Evaluación de formulaciones inmunoterapéuticas experimentales en el modelo hibrido murino de Reaccion del Injerto contra el Hospedador

Introduction: Graft-versus-host disease is the most frequent complication of Hematopoietic Stem Cell Transplants and all transplants containing allogeneic immunocompetent cells; 100% of patients suffer from this complication and about 30% die for this particular cause. A high proportion of cases are steroid-refractory; likewise, other modern immunosuppressive measures fail. In the fields of Immunotherapy and Vaccinology, there is also a worrying shortage of powerful, effective, safe and broad spectrum immunomodulators of biological origin. There is a hybrid murine model of great methodological utility for experimental studies.Objective: To evaluate two novel formulations of biotechnological origin: an immunopotentiator formulation and an immunosuppressive one, which were developed as cochleates.Material and Methods: The formulations assayed by Electron Microscopy and RT-PCR were characterized as nanoparticles and for their capacity to regulate lymphokine mRNA expression profile, respectively.  The immunomodulatory character was evaluated in vivo using Graft-versus-host disease in (CBAxC57BL) F1 hybrid mice.Results: Starting from the proteoliposomes derived from Neisseria meningitides, two cochleate formulations were obtained, both with particle diameters below 100 nm. Formulation 1 showed a proinflammatory profile with potent capacity to increase IFNγ and TNFα, and potentiated the Spleen Index up to 2.05 in the GVDH model with p = 0.0002. Formulation 2 showed a suppressor/regulatory profile with potent capacity to increase IL-10 and TGFβ and suppress the production of TNFα. In the model used, this formulation suppressed the Spleen Index in a dose-dependent manner with high statistical significance. The known safety profile and absence of reactogenicity of both formulations was corroborated.Conclusions: Both formulations have potential application in the fields of GVHD therapy and other pathologies as well as in Vaccinology.  The results obtained in the present work suggest the usefulness to continue with the pharmaceutical development and complete the preclinical studies of both formulations.Introducción: La Enfermedad del Injerto Contra el Hospedador es la complicación más frecuente de los Trasplantes de Células Madre Hematopoyéticas y de todos los trasplantes que contengan células inmunocompetentes alogénicas, el 100 % la padecen y cerca del 30 % mueren por su causa; una proporción alta de casos son esteroide-refractarios, asimismo otras medidas inmunosupresoras modernas fracasan. En los campos de la Inmunoterapia y la Vaccinología también existe una escasez preocupante de inmunomoduladores de origen biológico potentes, efectivos, seguros y de amplio espectro. Existe un modelo híbrido murino de gran utilidad metodológica para estudios experimentales.Objetivo: Evaluar dos formulaciones novedosas de origen biotecnológico, una de ellas inmunopotenciadora y otra inmunosupresora, desarrolladas como cocleatos.Material y Métodos: Mediante Microscopia Electrónica y RT-PCR se caracterizaron las formulaciones como nanopartículas y su capacidad de regular la expresión del ARNm de linfoquinas definitorias de sus perfiles, respectivamente. Empleando el modelo de Enfermedad del Injerto Contra el Hospedador en ratón híbrido F1 (CBAxC57BL), se evaluó su carácter inmunomodulador in vivo.Resultados: Partiendo de los proteoliposomas de Neisseria meningitidis, se obtuvieron dos formulaciones en forma de cocleatos, ambas con diámetros de partícula inferior a 100nm. La Formulación 1mostró un perfil proinflamatorio con potente capacidad de aumentar el IFNγ y el TNFα y potenció el Índice de Bazo hasta 2,05 en el modelo EICH con p=0,0002. La Formulación 2 mostró un perfil supresor-regulatorio con potente capacidad de aumentar la IL-10 y el TGFβ y además de suprimir la producción de TNFα. En el modelo usado, esta formulación, suprimió el Índice de Bazo de manera dosis dependiente y con alta significación estadística. Se corroboró el conocido perfil de seguridad y ausencia de reactogenicidad de ambas formulaciones.Conclusiones: Ambas formulaciones tienen potencial aplicación en los campos de la terapia de Enfermedad del Injerto Contra el Hospedador en otras patologías y en Vaccinología. Los resultados obtenidos en el presente trabajo fundamentan la conveniencia de continuar el desarrollo farmacéutico y completar la preclínica de ambas formulaciones

Immunogenicity and protection induced in mouse by polysaccharide VI of Salmonella typhi

Se evaluaron diferentes esquemas de inmunización con el preparado vacunal cubano contra Salmonella typhi (polisacárido Vi) en ratones, con el objetivo de determinar su posible influencia para su empleo en humanos. Cuatro esquemas fueron ensayados, utilizando dos vías de inmunización, la Subcutánea (SC) y la Intramuscular (DI), con 1 y 2 dosis a intervalos de 7 y 14 días entre ellas. La dinámica de anticuerpos se determiaó mediante un ensayo inmunoenzimático. Los niveles de anticuerpos obtenidos en cada ensayo fueron similares. La inmunizadón confirió niveles de protecdón de un 70% en todos los esquemas utilizados, por lo que el esquema de inmunización para humano de 1 dosis por vía IM ó SC puede ser empleadoDifferent immunization schemes with the Cuban vaccine preparation against Salmonella typhi (Polysaccharide Vi) were evaluated in mice, in order to determinate the possible influence for human use. Four immunization schemes were used: two different route of immunization, subcutaneous (SC) and intramuscular (M), with 1 or 2 doses with intervals 7 or 14 days between them. Total antibodies to polysaccharide Vi of Salmonella typhi were measured by an immunoenzymatic assay. The immunogenicity levels were similar for all schemes. The vaccine provided protection level of 70%. According to this results we propose the immunization human schemes of one doses of polysaccharide administered by IM o SC route.Colegio de Farmacéuticos de la Provincia de Buenos Aire

