Combretum leprosum Mart. (Combretaceae): Potential as an antiproliferative and anti-inflammatory agent

AbstractEthnopharmacological relevanceCombretum leprosum is a species that is popularly used in Brazil as a healing agent to treat skin problems and lesions. In this study we investigated the possible potential of this extract to treat inflammatory and hyperproliferative skin conditions.Materials and methodsClassical models of skin inflammation such as TPA- and croton oil-induced mouse ear oedema were applied in order to verify the potential topical anti-inflammatory activity of the ethanolic extract from flowers of Combretum leprosum.ResultsTopical application of ethanolic extract promoted a dose-dependent inhibition of phorbol ester-induced ear oedema, reduced myeloperoxidase activity and IL-6 tissue levels with inhibition comparable to dexamethasone (positive control). Histological and immunohistochemical analysis revealed that ethanolic extract also suppressed cell infiltration. Ethanolic extract altered inflammatory parameters on a chronic skin inflammation model induced by repeated applications of croton oil, decreasing ear oedema, epidermal hyperproliferation and cell infiltration. In addition, immunohistochemical analysis showed that the extract decreased PCNA expression on the epidermis.ConclusionTaken together, these results suggest that the extract from flowers of Combretum leprosum could be considered as a new potential tool for the treatment of several skin inflammatory diseases since it reversed the skin inflammatory and hyperproliferative process in a very significant manner. Further investigations are needed in order to verify the cellular mechanism and safety of Combretum leprosum extract

Analysis of the Potential Topical Anti-Inflammatory Activity of Averrhoa carambola L. in Mice

Inflammatory skin disorders, such as psoriasis and atopic dermatitis, are very common in the population; however, the treatments currently available are not well tolerated and are often ineffective. Averrhoa carambola L. (Oxalidaceae) is an Asian tree that has been used in traditional folk medicine in the treatment of several skin disorders. The present study evaluates the topical anti-inflammatory effects of the crude ethanolic extract of A. carambola leaves, its hexane, ethyl acetate, and butanol fractions and two isolated flavonoids on skin inflammation. Anti-inflammatory activity was measured using a croton oil-induced ear edema model of inflammation in mice. Topically applied ethanolic extract reduced edema in a dose-dependent manner, resulting in a maximum inhibition of 73 ± 3% and an ID50 value of 0.05 (range: 0.02–0.13) mg/ear. Myeloperoxidase (MPO) activity was also inhibited by the extract, resulting in a maximum inhibition of 60 ± 6% (0.6 mg/ear). All of the fractions tested caused inhibition of edema formation and of MPO activity. Treatment with the ethyl acetate fraction was the most effective, resulting in inhibition levels of 75 ± 5 and 54 ± 8% for edema formation and MPO activity, respectively. However, treatment of mice with isolated compounds [apigenin-6-C-β-l-fucopyranoside and apigenin-6-C-(2″-O-α-l-rhamnopyranosyl)-β-l-fucopyranoside] did not yield successful results. Apigenin-6-C-(2″-O-α-l-rhamnopyranosyl)-β-l-fucopyranoside caused only a mild reduction in edema formation (28 ± 11%). Taken together, these preliminary results support the popular use of A. carambola as an anti-inflammatory agent and open up new possibilities for its use in skin disorders

Ação anti-inflamatória cutânea de uma planta nativa brasileira : Sapium glandulatum (Vell.) Pax

Orientador : Profª Drª Daniela de Almeida CabriniCo-orientadora : Prof. Dr. Michel Fleith OtukiTese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. Defesa: Curitiba, 25/02/2015Inclui referências : f. 128-146Resumo: As plantas medicinais representam uma fonte de estratégias terapêuticas importante para humanidade devido as suas propriedades curativas, contribuindo de forma significativa na descoberta de novos tratamentos e fármacos. Estudos etnobotânicos do gênero Sapium, revelam que este gênero é amplamente utilizado em vários países como remédios terapêuticos e extensamente utilizado na medicina popular para o tratamento dos mais variados tipos de doenças, inclusive doenças inflamatórias cutâneas. Despertando assim um crescente interesse no estudo das propriedades farmacológicas e na composição fitoquímica destas plantas. A espécie nativa do sul do Brasil, Sapium glandulatum não possui nenhum estudo relatado na literatura sobre suas propriedades biológicas. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi verificar a ação anti-inflamatória do extrato hidroalcoólico das folhas da S. glandulatum (EHSG) frente a processos inflamatórios agudo e crônico da pele. Para isso, o efeito tópico do EHSG foi avaliado nos modelos de edema de orelha agudo e crônico induzidos por 12-?-tetradecanoilforbol-13-acetato (TPA), e o efeito sistêmico foi verificado nos modelos de edema de orelha induzido por TPA e edema de pata induzido por carragenina. O EHSG demonstrou atividade anti-inflamatória quando aplicado pela via tópica nos modelos agudo e crônico, inibindo a formação de edema, com forte inibição da migração leucocitária para o local inflamado, e reduzindo os níveis das citocinas pró-inflamatórias IL-1?, IL-6 e TNF-? no tecido inflamado. O mesmo efeito anti-inflamatório foi demonstrado pelo tratamento pela via oral nos modelos de edema de orelha e de pata, reduzindo a formação de edema e migração celular, no entanto, não tão eficaz quanto o tratamento tópico. Avaliamos também a interação do EHSG com receptores de glicocorticóides (GR) utilizando o modelo de edema de orelha induzido por TPA e o pré-tratamento com o antagonista do GR, mifepristona, e o ensaio de ligação específica da [3H]-dexametasona. O EHSG demonstrou promover seus efeitos anti-inflamatórios, pelo menos em parte, pela via de GR, visto que a ação do extrato foi revertida na migração leucocitária pela mifepristona, e comprovada pelo ensaio de ligação específica. Ainda, ao avaliar a ação do múltiplo tratamento com EHSG no modelo de atrofia cutânea e teste de genotoxicidade, este não apresentou efeitos adversos nas orelhas dos animais e também não promoveu alterações cromossômicas nas células da medula óssea dos animais. A ação do EHSG também foi verificada em linhagens de queratinócitos epidérmicos HaCaT e macrófagos RAW 264.7, avaliando seu efeito citotóxico pelos ensaios de MTT e vermelho neutro em ambas as linhagens, e seu efeito proliferativo, no burst respiratório, na função fagocítica e de ativação de macrófagos. O extrato não apresentou citotoxicidade em baixas concentrações para os queratinócitos e macrófagos, porém induziu a proliferação dos macrófagos no ensaio de cristal violeta e ativação alternativa (não-clássica) destas células, alterando a morfologia normal, diminuindo a função fagocítica e a liberação da citocina próinflamatória TNF-?. Em conclusão, o EHSG é uma potente ferramenta antiinflamatória para o tratamento de doenças de pele, e o seu mecanismo de ação pode ser, pelo menos em parte, através de via de GR. Palavras chaves: Sapium glandulatum, Plantas Medicinais, Pele, Inflamação de pele, Macrófagos, Glicocorticóides.Abstract: Medicinal plants represent an important source of therapeutic strategies for humanity due to its healing properties, making a significant contribution in the discovery of new treatments and drugs. Ethnobotanical studies of Sapium gender reveal that many species are widely used in several countries as therapeutic drugs and widely used in folk medicine for treatment of different diseases, including skin inflammation. Thus rising an increasing interest to study the pharmacological properties and phytochemical composition of these plants. Sapium glandulatum, a native species of southern Brazil, has no study reported in the literature about its biological properties. So, the aim of this study was investigate the anti-inflammatory action of hydroalcoholic extract of leaves of S. glandulatum (EHSG) against acute and chronic skin inflammation. For this, the topical effect of EHSG was evaluated in models of acute and chronic ear edema induced by 12-O-Tetradecanoylphorbol-13- acetate (TPA), and systemic effect was observed on TPA-induced ear edema model and paw edema induced by carrageenan. EHSG demonstrated anti-inflammatory activity when applied topically in acute and chronic models, inhibiting edema formation, with a strong inhibition of leukocyte migration and reducing levels of proinflammatory cytokines IL-1?, IL-6 and TNF-? in the inflamed tissue. The same antiinflammatory effect was demonstrated for oral treatment in ear and paw edema models by reducing edema and cellular migration, however, not as effective as topical route. We also evaluated the EHSG interaction of glucocorticoid receptors (GR) using ear edema model induced by TPA and pretreatment with GR antagonist (mifepristone), and the specific binding assay of [3H]-dexamethasone. The extract action in leukocyte migration was reversed by mifepristone, and interaction with GR was verified by specific binding assay. Even, when evaluated the effects of multiple treatment with EHSG on skin atrophy model and genotoxicity test, it showed no adverse effects on animal ears and did not promote chromosomal changes in bone marrow cells. EHSG action was also verified using the cell line of epidermal keratinocytes HaCaT and macrophages RAW 264.7, assessing their cytotoxic effect by MTT and neutral red assay in both strains, and proliferative effect in burst respiratory, phagocytic function and activation in macrophages. Extract did not show cytotoxicity at lower concentrations for keratinocytes and macrophages, but induced proliferation of macrophages in crystal violet assay and promoted alternative activation (non-classical) of these cells, altering the normal morphology, reducing phagocytic function and the release of the pro-inflammatory cytokine TNF-?. In conclusion, EHSG is a potential anti-inflammatory tool for the treatment of skin diseases, and its mechanism of action may be, at least in part, via GR pathway. Keywords: Sapium glandulatum, Medicinal Plants, Skin, Skin inflammation, Macrophages, Glucocorticoids

