Leptin immunostaining in the endometrium of mares and its relation with stress, obesity and estrous cycle

A leptina é um hormônio peptídico multifuncional, produzido principalmente pelo tecido adiposo, possuindo receptores (Ob-Rs) nos órgãos reprodutivos, hipotálamo e hipófise. Os glicocorticóides, como o cortisol, também influenciam diretamente a produção de leptina. A importância desses dois hormônios na atividade reprodutiva tem sido descrita por diversos autores, que observaramo envolvimento de ambos, na melhoria dos índices reprodutivos, seja por sua influência direta no eixo hipotalâmico-hipofisário-gonadal, na maturação dos oócitos ou na preparação uterina para receber o concepto. No entanto, quando em excesso na circulação, podem influênciar negativamente o sistema reprodutivo. Marcadores como a leptina e seu receptor funcional de cadeia longa, estão sendo estudados no endométrio de espécies como humanos, bovinos e suínos, apresentando resultados que correlacionam a diminuição destes, com a infertilidade ou perda embrionária, porém até o momento não foi possível encontrar estudos que abordassem esse tema em equinos. Neste estudo foram avaliados: 1) a presença de leptina (Ob) e seu receptor (Ob-Rb) no endométrio de éguas, observando a influência da obesidade e do ciclo estral nesses marcadores e 2) em uma condição de manejo adverso e estressante, a influência do cortisol intrafolicular, nos níveis de leptina no fluido folicular (FF) e nos marcadores de Ob e Ob-Rb no endométrio durante as fases do ciclo estral. Os resultados demonstraram que existe a presença da leptina e seu receptor (Ob-Rb) no endométrio de equinos, com imunomarcação no epitélio luminal e glandular em todas as fases do ciclo estral avaliadas, apresentando, no entanto, uma marcação imunológica mais intensa nos Ob-Rb (142.68±4.97, P< 0,0001) no epitélio glandular durante o diestro em éguas de escore corporal moderado. Não foi possível observar a influência do aumento do cortisol intrafolicular (FF) nas variáveis avaliadas, pois o cortisol se manteve dentro dos valores fisiológicos para a espécie, no entanto pode-se verificar uma correlação positiva entre os níveis intrafoliculares de cortisol e leptina, estando o cortisol aumentado 8 (30.1±0.07ng/ml, P< 0,05) nos folículos mais próximos a ovulação. Pode-se perceber também, que a marcação imunológica do receptor de leptina no epitélio glandular foi mais intensa (144.52±3.17, P< 0,0001) nos animais que apresentavam folículos até 22 mm, estando a imunomarcação de ambos Ob e Ob-Rb correlacionado de forma negativa (r: -0.7836; P < 0.0001, r:- 0.7343; P < 0.0001), com os níveis de cortisol no FF.Leptin is a multifunctional peptidic hormone, mainly produced by adipose tissue, having receptors (Ob-Rs) in the reproductive organs, hypothalamus and pituitary. Glucocorticoids, such as cortisol, also directly influence leptin production. The importance of these two hormones in reproductive activity has been described by several authors, who observed the involvement of both, in the improvement of reproductive indices, either by their direct influence on the hypothalamic-pituitary-gonadal axis, oocyte maturation or the uterine preparation to receive the concept. However, when in excess in circulation, they can negatively influence the reproductive system. Markers such as leptin and its long-chain functional receptor are being studied in the endometrium of species such as humans, cattle and pigs, presenting results that correlate the decrease of these with infertility or embryonic loss, but to date it has not been possible to find studies to address this issue in horses. In this study we evaluated: 1) the presence of leptin (Ob) and its receptor (Ob-Rb) in the endometrium of mares, observing the influence of obesity and estrous cycle on these markers and 2) in an adverse and stressful management condition, the influence of intrafollicular cortisol, leptin levels in the follicular fluid (FF), and the Ob and Ob-Rb markers in the endometrium during the estrous cycle phases. The results showed that leptin and its receptor (Ob-Rb) are present in the equine endometrium, with immunostaining in the luminal and glandular epithelium in all stages of the estrous cycle evaluated, however, showing a more intense immunological labeling in Ob -Rb (142.68 ± 4.97, P <0.0001) in the glandular epithelium during the diestrous in mares of moderate body score. It was not possible to observe the influence of intrafollicular cortisol (FF) on the variables evaluated, because cortisol remained within the physiological values for the species, however a positive correlation can be observed between intrafollicular cortisol and leptin levels, being the 10 cortisol increased (30.1 ± 0.07ng/ml, P <0.05) in the follicles closest to ovulation. It can also be noticed that the immunological labeling of the leptin receptor in the glandular epithelium was more intense (144.52 ± 3.17, P <0.0001) in the animals that presented follicles up to 22 mm, and the immunostaining of both Ob and Ob-Rb correlated negatively (r: -0.7836; P <0.0001, r: - 0.7343; P <0.0001), with cortisol levels in FF

