Convenient fluorometric assay for matrix metalloproteinase activity and its application in biological media

AbstractMatrix metalloproteinases (MMPs) are involved in physiological tissue remodeling and pathological conditions like tumour metastasis and joint destruction. Until now, no convenient and sensitive MMP-activity assay in crude media like synovial fluid has been available. Therefore, the highly soluble fluorogenic substrate TNO211 (Dabcyl-Gaba-Pro-Gln-Gly-Leu-Glu(EDANS)-Ala-Lys-NH2), containing the MMP cleavable Gly-Leu bond and EDANS/Dabcyl as fluorophore/quencer combination, was synthesized and characterized as an MMP specific substrate. We show that the fluorogenic assay using TNO211 is sensitive and can detect MMP activity in culture medium from endothelial cells and untreated synovial fluid (SF) from RA and OA patients, and control subjects. MMP activity in SF significantly increased in the order C < OA < RA, thus the frequent use of OA samples as control in studies on RA is debatable

The role of proteases in pathologies of the synovial joint

Synovial (diarthrodial) joints are employed within the body to provide skeletal mobility and have a characteristic structure adapted to provide a smooth almost frictionless surface for articulation. Pathologies of the synovial joint are an important cause of patient morbidity and can affect each of the constituent tissues. A common feature of these pathologies is degenerative changes in the structure of the tissue which is mediated, at least in part, by proteolytic activity. Most tissues of the synovial joint are composed primarily of extracellular matrix and key pathological roles in the degeneration of this matrix are performed by metalloproteinases such as matrix metallproteinases (MMPs) and a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs (ADAMTS). However, other proteases such as cathepsin K are likely to play an important role, especially in bone turnover. In addition to the cleavage of structural proteins, proteolytic activities are employed to regulate the activity of other proteases, growth factors, cytokines and other inflammatory mediators. Proteases combine to form complex regulatory networks, the correct functioning of which is required for tissue homeostasis and the imbalance of which may be a feature of pathology. A precise understanding of the proteases involved in these networks is required for a true understanding of the associated pathology

Entwicklung muriner cDNA-Arrays zur Bestimmung der Proteinase-Expression arthritischer Fibroblasten im Modell der Antigen-Induzierten Arthritis

Das Ziel der Arbeit war die Entwicklung eines Custom-made-Array als kostengünstigere Alternative zu kommerziell erhältlichen high-density Arrays. Dieser Array sollte zur Untersuchung von Erkrankungen im tierexperimentellen Modell eingesetzt werden, bei welchem eine Veränderung des Proteinase-Expressionsprofils erwartet wird. Nach der Fertigstellung des cDNA-Arrays wurde er im Modell der Antigen-induzierten Arthritis auf seine Anwendbarkeit untersucht. Mit der Methode der Real Time PCR wurde die Gültigkeit der per cDNA-Arrays gewonnenen Daten überprüft

Effet de l'ET-1 sur le système MMP/TIMP dans les chondrocytes arthrosiques

Mémoire numérisé par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal

Interacción célula sinovial-fibrina como mecanismo patogénico y oportunidad terapéutica en artritis reumatoide

La artritis reumatoide (AR) es una enfermedad inflamatoria crónica, progresiva e invalidante, mediada por mecanismos inmunes, que afecta al uno por ciento de la población mundial adulta. El tratamiento de la artritis reumatoide ha sufrido una revolución en las últimas dos décadas con la llegada de los agentes biológicos, diseñados a partir del mejor conocimiento de los mecanismos patológicos de la enfermedad. Sin embargo, éstos aún muestran una eficacia limitada, tanto en la prevención del daño articular como en el porcentaje de pacientes respondedores. Esta situación es el reflejo de la compleja y heterogénea patogénesis de la enfermedad. Por este motivo es necesaria una continua búsqueda de nuevas estrategias. La deposición de fibrina intraarticular en la enfermedad es un proceso aún poco explotado en la búsqueda de tratamientos. En base a los estudios existentes, se puede considerar que la deposición de fibrina ocurre en fases tempranas de la cascada patogénica y tiene un papel en el desarrollo de la sinovitis. Por ello, este proceso constituye una diana ideal en el desarrollo de nuevas terapias. El objetivo del presente trabajo consistió en describir el proceso y los mecanismos de activación desencadenados por la fibrina en las articulaciones y su contribución al desarrollo y progresión de la AR, con la finalidad de identificar posibles dianas terapéuticas dirigidas a estos mecanismos..