Participação do óxido nítrico no fenômeno de hiperproliferação da epiderme em camundongos

Resumo: Muitos autores relataram uma significativa participacao do oxido nitrico (NO) no processo de proliferacao dos queratinocitos, porem com muitas divergencias. Para determinar o envolvimento do NO no processo de hiperproliferacao da epiderme in vivo, foram usados: um inibidor nao seletivo (LNAME) de oxido nitrico sintase (NOS); inibidores seletivos para iNOS e nNOS (AG e 7-NI, respectivamente); e um doador de NO (SNP). Os tratamentos foram aplicados topicamente, duas vezes por dia, na orelha de camundongos tratados pela multipla aplicacao de oleo de croton. A aplicacao do L-NAME foi capaz de diminuir o edema a partir do 1o dia de tratamento e SNP foi capaz de aumentar a formacao do edema de orelha a partir do 3o dia. Os resultados obtidos mostram que os tratamentos com AG e 7-NI nao foram capazes de alterar a formacao do edema. Ao final do tratamento, houve uma reducao no peso das orelhas nos grupos que receberam LNAME (16,9 } 4,8%), 7-NI (18,3 } 9,1%) e dexametasona (43,8 } 2,0%), enquanto a AG e SNP apresentaram aumento de peso, 24,9 } 5,7 e 22,0 } 9,2%, respectivamente, quando comparados ao grupo controle (24,3 } 1,4 mg). A analise histologica mostrou que todos os inibidores foram capazes de impedir o aumento na espessura da epiderme em 28,2 } 5,3% (L-NAME), 20,7 } 5,3% (AG) e 20,5 } 3,4% (7-NI), assim como a dexametasona (53,5 } 3,5%). Ja o SNP contribuiu para ampliar a espessura da epiderme em 35,6 } 5,7%. Resultados semelhantes foram observados na marcacao da proteina PCNA por imunohistoquimica, onde houve uma reducao no numero de celulas em proliferacao nos tratamentos com L-NAME (57,3 } 3,9 celulas/campo), AG (73,3 } 2,7 celulas/campo) e dexametasona (37,0 } 1,8 celulas/campo). No entanto, o tratamento com SNP (100,8 } 6,7 celulas/campo) promoveu uma maior proliferacao dos queratinocitos da epiderme. O tratamento com 7-NI nao mostrou nenhuma alteracao no numero de queratinocitos em proliferacao quando comparado ao grupo controle (87,1 } 6,8 celulas/campo). O tratamento com AG aumentou a atividade das enzimas Mieloperoxidase e N-acetil-ƒÀ-Dglucosaminidase, 52,8 } 23,9% e 16,35 } 6,3% respectivamente, indicando aumento na migracao de leucocitos polimorfonucleares e celulas mononucleares em comparacao ao grupo controle. A aplicacao do 7-NI reduziu apenas a migracao de celulas mononucleares em 14,6 } 6,1%, enquanto o tratamento com SNP eforcou a migracao de polimorfonucleares em 74,4 } 47,9%. Portanto, baseado nos resultados encontrados, sugerimos que o NO produzido principalmente pela isoforma iNOS, contando tambem com a contribuicao da isoforma nNOS, esta envolvido no controle da hiperproliferacao dos queratinocitos da epiderme na pele de camundongos. Alem disso, no modelo animal de inflamacao cronica cutanea por oleo de croton, o NO esta envolvido na exsudacao e migracao de leucocitos, com a provavel participacao de todas as tres isoformas da enzima

