Yersinia enterocolitica Serum Resistance Proteins YadA and Ail Bind the Complement Regulator C4b-Binding Protein

Many pathogens are equipped with factors providing resistance against the bactericidal action of complement. Yersinia enterocolitica, a Gram-negative enteric pathogen with invasive properties, efficiently resists the deleterious action of human complement. The major Y. enterocolitica serum resistance determinants include outer membrane proteins YadA and Ail. Lipopolysaccharide (LPS) O-antigen (O-ag) and outer core (OC) do not contribute directly to complement resistance. The aim of this study was to analyze a possible mechanism whereby Y. enterocolitica could inhibit the antibody-mediated classical pathway of complement activation. We show that Y. enterocolitica serotypes O:3, O:8, and O:9 bind C4b-binding protein (C4bp), an inhibitor of both the classical and lectin pathways of complement. To identify the C4bp receptors on Y. enterocolitica serotype O:3 surface, a set of mutants expressing YadA, Ail, O-ag, and OC in different combinations was tested for the ability to bind C4bp. The studies showed that both YadA and Ail acted as C4bp receptors. Ail-mediated C4bp binding, however, was blocked by the O-ag and OC, and could be observed only with mutants lacking these LPS structures. C4bp bound to Y. enterocolitica was functionally active and participated in the factor I-mediated degradation of C4b. These findings show that Y. enterocolitica uses two proteins, YadA and Ail, to bind C4bp. Binding of C4bp could help Y. enterocolitica to evade complement-mediated clearance in the human host

Bi-allelic Loss-of-Function CACNA1B Mutations in Progressive Epilepsy-Dyskinesia.

The occurrence of non-epileptic hyperkinetic movements in the context of developmental epileptic encephalopathies is an increasingly recognized phenomenon. Identification of causative mutations provides an important insight into common pathogenic mechanisms that cause both seizures and abnormal motor control. We report bi-allelic loss-of-function CACNA1B variants in six children from three unrelated families whose affected members present with a complex and progressive neurological syndrome. All affected individuals presented with epileptic encephalopathy, severe neurodevelopmental delay (often with regression), and a hyperkinetic movement disorder. Additional neurological features included postnatal microcephaly and hypotonia. Five children died in childhood or adolescence (mean age of death: 9 years), mainly as a result of secondary respiratory complications. CACNA1B encodes the pore-forming subunit of the pre-synaptic neuronal voltage-gated calcium channel Cav2.2/N-type, crucial for SNARE-mediated neurotransmission, particularly in the early postnatal period. Bi-allelic loss-of-function variants in CACNA1B are predicted to cause disruption of Ca2+ influx, leading to impaired synaptic neurotransmission. The resultant effect on neuronal function is likely to be important in the development of involuntary movements and epilepsy. