bactérias analisadas. Para 66,7% das bactérias, as pastas de própolis apresentaram maior atividade antibacteriana que o hidróxido de cálcio, e este foi mais efetivo apenas para Streptococcus mutans (ATCC 25175), Staphylococcus aureus (ATCC 25923) e Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853). De acordo com a metodologia utilizada, pode-se concluir que as pastas experimentais A70D e D70D apresentam boa atividade contra bactérias aeróbias, sendo superior ao hidróxido de cálcio

Anticorpos antileucotoxina contra Actinobacillus actinomycetemcomitans em amostras de soro e saliva de pacientes com periodontite juvenil localizada

The leukotoxin produced by Actinobacillus actinomycetemcomitans is considered the major virulence factor with potential to cause damage to the host defenses. The present work analyzed the serumal and salivary levels of antibodies against the leukotoxin produced by A. Actinomycetemcomitans, in patients with Localized Juvenile Periodontitis (LJP) and in healthy controls. Additionally, analysis of the immune complex (IC) was carried out in saliva samples . The classic ELISA method, with leukotoxin obtained through Sephadex G-200 gel filtration, and the capture ELISA method, using rabbit anti-A. Actinomycetemcomitans (leucotoxic, FDC Y4, IgG) adsorbed with a non-leukotoxic strain of A. actinomycetemcomitans, were used. The results obtained demonstrated significantly higher serumal levels of IgG in patients with LJP, when they were compared with the healthy controls, both for the classic and capture ELISA methods (p < 0.05). However, no significant differences were observed between the salivary levels of IgG, SIgA and IC in the examined individuals. These results suggest that even though A. actinomycetemcomitans presents virulence factors that affect the immune response, there is immune response to leukotoxin in LJP patients. This increase of IgG in the blood stream might contribute to host defense, limiting the lesion to the periodontal regions already colonized by A. actinomycetemcomitans.A leucotoxina de Actinobacillus actinomycetemcomitans é considerada seu principal fator de virulência com potencial de causar agressão às defesas do hospedeiro. No presente trabalho, foram analisados os níveis séricos e salivares de anticorpos antileucotoxina de A. actinomycetemcomitans em soros e salivas de pacientes com periodontite juvenil localizada (PJL) e controles saudáveis. Adicionalmente, foi realizada a análise de complexo imune (CI) nas amostras de saliva. Foram utilizados os métodos ELISA clássico com a leucotoxina obtida por gel filtração em Sephadex G-200 e ELISA de captura utilizando IgG de coelho anti-A. actinomycetemcomitans FDC Y4 leucotóxico adsorvido com uma cepa da mesma espécie, porém, não leucotóxica. Os resultados obtidos demonstraram níveis séricos de IgG significativamente mais elevados em pacientes com PJL em relação aos controles sadios, tanto por ELISA clássico como por ELISA de captura (p < 0,05). No entanto, não foram observadas diferenças entre os níveis de IgG, IgA-S e CI nas salivas dos indivíduos examinados. Estes resultados sugerem que, embora A. actinomycetemcomitans apresente vários fatores de virulência que afetam a resposta imune do hospedeiro, ocorre resposta imune à leucotoxina nos pacientes com PJL. Esse aumento de IgG na circulação sangüínea pode contribuir na defesa do hospedeiro, limitando a lesão nas regiões periodontais amplamente colonizadas por A. actinomycetemcomitans

Study on the immunogenical dentin potencial: contribution for the etiopathogenesis of dental resorption