Ação anti-inflamatória cutânea de uma planta nativa brasileira : Sapium glandulatum (Vell.) Pax

Orientador : Profª Drª Daniela de Almeida CabriniCo-orientadora : Prof. Dr. Michel Fleith OtukiTese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. Defesa: Curitiba, 25/02/2015Inclui referências : f. 128-146Resumo: As plantas medicinais representam uma fonte de estratégias terapêuticas importante para humanidade devido as suas propriedades curativas, contribuindo de forma significativa na descoberta de novos tratamentos e fármacos. Estudos etnobotânicos do gênero Sapium, revelam que este gênero é amplamente utilizado em vários países como remédios terapêuticos e extensamente utilizado na medicina popular para o tratamento dos mais variados tipos de doenças, inclusive doenças inflamatórias cutâneas. Despertando assim um crescente interesse no estudo das propriedades farmacológicas e na composição fitoquímica destas plantas. A espécie nativa do sul do Brasil, Sapium glandulatum não possui nenhum estudo relatado na literatura sobre suas propriedades biológicas. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi verificar a ação anti-inflamatória do extrato hidroalcoólico das folhas da S. glandulatum (EHSG) frente a processos inflamatórios agudo e crônico da pele. Para isso, o efeito tópico do EHSG foi avaliado nos modelos de edema de orelha agudo e crônico induzidos por 12-?-tetradecanoilforbol-13-acetato (TPA), e o efeito sistêmico foi verificado nos modelos de edema de orelha induzido por TPA e edema de pata induzido por carragenina. O EHSG demonstrou atividade anti-inflamatória quando aplicado pela via tópica nos modelos agudo e crônico, inibindo a formação de edema, com forte inibição da migração leucocitária para o local inflamado, e reduzindo os níveis das citocinas pró-inflamatórias IL-1?, IL-6 e TNF-? no tecido inflamado. O mesmo efeito anti-inflamatório foi demonstrado pelo tratamento pela via oral nos modelos de edema de orelha e de pata, reduzindo a formação de edema e migração celular, no entanto, não tão eficaz quanto o tratamento tópico. Avaliamos também a interação do EHSG com receptores de glicocorticóides (GR) utilizando o modelo de edema de orelha induzido por TPA e o pré-tratamento com o antagonista do GR, mifepristona, e o ensaio de ligação específica da [3H]-dexametasona. O EHSG demonstrou promover seus efeitos anti-inflamatórios, pelo menos em parte, pela via de GR, visto que a ação do extrato foi revertida na migração leucocitária pela mifepristona, e comprovada pelo ensaio de ligação específica. Ainda, ao avaliar a ação do múltiplo tratamento com EHSG no modelo de atrofia cutânea e teste de genotoxicidade, este não apresentou efeitos adversos nas orelhas dos animais e também não promoveu alterações cromossômicas nas células da medula óssea dos animais. A ação do EHSG também foi verificada em linhagens de queratinócitos epidérmicos HaCaT e macrófagos RAW 264.7, avaliando seu efeito citotóxico pelos ensaios de MTT e vermelho neutro em ambas as linhagens, e seu efeito proliferativo, no burst respiratório, na função fagocítica e de ativação de macrófagos. O extrato não apresentou citotoxicidade em baixas concentrações para os queratinócitos e macrófagos, porém induziu a proliferação dos macrófagos no ensaio de cristal violeta e ativação alternativa (não-clássica) destas células, alterando a morfologia normal, diminuindo a função fagocítica e a liberação da citocina próinflamatória TNF-?. Em conclusão, o EHSG é uma potente ferramenta antiinflamatória para o tratamento de doenças de pele, e o seu mecanismo de ação pode ser, pelo menos em parte, através de via de GR. Palavras chaves: Sapium glandulatum, Plantas Medicinais, Pele, Inflamação de pele, Macrófagos, Glicocorticóides.Abstract: Medicinal plants represent an important source of therapeutic strategies for humanity due to its healing properties, making a significant contribution in the discovery of new treatments and drugs. Ethnobotanical studies of Sapium gender reveal that many species are widely used in several countries as therapeutic drugs and widely used in folk medicine for treatment of different diseases, including skin inflammation. Thus rising an increasing interest to study the pharmacological properties and phytochemical composition of these plants. Sapium glandulatum, a native species of southern Brazil, has no study reported in the literature about its biological properties. So, the aim of this study was investigate the anti-inflammatory action of hydroalcoholic extract of leaves of S. glandulatum (EHSG) against acute and chronic skin inflammation. For this, the topical effect of EHSG was evaluated in models of acute and chronic ear edema induced by 12-O-Tetradecanoylphorbol-13- acetate (TPA), and systemic effect was observed on TPA-induced ear edema model and paw edema induced by carrageenan. EHSG demonstrated anti-inflammatory activity when applied topically in acute and chronic models, inhibiting edema formation, with a strong inhibition of leukocyte migration and reducing levels of proinflammatory cytokines IL-1?, IL-6 and TNF-? in the inflamed tissue. The same antiinflammatory effect was demonstrated for oral treatment in ear and paw edema models by reducing edema and cellular migration, however, not as effective as topical route. We also evaluated the EHSG interaction of glucocorticoid receptors (GR) using ear edema model induced by TPA and pretreatment with GR antagonist (mifepristone), and the specific binding assay of [3H]-dexamethasone. The extract action in leukocyte migration was reversed by mifepristone, and interaction with GR was verified by specific binding assay. Even, when evaluated the effects of multiple treatment with EHSG on skin atrophy model and genotoxicity test, it showed no adverse effects on animal ears and did not promote chromosomal changes in bone marrow cells. EHSG action was also verified using the cell line of epidermal keratinocytes HaCaT and macrophages RAW 264.7, assessing their cytotoxic effect by MTT and neutral red assay in both strains, and proliferative effect in burst respiratory, phagocytic function and activation in macrophages. Extract did not show cytotoxicity at lower concentrations for keratinocytes and macrophages, but induced proliferation of macrophages in crystal violet assay and promoted alternative activation (non-classical) of these cells, altering the normal morphology, reducing phagocytic function and the release of the pro-inflammatory cytokine TNF-?. In conclusion, EHSG is a potential anti-inflammatory tool for the treatment of skin diseases, and its mechanism of action may be, at least in part, via GR pathway. Keywords: Sapium glandulatum, Medicinal Plants, Skin, Skin inflammation, Macrophages, Glucocorticoids

