Determinação de cocaína em cédulas monetárias e mãos usando cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas e eletroforese capilar por detecção UV

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas, Programa de Pós-Graduação em Química, Florianópolis, 2014.Esta tese de doutorado foi motivada pela preocupação com os riscos à saúde de pessoas que diariamente estão em contato com grandes volumes de dinheiro contaminado com cocaína, fato que se estendeu à população em geral ao longo deste trabalho. Sendo assim, foram desenvolvidos dois métodos analíticos para a determinação de cocaína em cédulas monetárias, o primeiro utilizou a técnica de eletroforese capilar com detecção UV (CE-UV) para a análise das cédulas monetárias circulantes na cidade de Florianópolis/SC; o segundo método desenvolvido foi utilizando a técnica de LC-MS/MS para a determinação de cocaína em 60 cédulas monetárias provenientes das cidades de Florianópolis/SC, São Paulo/SP, Rio de Janeiro/RJ, Juiz de Fora/MG, Fortaleza/CE e Baltimore/USA. Ambos os métodos apresentaram bons parâmetros de validação, tais como: linearidade, r = 0,9997 (CE-UV) e 0,9998 (LC-MSMS); LD = 0,2 mg L-1 (CE-UV) e 0,22 µg L-1 (LC-MSMS); LQ = 0,8 mg L-1 (CE-UV) e 0,5 µg L-1 (LC-MSMS); precisão instrumental (área do pico, n = 10), CV = 0,3% (CE-UV) e CV = 5,9% (LC-MSMS); precisão intra-ensaio (área do pico, n = 6), CV = 3,0% (CE-UV) e CV 6,5% (LC-MSMS); precisão intermediária (área do pico), CV 4,5% (CE-UV) e CV 8,5% (LC-MSMS). Além destes parâmetros, foram avaliados a conformidade do sistema, seletividade, robustez, exatidão e efeito de matriz e todos se mostraram satisfatórios. O método por CE-UV tem a vantagem de usar um procedimento de preparo de amostra simples que consiste na extração com acetonitrila e sonicação e, além disso, esta metodologia permitiu a determinação de cocaína em menos de 2,5 min. De 30 notas obtidas diretamente da circulação em geral, a cocaína foi detectada em 28 amostras (93%). Em ensaios preliminares ao desenvolvimento do método por LC-MSMS foram identificadas a presença de lidocaína e cafeína nas cédulas monetárias que passaram a ser também objetos do estudo. Este método tem a vantagem de usar água como solvente extrator o que é bastante adequado pela sua atoxicidade, baixo custo e por não provocar danos nas marcas de segurança das notas. Entre as cinco cidades brasileiras, as cidades que apresentaram a menor e a maior quantidade média de cocaína por nota foram Fortaleza (14,6 µg/nota) e Rio de Janeiro (120,3 µg/nota), espectivamente. A cidade que apresentou as menores quantidades de cafeína e lidocaína também foi Fortaleza, sendo que foram detectados 2,0 µg/nota de lidocaína e 19,7 µg/nota de cafeína nas amostras desta cidade. Em contrapartida, a cidade em que foram encontradas as maiores quantidades médias de cafeína e lidocaína por nota foi São Paulo 39,7 µg de lidocaína e 210,9 µg de cafeína. O método desenvolvido para a determinação de cocaína em cédulas monetárias utilizando LC-MS/MS foi aplicado na análise de urina e das mãos, sendo que a cocaína foi extraída das mãos pela simples submersão em um recipiente com água por 5 min. Dos 98 extratos de mãos, 90 eram da população em geral e 8 de bancários cujas urinas também foram analisadas. Foi detectada cocaína em 49% das amostras e nas mãos dos bancários foi encontrada quantidade muito semelhante à da população em geral, logo não se encontrou cocaína ou um de seus metabólitos nas amostras de urina desses participantes. Nesta tese também foi desenvolvido um estudo para demonstrar que a cocaína extraída de uma cédula monetária permeia pela pele, fato comprovado pelos cálculos dos parâmetros de permeabilidade: fluxo constante, tempo de latência e coeficiente de permeabilidade. Entretanto, este fato não oferece riscos a pessoas que manuseiam um grande volume de dinheiro diariamente, pois a quantidade de cocaína passada das notas de dinheiro para as mãos é tão pequena, que mesmo que seja permeada, não trará prejuízos à saúde da pessoa.This thesis was motivated by concern for the health risks of people who are in daily contact with large volumes of money contaminated with cocaine, a fact that has spread to the population in general throughout this work. Thus, two analytical methods for determination of cocaine in banknotes were developed. The first used capillary electrophoresis with UV detection (CE - UV) for the analysis of banknotes in circulation at Florianópolis/ SC. The second method was developed using the technique of LC-MS/MS for the determination of cocaine in 60 banknotes from Florianópolis/ SC, Sao Paulo/SP, Rio de Janeiro/RJ, Juiz de Fora/MG, Fortale- za/CE and Baltimore/USA. Both methods showed good validation parameters, such as linearity r = 0.9997 (CE-UV) and 0.9998 (LCMSMS); LD = 0.2 mg L-1 (CE-UV) and 0.22 µg L-1 (LC-MSMS); LQ = 0.8 mg L-1 (CE-UV) and 0.5 µg L-1 (LC-MSMS); instrumental precision (peak area, n = 10), CV = 0.3 % (CE - UV) and CV = 5.9% (LC Â MSMS); Intra-assay precision (peak area, n = 6) CV = 3.0% (CE - UV) and CV 6.5 % (LC - MSMS); intermediate precision (peak area), CV 4.5 % (CE - UV) and CV 8.5 % (LC - MSMS). Besides these parameters, these methods were evaluated to system suitability, selectivity, robustness, accuracy and matrix effects and they all showed satisfactory results. The method by CE - UV has the advantage of using a simple procedure for sample preparation that consists of extracting with acetonitrile and sonication, and furthermore, this methodology allowed the determination of cocaine in less than 2.5 min. From 30 banknotes obtained directly from the general circulation, cocaine was detected in 28 samples (93 %). In preliminary development of LC - MSMS method it was found the presence of lidocaine and caffeine in banknotes that also began to be objects of the study. This method has the advantage of using water as extracting solvent that is quite suitable for their low toxicity, low cost and do not cause damage to the security features of the notes. Among the five Brazilian cities, the cities that had the lowest and the highest average amount of cocaine per note were Fortaleza (14.6 µg/note) and Rio de Janeiro (120.3 µg/note), respectively. The city that had the lowest amounts of caffeine and lidocaine was also Fortaleza, and 2.0 µg/note lidocaine and 19.7 µg/note caffeine were detected in the samples of this city. In contrast, the city where the highest average amounts of caffeine and lidocaine were found per note was Sao Paulo with 39.7 µg of lidocaine and 210.9 µg of caffeine, respectively. The method developed for the determination of cocaine in banknotes using LC-MS/MS was applied to the analysis of urine and hands, and cocaine was extracted by simple immersion of the hands in a container with water for 5 min. From 98 extracts of hands, 90 were from the general population and 8 from bank employees whose urines were also analyzed. Cocaine was detected in 49 % of the samples and the quantity of bank employees hands it was very similar to the general population, because of this cocaine or its metabolites were not found in urine of these subjects. In this thesis, a study was also designed to demonstrate that cocaine extracted from a monetary banknote permeates the skin, checked by calculations of the permeability parameters: constant flux, lag time and permeability coefficient. However, this fact does not present risks to persons who handle a large volume of money every day, because the amount of cocaine passed from the notes into the hands is so small that even if it is permeated, will not bring harm to the health of the person.<br

