Swab bucal em anuros: uma proposta de substituição ao uso de métodos invasivos para obtenção de dna animal em pesquisa / Bucal swab in anuros: a substitution proposal for the use of invasive methods for obtaining animal dna in research

A extração do DNA animal, dependendo da metodologia aplicada pode ser invasiva, e causar injúrias ao mesmo, ou até levá-lo a óbito. Embora uma grande quantidade de estudos com DNA animal que objetivam conhecer a variabilidade genética utilizem tais metodologias atualmente metodologias baseadas na técnica de swab tem se mostrado alternativas eficazes. Nesse trabalho comparamos a metodologia de extração de DNA a partir de tecido do fígado a técnica de swab da mucosa oral em anfíbios. Duas espécies de anfíbios foram utilizadas Dendropsophus nanus e Scinax fuscovarius. O DNA extraído foi utilizado na técnica de AFLP visando observar se ocorreriam diferenças na reprodutibilidade da técnica ou no seu potencial de revelar o polimorfismo. A técnica de swab a partir da mucosa oral apresentou redução importante no rendimento de DNA porém não apresentou diferenças significativas na qualidade do DNA obtido bem como no seu potencial de uso posterior para estudo de polimorfismo genético por AFLP. Assim, sugere-se que a técnica de swab bucal seja uma alternativa importante para os estudos de variabilidade genética em anuros substituindo metodologias invasivas, principalmente as que requerem eutanásia do animal

Caracterization of Eucalyptus grandis leaves and cambial region transcriptomes using SAGE

Apenas muito recentemente estratégias genômicas e pós-genômicas têm sido utilizadas em estudos de espécies arbóreas importantes na silvicultura. Nos países tropicais, a exemplo do Brasil, as espécies de eucalipto são especialmente importantes nos plantios comerciais principalmente destinados à indústria de papel e celulose. O eucalipto é caracterizado por elevadas taxas de crescimento e alta adaptabilidade resultante da interação de mecanismos moleculares e processos metabólicos ainda pouco conhecidos. Nesse sentido, o presente trabalho teve como objetivo principal o estabelecimento de perfis transcricionais comparativos para folhas e para o xilema em formação de árvores de Eucalyptus grandis. grandis. O uso do método SAGE permitiu analisar 5864 genes dos quais 2247 (38%) puderam ser identificados. Foram encontrados 464 genes diferencialmente expressos, sendo 47 exclusivamente expressos na região cambial e 64 nas folhas. Além disso, as estratégias adotadas na identificação tags-genes permitiram que as SAGE tags fossem eficientemente utilizadas na diferenciação de isoformas gênicas tecido-específicas e de localização celular específica. Genes relacionados à fotossíntese, fotorrespiração e destoxificação celular foram preferencialmente encontrados na biblioteca SAGE de folhas, enquanto genes relacionados à síntese da parede celular, organização do citoesqueleto e respiração, foram preferencialmente expressos na biblioteca SAGE de madeira. Os níveis de expressão dos transcritos sugeriram a ocorrência de possíveis mecanismos de controle transcricional comum para grupos de genes funcionalmente relacionados e foram também utilizados para sugestão de genes e processos que representam alvos potenciais para o melhoramento do eucalipto.Recently genomic and post-genomic strategies have been used to study important tree species in planted forests. In the tropical countries, like Brazil, Eucalyptus species are especially important in commercial plantations destined for the paper and cellulose industry. Eucalyptus species are characterized by their high growth rates and great adaptability resulting from the interaction between molecular mechanisms and metabolic processes that are still uncharacterized. Thus, the main goal of this work was the comparison of the transcriptional profiles from leaves and the cambial region of Eucalyptus grandis trees. The use of SAGE allowed the evaluation of 5864 expressed tags of which 2247 (38%) could be identified. 464 differentially expressed tags were indicated, of which 47 were exclusively expressed in the cambial region library and 64 in the leaf library. Furthermore, the strategies used in the tag mapping process allowed an efficient use of the SAGE tags to distinguish gene isoforms with tissue-specific and/or specific cell localizations. Genes related to photosynthesis, photorespiration and cellular detoxification were preferentially found in the SAGE leaf library, while genes involved in cell wall biosynthesis, cytoskeletal organization and respiration were preferentially expressed in the developing xylem. Transcript expression levels suggested the presence of a common transcriptional control for a few functionally related genes, for example, some lignin related genes. Importantly, transcript expression levels were also used for the identification of target genes and processes potentially useful in future Eucalyptus breeding programs

Métodos e estratégias em proteômica e suas aplicações na área vegetal Methods and strategies in proteomics and their applications in plants

A implementação da espectrometria de massa (MS) para as análises de peptídeos (MS) e de aminoácidos (MS em tandem ou MS/MS) tornou possível a identificação de centenas de proteínas em experimentos únicos. Uma grande variedade de estratégias está disponível atualmente para o fracionamento e a purificação de amostras, a identificação de proteínas, a quantificação, a análise de modificações pós-traducionais (MPT's) e os estudos de interação. Dessa forma, a proteômica abre novas perspectivas na biologia de plantas com ênfase nos estudos de variabilidade genética, estresses fisiológicos e desenvolvimento de plantas.<br>The implementation of mass spectrometry (MS) for peptides (MS) and amino acids (tandem MS or MS/MS) analysis allowed the identification of hundreds of proteins in single experiments. A number of different strategies are current available for sample fractioning and purification, proteins identification, quantification, post-translational modifications (PTM) and interaction analyses. In this way, the proteomics open up new perspectives in plant biology with emphasis on studies of genetic variability, physiological stresses and plant development

Métodos e estratégias em proteômica e suas aplicações na área vegetal

A implementação da espectrometria de massa (MS) para as análises de peptídeos (MS) e de aminoácidos (MS em tandem ou MS/MS) tornou possível a identificação de centenas de proteínas em experimentos únicos. Uma grande variedade de estratégias está disponível atualmente para o fracionamento e a purificação de amostras, a identificação de proteínas, a quantificação, a análise de modificações pós-traducionais (MPT's) e os estudos de interação. Dessa forma, a proteômica abre novas perspectivas na biologia de plantas com ênfase nos estudos de variabilidade genética, estresses fisiológicos e desenvolvimento de plantas.The implementation of mass spectrometry (MS) for peptides (MS) and amino acids (tandem MS or MS/MS) analysis allowed the identification of hundreds of proteins in single experiments. A number of different strategies are current available for sample fractioning and purification, proteins identification, quantification, post-translational modifications (PTM) and interaction analyses. In this way, the proteomics open up new perspectives in plant biology with emphasis on studies of genetic variability, physiological stresses and plant development

Sequenciamento de DNA de nova geração e suas aplicações na genômica de plantas

As plataformas de sequenciamento de nova geração são uma alternativa poderosa para estudos de genômica estrutural e funcional. Na genômica de plantas, os trabalhos com as novas plataformas têm sido destinados ao sequenciamento de transcritos, ressequenciamento ou sequenciamento de novo de genomas plastidiais. Neste trabalho, são detalhadas as tecnologias das plataformas mais utilizadas atualmente, bem como é revisada a aplicação dessas tecnologias na genômica estrutural e funcional de plantas.The next-generation DNA sequencing technologies are a powerful alternative to studies in structural and functional genomics. In plant genomics studies, the work with these new platforms has been used for the sequencing of transcripts, re-sequencing, and the de novo sequencing of plastid genomes. This research details the technological principles of the next-generation DNA sequencing platforms most used and reviews its application in structural and functional plant genomics