Rhamnogalacturonan from Acmella oleracea (L.) R.K. Jansen: gastroprotective and ulcer healing properties in rats.

A rhamnogalacturonan (RGal) isolated from Acmella oleracea (L.) R.K. Jansen administered by oral route showed gastroprotective activity against acute lesions induced by ethanol. In this study, we investigated the gastric ulcer healing effect of RGal and its mechanisms of action. Intraperitoneal treatment of animals with RGal protected the gastric mucosa against acute lesions induced by ethanol, with participation of gastric mucus. Furthermore, in the chronic ulcer model, oral administration of RGal accelerates the gastric ulcer healing, accompanied by increasing of cellular proliferation and gastric mucus content, reducing inflammatory parameters and oxidative stress. In addition, the repeated 7 days-treatment of animals with RGal did not show alterations of clinical and behavioral symptoms, body and organs weights or plasmatic biochemical parameters. Collectively, these results showed that RGal has an interesting antiulcerogenic activity and could constitute an attractive molecule of interest for the development of new antiulcer agents

Effect of intraduodenal (i.d.), oral (p.o.) and intraperitoneal (i.p.) administration of RGal on volume and total acidity on pylorus ligature in rats.

<p>The results were expressed as mean±S.E.M. and statistical comparison was performed using ANOVA followed by Bonferronís test. * P<0.05 when compared with the control group.</p

Effect of RGal on the immunohistochemical staining for PCNA in chronic gastric ulcer induced by 80% acetic acid in rats.

<p>Photomicrographs represent PCNA immunoreactivity of groups orally treated with vehicle (water, 1 ml/kg; Panels A and D), omeprazole (40 mg/kg; Panels B and E) or RGal (10 mg/kg; Panels C and F) twice a day for seven days after the gastric ulcer induction. Panels A-C: magnification = 7×, bars = 500 µm; Panels D-F: magnification = 100×, bars = 50 µm.</p

Effect of RGal on the ability to scavenge the free-radical DPPH <i>in vitro</i>.

<p>The figure shows the scavenging of DPPH radical by RGal (1, 10, 100 and 1000 µg/ml) or ascorbic acid (AA, 50 µg/ml) <i>in vitro</i>. The results are expressed as mean±S.E.M. (<i>n</i> = 8). ANOVA followed by Bonferroni's test. <b>*</b><i>P</i><0.05 when compared to control group (C).</p