Leptin immunostaining in the endometrium of mares and its relation with stress, obesity and estrous cycle

A leptina é um hormônio peptídico multifuncional, produzido principalmente pelo tecido adiposo, possuindo receptores (Ob-Rs) nos órgãos reprodutivos, hipotálamo e hipófise. Os glicocorticóides, como o cortisol, também influenciam diretamente a produção de leptina. A importância desses dois hormônios na atividade reprodutiva tem sido descrita por diversos autores, que observaramo envolvimento de ambos, na melhoria dos índices reprodutivos, seja por sua influência direta no eixo hipotalâmico-hipofisário-gonadal, na maturação dos oócitos ou na preparação uterina para receber o concepto. No entanto, quando em excesso na circulação, podem influênciar negativamente o sistema reprodutivo. Marcadores como a leptina e seu receptor funcional de cadeia longa, estão sendo estudados no endométrio de espécies como humanos, bovinos e suínos, apresentando resultados que correlacionam a diminuição destes, com a infertilidade ou perda embrionária, porém até o momento não foi possível encontrar estudos que abordassem esse tema em equinos. Neste estudo foram avaliados: 1) a presença de leptina (Ob) e seu receptor (Ob-Rb) no endométrio de éguas, observando a influência da obesidade e do ciclo estral nesses marcadores e 2) em uma condição de manejo adverso e estressante, a influência do cortisol intrafolicular, nos níveis de leptina no fluido folicular (FF) e nos marcadores de Ob e Ob-Rb no endométrio durante as fases do ciclo estral. Os resultados demonstraram que existe a presença da leptina e seu receptor (Ob-Rb) no endométrio de equinos, com imunomarcação no epitélio luminal e glandular em todas as fases do ciclo estral avaliadas, apresentando, no entanto, uma marcação imunológica mais intensa nos Ob-Rb (142.68±4.97, P< 0,0001) no epitélio glandular durante o diestro em éguas de escore corporal moderado. Não foi possível observar a influência do aumento do cortisol intrafolicular (FF) nas variáveis avaliadas, pois o cortisol se manteve dentro dos valores fisiológicos para a espécie, no entanto pode-se verificar uma correlação positiva entre os níveis intrafoliculares de cortisol e leptina, estando o cortisol aumentado 8 (30.1±0.07ng/ml, P< 0,05) nos folículos mais próximos a ovulação. Pode-se perceber também, que a marcação imunológica do receptor de leptina no epitélio glandular foi mais intensa (144.52±3.17, P< 0,0001) nos animais que apresentavam folículos até 22 mm, estando a imunomarcação de ambos Ob e Ob-Rb correlacionado de forma negativa (r: -0.7836; P < 0.0001, r:- 0.7343; P < 0.0001), com os níveis de cortisol no FF.Leptin is a multifunctional peptidic hormone, mainly produced by adipose tissue, having receptors (Ob-Rs) in the reproductive organs, hypothalamus and pituitary. Glucocorticoids, such as cortisol, also directly influence leptin production. The importance of these two hormones in reproductive activity has been described by several authors, who observed the involvement of both, in the improvement of reproductive indices, either by their direct influence on the hypothalamic-pituitary-gonadal axis, oocyte maturation or the uterine preparation to receive the concept. However, when in excess in circulation, they can negatively influence the reproductive system. Markers such as leptin and its long-chain functional receptor are being studied in the endometrium of species such as humans, cattle and pigs, presenting results that correlate the decrease of these with infertility or embryonic loss, but to date it has not been possible to find studies to address this issue in horses. In this study we evaluated: 1) the presence of leptin (Ob) and its receptor (Ob-Rb) in the endometrium of mares, observing the influence of obesity and estrous cycle on these markers and 2) in an adverse and stressful management condition, the influence of intrafollicular cortisol, leptin levels in the follicular fluid (FF), and the Ob and Ob-Rb markers in the endometrium during the estrous cycle phases. The results showed that leptin and its receptor (Ob-Rb) are present in the equine endometrium, with immunostaining in the luminal and glandular epithelium in all stages of the estrous cycle evaluated, however, showing a more intense immunological labeling in Ob -Rb (142.68 ± 4.97, P <0.0001) in the glandular epithelium during the diestrous in mares of moderate body score. It was not possible to observe the influence of intrafollicular cortisol (FF) on the variables evaluated, because cortisol remained within the physiological values for the species, however a positive correlation can be observed between intrafollicular cortisol and leptin levels, being the 10 cortisol increased (30.1 ± 0.07ng/ml, P <0.05) in the follicles closest to ovulation. It can also be noticed that the immunological labeling of the leptin receptor in the glandular epithelium was more intense (144.52 ± 3.17, P <0.0001) in the animals that presented follicles up to 22 mm, and the immunostaining of both Ob and Ob-Rb correlated negatively (r: -0.7836; P <0.0001, r: - 0.7343; P <0.0001), with cortisol levels in FF

Morphometric measurements and energy profile of Crioulas mares in the last third of gestation

The objective was to describe the morphometric measurements and energy profile of the Crioula breed mares in the last third of gestation . There were realized 40 observations derived from 10 Crioula breed mares that were performed at the end of gestation, with normal body condition. The morphometric evaluations of mares occurred on the 8th, 9th, 10th and 11th month of gestation. The variables analyzed were: body weight (PC), heart girth (PT), waist circumference (PA), metabolic weight (PM), percentage body fat (GC), height of the crest of the neck ( AC), thickness subcutaneous fat on the base of the tail (EGBC) and retroperitoneal (EGRP). Beyond these assessments were evaluated serum levels of non -esterified fatty acids (NEFA) and triacylglycerides (TAG). This study demonstrated that the Crioula breed mares showed a linear increase of the morphometric variables, also increasing their energy reserves at the end of gestation. Among the sites analyzed fat deposition, the thickness of subcutaneous fat at the base of the tail was demo nstrated the highest increase (P < 0.01). Through the energy profile, was possible to say that animals of this breed showed no negative energy balance in the evaluated months. In the second article, 80 observations derived from 20 Crioulas mares were performed in order to evaluate the energy profile and morphometric characteristics during the last third of gestation. The animals were divided into two groups according to body condition score (BCS). In GrN were pregnant mares, who had BCS 5 or normal, the GrO were mares that had BCS 9 or obese. The energy profile was a nalyzed by serum level NEFA, TAG, leptin and adiponectin. The morphometric evaluations were performed by measuring body weight, thoracic perimeter, waist circumference, metabolic weight, body fat percentage, height of the crest of the neck, fat thickness at the base of the tail and retroperitoneal. The results of morphometric measurements allow us to conclude that in both groups there was weight gain in the last trimester of pregnancy, but the results were more significant in normal body condition mares (GrN). The mares in the control group (GrN) had greater weight gain in the third trimester of gestation, with a significant increase in heart girth, metabolic weight, abdominal circumference in the 12th intercostal space and regional fat accumulation in the base of the tail. On other hand, the animals of the GRO showed an increase only in PA. In the energy profile can be seen that the mares in both groups showed no negative energy balance in relation to the levels of triglycerides and NEFA. Leptin was the variable that best correlated with BCS (p<0,0001), % BF (p<0,0001), happening in GrO an increase in leptin serum levels during the gestation. By the methods used in this study, it was possible the practical evaluation of morphometry of the Crioula breed mares in the last third of gestation, allowing an objective way to identify obese individuals.Sem bolsaO objetivo foi descrever as medidas morfométricas e o perfil energético de éguas da raça Crioula no terço final da gestação. Foram realizadas 40 observações oriundas de 10 éguas da raça Crioula no terço final da gestação, com escore corporal normal . As avaliações morfométricas das éguas ocorreram no 8º, 9º, 10º e 11º mês de gestação. As variáveis analisadas foram: peso corporal (PC), perímetro torácico (PT), circunferência do perímetro abdominal (PA), peso metabólico (PM), porcentagem de gordura corporal (GC), altura da crista do pescoço (AC), espessura de gordura subcutânea na base da cauda (EGBC) e retroperitoneal (EGRP). Além destas avaliações foram avaliados os níveis séricos de ácidos graxos não esterificados (NEFA) e triacilglicerídeos (TAG). Este estudo demonstrou que as éguas da raça Crioula apresentaram um incremento linear das variáveis morfométricas analisadas, aumentando também suas reservas energéticas no terço final da gestação. Dentre os locais de deposição de gordura analisados, a espessu ra de gordura subcutânea na base da cauda foi a que demonstrou maior incremento (P<0,01). Através do perfil energético foi possível afirmar que os animais dessa raça, não apresentaram balanço energético negativo nos meses avaliados. No segundo artigo, foram realizadas 80 observações oriundas de 20 éguas Crioulas, com o intuito de avaliar o perfil energético e as características morfométricas durante o terço final da gestação. Os animais foram divididos em dois grupos conforme o escore corporal (BCS). No GrN estavam as éguas gestantes que apresentavam BCS 5 ou normal, no GrO estavam as éguas que possuíam BCS 9 ou obesas. O perfil energético foi analisado através da concentrações séricas de NEFA, TAG, Leptina e adiponectina. As avaliações morfométricas foram realizadas pelas mensurações do peso corporal, perímetro torácico, circunferência do perímetro abdominal, peso metabólico, porcentagem de gordura corporal, altura da crista do pescoço, espessura de gordura subcutânea na base da cauda e retroperitoneal. Os resultados das mensurações morfométricas nos permitem concluir que em ambos os grupos houve ganho de peso no último trimestre de gestação, porém os resultados foram mais expressivos nas éguas de escore corporal normal (GrN). As éguas do grupo controle (GrN) apresentaram maior ganho de peso no terço final de gestação, havendo um incremento significativo no perímetro torácico, peso metabóli co, perímetro abdominal no 12ºespaço inercostal e no acúmulo regional de gordura na base da cauda. Já os animais do GrO, apresentaram aumento somente no PA. No perfil energético pode-se perceber que as éguas em ambos os grupos não apresentaram balanço energético negativo em relação aos níveis de Triglicerídeos e NEFA. A Leptina foi a variável que melhor se correlacionou com o BCS (P=0.0001), % GC (P=0.0001), havendo no GrO um incremento nos níveis séricos de Leptina com o decorrer da gestação. Através dos métodos utilizados neste trabalho, foi possível a avaliação prática da morfometria das éguas da raça Crioula no terço final da gestação, possibilitando de forma objetiva, a identificação de indivíduos obesos