Eletroforese capilar aplicada ao estudo de adulterações em amostras de uísques

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas, Programa de Pós-Graduação em Química, Florianópolis, 2010Neste trabalho, foram desenvolvidas três metodologias analíticas utilizando eletroforese capilar com a finalidade de diferenciar uísques autênticos de amostras apreendidas por suspeita de falsificação, cedidas pela Polícia Técnico-Científica do Estado de São Paulo. O primeiro capítulo trata da determinação simultânea dos aldeídos fenólicos: vanilina, seringaldeído, coniferaldeído e sinapaldeído. Estratégias de pré-concentração "on-line" ("stacking") foram desenvolvidas para melhorar a detectabilidade do método para determinação destes compostos. Os valores de R² foram maiores que 0,99 para os métodos sem e com pré-concentração (respectivamente denominados, NSM e SWMR42). A razão sinal/ruído (S/N) de 3 e 10 foram consideradas para estimar o LD e o LQ. Estes valores foram 100 ?g L-1 e 330 ?g L-1; 22 ?g L-1 e 73 ?g L-1 para NSM e SWMR42, respectivamente. Das 30 amostras analisadas, 14 apresentaram os aldeídos fenólicos estudados abaixo do limite de detecção. O segundo capítulo se refere ao desenvolvimento de um método para determinação dos açúcares frutose, glicose e sacarose e, neste estudo, foi utilizado um planejamento fatorial de 2 níveis e 3 variáveis para otimizar os parâmetros instrumentais de temperatura do cartucho, tempo de injeção e voltagem. As curvas de calibração indicaram boa linearidade na faixa de aplicação utilizada (50 a 500 mg L-1), assim como, boa correlação entre a área dos picos e a concentração dos açúcares e os coeficientes de determinação foram superiores a 0,99 para os três analitos. Quanto aos parâmetros de LD e LQ, estes foram de 68,42 e 228,06 mg L-1, respectivamente. O terceiro capítulo se destina à determinação dos ácidos alifáticos: acético, fórmico, láctico e glicólico. Nesta etapa, foram utilizados softwares de simulação para otimizar a composição do eletrólito de corrida. As curvas de calibração para os quatro ácidos apresentaram coeficientes de determinação maiores que 0,99. Os parâmetros de LD e LQ foram melhores que 12,50 e 41,70 mg L-1, respectivamente. A análise por componentes principais possibilitou a distinção entre os uísques autênticos envelhecidos 8 e 12 anos, assim como, a diferenciação entre as amostras autênticas e suspeitas, com base na concentração encontrada para os analitos. Os resultados obtidos nas três análises demonstraram a aplicabilidade da eletroforese capilar na identificação de amostras falsificadas de uísque