As reabsorções dentárias são inflamatórias e/ou substitutivas e representam o fenômeno principal que impede o sucesso dos transplantes e reimplantes dentários. Sua ocorrência pode ser conseqüência de traumatismos, periapicopatias e movimentação dentária induzida. Na odontogênese, a dentina fica sempre escondida" do sistema imunológico e posteriormente protegida pelo esmalte, cemento e cementoblastos no lado externo e pela camada de odontoblastos internamente. Duas proteínas não colagênicas são específicas da dentina: a fosfoforina e a sialoproteína dentinária. Construiu-se a seguinte hipótese: a dentina, como antígeno seqüestrado, pode induzir fenômenos auto- imunes e participar da etiopatogenia das reabsorções dentárias. A partir de dentes humanos, obteve-se um extrato dentinário inoculado em coelhos para análise dos soros imunes. O extrato dentinário humano apresentou capacidade de indução à resposta imunológica e reagiu com anticorpos de coelho. Foram selecionados 12 pacientes com reabsorção radicular inflamatória apical ativa, 12 indivíduos saudáveis sem quaisquer evidências de reabsorção radicular e quatro pacientes com reabsorção radicular por substituição. Através da metodologia Western blotting, verificou-se que a maioria das frações do extrato dentinário humano foi reconhecida de forma semelhante por pacientes com reabsorção dentária e controles, mas seis delas foram reconhecidas de forma estatisticamente diferente, não sendo reconhecidas como próprias pelo sistema imunológico. O extrato dentinário humano foi fracionado e os subprodutos coletados por intervalo de tempo com a utilização de HPLC. Resultados de ELISA demonstraram que os soros de pacientes com reabsorção dentária apresentaram quantidades maiores de IgG antiextrato dentinário humano e antifrações que indivíduos controles, sendo possível traçar um perfil sorológico próprio e possivelmente identificador do processo. IgM sérica antiextrato dentinário humano e antifrações dos pacientes com reabsorção inflamatória estavam em quantidades maiores ou iguais aos demais grupos estudados. Os perfis séricos de IgG e IgM permitem identificar especificidades dentro do próprio grupo de reabsorções dentárias, dividindo-as em inflamatória e por substituição. Há heterogeneidade na imunogenicidade das frações do extrato dentinário. As culturas de células provenientes de pacientes com reabsorção dentária mostraram índices de proliferação menores que os controles quando estimulados com o extrato dentinário ou suas frações, mas normais quando estimulados com mitógenos. O extrato dentinário humano e suas frações apresentaram capacidade de induzir à liberação de todas as citocinas relacionadas com a reabsorção dentária em maior ou igual concentração nas células de pacientes com reabsorção inflamatória se comparados com os controles sem reabsorção. Isto não foi observado nas células de pacientes com reabsorção por substituição, permitindo identificar os grupos com reabsorção dentária. Os resultados obtidos confirmam a hipótese que a dentina apresenta imunogenicidade e que o perfil sorológico dos pacientes com reabsorção dentária pode ser identificado por análise bioquímica sangüínea. O seu delineamento preciso pode levar ao diagnóstico precoce da reabsorção dentária antes que se manifeste radiograficamente.The dental resorptions are inflammatory and/or substitutive and represent the principal phenomenon that prevents the success of transplants and dental reimplants from happening. Its occurrence can be a consequence of traumatism, periapical disease and induced dental movements. During the odontogenesis the dentin is always "hidden" from immune system and later protected by the enamel, cement and cementoblasts on the external side and, by the odontoblasts layer on the internal side. Two non-colagenical proteins phosphophorin and dentinal sialoprotein are specific of dentin. It was constructed the following hypothesis: the dentin, as a "hidden" antigen, can induce auto- immune phenomena and participate in the etiopathogenesis of the dental resorptions. Starting from extracted human teeth, we obtained a human dentinal extract inoculated into rabbits to obtain the immune sera. The huma n dentinal extract was able to react with the antibodies and to induce immune response in the rabbit. It was selected 12 patients with radicular inflammatory active apical resorption, 12 healthy individuals without signs of radicular resorptions evidences, and 4 patients with substitutive radicular resorption. Western blotting analysis showed that most of the fractions of the human dentinal extract were recognized by patients with resorption and controls in a similar way. Nevertheless, six of the fractions studied were not recognized as autologous by the immunological system of the patients. With the use of HPLC the human dentinal extract was fractioned and the subproducts collected by time interval. Results of ELISA demonstrated that the sera of patients with dental resorption presented larger amounts of IgG anti- total human dentinal extract and anti- fractions than control individuals, allowing a characterization of the sorological profile of the process. IgM anti-total human dentinal extract and anti- fractions in serum of patients with inflammatory resorption are in larger or equal amounts as the other studied groups. The seric profile of IgG and IgM allows to identify specificities inside of its own group of dental resorptions, dividing them into inflammatory and by substitution. There is an heterogenecity in the imunogenicity of the fractions of the dentinal extract. The cell cultures of patients with resorption had a smaller proliferation index than the controls when stimulated with total dentin extract or their fractions, but normal when stimulated with mitogens. The total human dentinal extract and its fractions presented capacity to induce a larger or equal concentration release of all the cytocins related to resorption in comparison to the controls without it. This was not observed with patients with dental substitution resorption, allowing the characterization of the groups with inflammatory and substitutive dental resorption. The obtained results reinforces an hypothesis that the dentin presents immunogenicity and the sorological profile of patients with dental resorption can be identified by blood biochemical analysis. Its precise screening can lead us to early diagnosis of dental resorption before it appears clinically and radiographically