Metabolic evaluation of Crioulo horses participating in competitions of 750 km

The Crioulo breed of horses performs in one of the most physically demanding equestrian competitions, the Marcha de Resistência, which is a contest in which the horses run 750 km in 15 days. The study's aim was to characterize the metabolic responses during this period. We evaluated eleven Crioulo horses in the competition, specifically, two males and nine females. Blood samples were collected 24 hours before the contest and on the 4th, 9th, 11th, 14th and 15th days of competition. We evaluated CK, AST, LDH, glucose, lactate, urea, creatinine, sodium, potassium, chloride, magnesium, total calcium, ionized calcium, total protein, hematocrit and the white blood cell count. At the end of the competition, the mean values of serum AST were 1151±358 IU/ L the mean LDH values were 7418±1695 IU/L and CK was 13,867±3998UI /L. There was a significant increase in urea, creatinine and lactate (p<0.0001). A decrease in the mean values of chloride, sodium, potassium, and total and ionized calcium was observed (p&#8804;0.0002). An evaluation of the total leukocytes and segmented neutrophils (p&#8804;0.0002) revealed their increased values, and decreased values were observed for hematocrit, plasma protein and total lymphocytes (p&#8804;0.0003). The values of glucose, on average, remained constant. Based on these data, we conclude that the Marcha de Resistência competition necessitated a high muscular demand and the depletion of energy and electrolytes, suggesting an inflammatory process in the animals evaluated

Observation of WWWWWW Production in pppp Collisions at s\sqrt s =13 TeV with the ATLAS Detector

International audienceThis Letter reports the observation of $WWW$ production and a measurement of its cross section using 139 fb$^{-1}$ of proton-proton collision data recorded at a center-of-mass energy of 13 TeV by the ATLAS detector at the Large Hadron Collider. Events with two same-sign leptons (electrons or muons) and at least two jets, as well as events with three charged leptons, are selected. A multivariate technique is then used to discriminate between signal and background events. Events from $WWW$ production are observed with a significance of 8.0 standard deviations, where the expectation is 5.4 standard deviations. The inclusive $WWW$ production cross section is measured to be $820 \pm 100\,\text{(stat)} \pm 80\,\text{(syst)}$ fb, approximately 2.6 standard deviations from the predicted cross section of $511 \pm 18$ fb calculated at next-to-leading-order QCD and leading-order electroweak accuracy

Observation of WWWWWW Production in pppp Collisions at s\sqrt s =13 TeV with the ATLAS Detector

International audienceThis Letter reports the observation of $WWW$ production and a measurement of its cross section using 139 fb$^{-1}$ of proton-proton collision data recorded at a center-of-mass energy of 13 TeV by the ATLAS detector at the Large Hadron Collider. Events with two same-sign leptons (electrons or muons) and at least two jets, as well as events with three charged leptons, are selected. A multivariate technique is then used to discriminate between signal and background events. Events from $WWW$ production are observed with a significance of 8.0 standard deviations, where the expectation is 5.4 standard deviations. The inclusive $WWW$ production cross section is measured to be $820 \pm 100\,\text{(stat)} \pm 80\,\text{(syst)}$ fb, approximately 2.6 standard deviations from the predicted cross section of $511 \pm 18$ fb calculated at next-to-leading-order QCD and leading-order electroweak accuracy