Impregnation of Chitosan Microspheres with the Natural Dye Curcuma

The purpose of this study was to investigate the impregnation of chitosan microspheres with the natural dye curcuma. The impregnation with curcuma dye was investigated in aqueous medium at pH 9.0, 9.5 and 10.0. The process of impregnation was monitored using capillary electrophoresis analysis which was carried out to observe the presence of dye in the impregnated microspheres. The microspheres loaded with dye at pH 10.0 were evaluated by infrared spectroscopy, optical microscopy, scanning electron microscopy and thermal analysis. The dye was impregnated in the chitosan microspheres through an adsorption process and was released when placed in contact with acidic solutions at pH 1.0-5.0. The dye was released from the chitosan in less than 3 h, regardless of the pH, although most of the microspheres dissolved within 1 h. The release mechanism followed the Super Case II transport release model.Colegio de Farmacéuticos de la Provincia de Buenos Aire

Development of a fast capillary electrophoresis method for the determination of propranolol-Total analysis time reduction strategies

The aim of this study was to develop a fast capillary electrophoresis method for the determination of propranolol in pharmaceutical preparations. In the method development the pH and constituents of the background electrolyte were selected using the effective mobility versus pH curves. Benzylamine was used as the internal standard. The background electrolyte was composed of 60 mmol L(-1) tris(hydroxymethyl)aminomethane and 30 mmol L(-1) 2-hydroxyisobutyric acid,at pH 8.1. Separation was conducted in a fused-silica capillary (32 cm total length and 8.5 cm effective length, 50 mu m I.D.) with a short-end injection configuration and direct UV detection at 214 nm. The run time was only 14 s. Three different strategies were studied in order to develop a fast CE method with low total analysis time for propranolol analysis: low flush time (Lflush) 35 runs/h, without flush (Wflush) 52 runs/h, and Invert (switched polarity) 45 runs/h. Since the three strategies developed are statistically equivalent, Mush was selected due to the higher analytical frequency in comparison with the other methods. A few figures of merit of the proposed method include: good linearity (R(2) > 0.9999); limit of detection of 0.5 mg L(-1): inter-day precision better than 1.03% (n = 9) and recovery in the range of 95.1-104.5%. (C) 2009 Elsevier B.V. All rights reserved.INCT cataliseINCT-CataliseConselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)CNPq Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientifico a Tecnologico[576230/2008-1]CNPq Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientifico a Tecnologico[473689/2007-3]Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)CNPq Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientifico a Tecnologico[476386/2007-1]Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)CNPq Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientifico a Tecnologico[300593/2008-2]Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)Fundacao de Amparo a Pesquisa do Estado de Santa Catarina (FAPESC)Fundacao de Amparo a Pesquisa do Estado de Santa Catarina (FAPESC)Fundacao de Amparo a Pesquisa do Estado de Sao Paulo (FAPESP)Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)Fundacao de Amparo A Pesquisa do Estado de Minas Gerais of BrazilFundacao de Amparo A Pesquisa do Estado de Minas Gerais of Brazil[FAPEMIG-CEX-APQ 1906-502/07]Fundacao de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais of Brazil (FAPEMIG)Fundacao de Amparo A Pesquisa do Estado de Minas Gerais of Brazil (FAPEMIG)[CEX APQ 01837/08]Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)Coordenacao de Aperfeicoamento de Pessoal de Nivel Superior (CAPES)Farma Service BioextractFarma Service Bioextrac

CDK6 Degradation Is Counteracted by p16^INK4A and p18^INK4C in AML

Cyclin-dependent kinase 6 (CDK6) represents a novel therapeutic target for the treatment of certain subtypes of acute myeloid leukaemia (AML). CDK4/6 kinase inhibitors have been widely studied in many cancer types and their effects may be limited by primary and secondary resistance mechanisms. CDK4/6 degraders, which eliminate kinase-dependent and kinase-independent effects, have been suggested as an alternative therapeutic option. We show that the efficacy of the CDK6-specific protein degrader BSJ-03-123 varies among AML subtypes and depends on the low expression of the INK4 proteins p16INK4A and p18INK4C. INK4 protein levels are significantly elevated in KMT2A-MLLT3+ cells compared to RUNX1-RUNX1T1+ cells, contributing to the different CDK6 degradation efficacy. We demonstrate that CDK6 complexes containing p16INK4A or p18INK4C are protected from BSJ-mediated degradation and that INK4 levels define the proliferative response to CDK6 degradation. These findings define INK4 proteins as predictive markers for CDK6 degradation-targeted therapies in AML