Study on the immunogenical dentin potencial: contribution for the etiopathogenesis of dental resorption

As reabsorções dentárias são inflamatórias e/ou substitutivas e representam o fenômeno principal que impede o sucesso dos transplantes e reimplantes dentários. Sua ocorrência pode ser conseqüência de traumatismos, periapicopatias e movimentação dentária induzida. Na odontogênese, a dentina fica sempre escondida" do sistema imunológico e posteriormente protegida pelo esmalte, cemento e cementoblastos no lado externo e pela camada de odontoblastos internamente. Duas proteínas não colagênicas são específicas da dentina: a fosfoforina e a sialoproteína dentinária. Construiu-se a seguinte hipótese: a dentina, como antígeno seqüestrado, pode induzir fenômenos auto- imunes e participar da etiopatogenia das reabsorções dentárias. A partir de dentes humanos, obteve-se um extrato dentinário inoculado em coelhos para análise dos soros imunes. O extrato dentinário humano apresentou capacidade de indução à resposta imunológica e reagiu com anticorpos de coelho. Foram selecionados 12 pacientes com reabsorção radicular inflamatória apical ativa, 12 indivíduos saudáveis sem quaisquer evidências de reabsorção radicular e quatro pacientes com reabsorção radicular por substituição. Através da metodologia Western blotting, verificou-se que a maioria das frações do extrato dentinário humano foi reconhecida de forma semelhante por pacientes com reabsorção dentária e controles, mas seis delas foram reconhecidas de forma estatisticamente diferente, não sendo reconhecidas como próprias pelo sistema imunológico. O extrato dentinário humano foi fracionado e os subprodutos coletados por intervalo de tempo com a utilização de HPLC. Resultados de ELISA demonstraram que os soros de pacientes com reabsorção dentária apresentaram quantidades maiores de IgG antiextrato dentinário humano e antifrações que indivíduos controles, sendo possível traçar um perfil sorológico próprio e possivelmente identificador do processo. IgM sérica antiextrato dentinário humano e antifrações dos pacientes com reabsorção inflamatória estavam em quantidades maiores ou iguais aos demais grupos estudados. Os perfis séricos de IgG e IgM permitem identificar especificidades dentro do próprio grupo de reabsorções dentárias, dividindo-as em inflamatória e por substituição. Há heterogeneidade na imunogenicidade das frações do extrato dentinário. As culturas de células provenientes de pacientes com reabsorção dentária mostraram índices de proliferação menores que os controles quando estimulados com o extrato dentinário ou suas frações, mas normais quando estimulados com mitógenos. O extrato dentinário humano e suas frações apresentaram capacidade de induzir à liberação de todas as citocinas relacionadas com a reabsorção dentária em maior ou igual concentração nas células de pacientes com reabsorção inflamatória se comparados com os controles sem reabsorção. Isto não foi observado nas células de pacientes com reabsorção por substituição, permitindo identificar os grupos com reabsorção dentária. Os resultados obtidos confirmam a hipótese que a dentina apresenta imunogenicidade e que o perfil sorológico dos pacientes com reabsorção dentária pode ser identificado por análise bioquímica sangüínea. O seu delineamento preciso pode levar ao diagnóstico precoce da reabsorção dentária antes que se manifeste radiograficamente.The dental resorptions are inflammatory and/or substitutive and represent the principal phenomenon that prevents the success of transplants and dental reimplants from happening. Its occurrence can be a consequence of traumatism, periapical disease and induced dental movements. During the odontogenesis the dentin is always "hidden" from immune system and later protected by the enamel, cement and cementoblasts on the external side and, by the odontoblasts layer on the internal side. Two non-colagenical proteins phosphophorin and dentinal sialoprotein are specific of dentin. It was constructed the following hypothesis: the dentin, as a "hidden" antigen, can induce auto- immune phenomena and participate in the etiopathogenesis of the dental resorptions. Starting from extracted human teeth, we obtained a human dentinal extract inoculated into rabbits to obtain the immune sera. The huma n dentinal extract was able to react with the antibodies and to induce immune response in the rabbit. It was selected 12 patients with radicular inflammatory active apical resorption, 12 healthy individuals without signs of radicular resorptions evidences, and 4 patients with substitutive radicular resorption. Western blotting analysis showed that most of the fractions of the human dentinal extract were recognized by patients with resorption and controls in a similar way. Nevertheless, six of the fractions studied were not recognized as autologous by the immunological system of the patients. With the use of HPLC the human dentinal extract was fractioned and the subproducts collected by time interval. Results of ELISA demonstrated that the sera of patients with dental resorption presented larger amounts of IgG anti- total human dentinal extract and anti- fractions than control individuals, allowing a characterization of the sorological profile of the process. IgM anti-total human dentinal extract and anti- fractions in serum of patients with inflammatory resorption are in larger or equal amounts as the other studied groups. The seric profile of IgG and IgM allows to identify specificities inside of its own group of dental resorptions, dividing them into inflammatory and by substitution. There is an heterogenecity in the imunogenicity of the fractions of the dentinal extract. The cell cultures of patients with resorption had a smaller proliferation index than the controls when stimulated with total dentin extract or their fractions, but normal when stimulated with mitogens. The total human dentinal extract and its fractions presented capacity to induce a larger or equal concentration release of all the cytocins related to resorption in comparison to the controls without it. This was not observed with patients with dental substitution resorption, allowing the characterization of the groups with inflammatory and substitutive dental resorption. The obtained results reinforces an hypothesis that the dentin presents immunogenicity and the sorological profile of patients with dental resorption can be identified by blood biochemical analysis. Its precise screening can lead us to early diagnosis of dental resorption before it appears clinically and radiographically