Immunogenicity and protection induced in mouse by polysaccharide VI of Salmonella typhi

Se evaluaron diferentes esquemas de inmunización con el preparado vacunal cubano contra Salmonella typhi (polisacárido Vi) en ratones, con el objetivo de determinar su posible influencia para su empleo en humanos. Cuatro esquemas fueron ensayados, utilizando dos vías de inmunización, la Subcutánea (SC) y la Intramuscular (DI), con 1 y 2 dosis a intervalos de 7 y 14 días entre ellas. La dinámica de anticuerpos se determiaó mediante un ensayo inmunoenzimático. Los niveles de anticuerpos obtenidos en cada ensayo fueron similares. La inmunizadón confirió niveles de protecdón de un 70% en todos los esquemas utilizados, por lo que el esquema de inmunización para humano de 1 dosis por vía IM ó SC puede ser empleadoDifferent immunization schemes with the Cuban vaccine preparation against Salmonella typhi (Polysaccharide Vi) were evaluated in mice, in order to determinate the possible influence for human use. Four immunization schemes were used: two different route of immunization, subcutaneous (SC) and intramuscular (M), with 1 or 2 doses with intervals 7 or 14 days between them. Total antibodies to polysaccharide Vi of Salmonella typhi were measured by an immunoenzymatic assay. The immunogenicity levels were similar for all schemes. The vaccine provided protection level of 70%. According to this results we propose the immunization human schemes of one doses of polysaccharide administered by IM o SC route.Colegio de Farmacéuticos de la Provincia de Buenos Aire

Bioengineered polyester beads co-displaying protein and carbohydrate-based antigens induce protective immunity against bacterial infection

Abstract The efficacy of protein and carbohydrate antigens as vaccines can be improved via particulate delivery strategies. Here, protein and carbohydrate antigens used in formulations of vaccines against Neisseria menigitidis were displayed on in vivo assembled polyester beads using a combined bioengineering and conjugation approach. An endotoxin-free mutant of Escherichia coli was engineered to produce translational fusions of antigens (Neisseria adhesin A (NadA) and factor H binding protein (fHbp) derived from serogroup B) to the polyhydroxybutyrate synthase (PhaC), in order to intracellularly assemble polyester beads displaying the respective antigens. Purified beads displaying NadA showed enhanced immunogenicity compared to soluble NadA. Both soluble and particulate NadA elicited functional antibodies with bactericidal activity associated with protective immunity. To expand the antigen repertoire and to design a more broadly protective vaccine, NadA-PhaC beads were additionally conjugated to the capsular polysaccharide from serogroup C. Co-delivery of surface displayed NadA and the capsular polysaccharide induced a strong and specific Th1/Th17 mediated immune response associated with functional bactericidal antibodies. Our findings provide the foundation for the design of multivalent antigen-coated polyester beads as suitable carriers for protein and polysaccharide antigens in order to induce protective immunity

Estudio de tolerancia local de la vacuna vax-TyVi® en ratas Sprague Dawley

La vacuna antitifoídica vax-TyVi® consiste en una preparación de polisacárido capsular Vi de Salmonella typhi, el cual es diluido en una solución buffer isotónica solución amortiguador, a la que se le añade fenol como preservo. Cada dosis de 0,5 mL contiene 25 μg de polisacárido como sustancia activa. En nuestro país el esquema de vacunación contra la fiebre tifoidea con vax- TyVi® se aplica a los alumnos de 9-10 años (5to grado), una 2da dosis a la edad de 12-13 años (8vo grado) y una 3ra dosis a la edad de 16-17 años (11no grado). Además, es vacunado el personal de riesgo de Salud Pública y el personal que manipula alimentos. En el presente trabajo se describe el ensayo de tolerancia local llevado a cabo con la vacuna vax-TyVi® durante su fase de estudios preclínicos, actualmente utilizada en la vacunación contra la fiebre tifoidea en Cuba. Se empleó un total de 170 ratas que fueron tratadas con la vacuna, su placebo (todos los componentes, excepto la materia prima activa), o que no recibieron tratamiento alguno (controles). Se realizaron observaciones clínicas diarias durante todo el ensayo, se determinó el consumo de agua y alimentos y se realizaron investigaciones anatomopatológicas a animales sacrificados 3, 7, 14, 21, 28, 35 y 42 días después de la inoculación. No se observaron muertes ni síntomas de toxicidad; no se encontraron diferencias estadísticamente significativas entre los pesos vivos, el consumo de agua ni el de alimentos entre los grupos del ensayo. Tampoco se observaron lesiones anatomopatológicas que indicaran toxicidad por parte del producto inoculado. Los resultados permitieron concluir que la potencialidad de la vacuna vax-TyVi® para producir efectos adversos locales es baja

Diseño, desarrollo y evaluación preclínica de SOBERANA®02: una vacuna cubana contra COVID-19

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