Absorption capacity and toxicity of paper points after sterilization

Objective: To evaluate the influence of the sterilization process on paper cones as regards their absorption capacity, and consequently, root canal drying, in addition to the possible release of any antimicrobial or cytotoxic product. Methods: The cones used were of three of the brands found on the Brazilian market Dentsply (Dentsply Indústria e Comércio Ltda., Petrópolis, Brazil), Endopoints (Endopoints Indústria e Comércio Ltda., Paraíba do Sul, Brazil) and Tanari (Tanari Industrial Ltda., São Paulo, Brazil). To evaluate the absorption capacity, the cones were submitted to four sterilization cycles, and the modified Holland technique was performed. The antimicrobial/cytotoxic capacity was verified by means of depositing the sterilized cones in Petri dishes containing Miller-Hinton Agar and Blood Agar, seeded with S.aureus and E. coli. Results: The Dentsply (Dentsply Indústria e Comércio Ltda., Petrópolis, Brazil) and Tanari (Tanari Industrial Ltda., São Paulo, Brazil)cones presented greater absorption after the first sterilization cycle, followed by a drop in the second and third cycles, and a new increase in the fourth cycle. For the Endopoints (Endopoints Indústria e Comércio Ltda., Paraíba do Sul, Brazil) cones, the values were inverted, with a small drop in absorption after the first cycle, increase in the second and third cycles, and a new drop in the fourth cycle. None of the cones presented antimicrobial activity after the sterilization process. Conclusion: The sterilization process by damp heat does not alter the properties of absorption and there is no release of by-products from the tested paper cones

Removal efficiency of propolis paste dressing from the root canal

OBJETIVES: The aim of this study was to investigate through scanning electron microscopy (SEM) the cleaning of root canal walls after the use of experimental propolis or calcium hydroxide root canal dressings. MATERIAL AND METHODS: Twenty single-rooted teeth were used. After conventional cleaning and shaping procedures and removal of the smear layer with 17% EDTA, the teeth were divided into four groups according to the medication used (N=5): Group I (control) - No drug, Group II - Calcium hydroxide dressing, Group III - Propolis paste A70D and Group IV - Propolis paste D70D. The medications were introduced into the root canals and maintained for 7 days, then removed with a K-file and 5 mL of 1% sodium hypochlorite irrigation. Finally, the canals were flushed with 2 mL of 17% EDTA for 3 min. For SEM analysis, the roots were cleaved and microphotographs from the middle third of the root canal were taken at 750x. The cleaning of the root canal walls was determined by the number of open dentinal tubules as verified with the software Image Tool 3.1. The statistical analysis was performed by ANOVA and Tukey's test (p<0.05). RESULTS: The results showed no statistically significant difference between the calcium hydroxide and propolis groups. CONCLUSIONS: The experimental propolis pastes presented acceptable physical characteristics to be used as intracanal medicaments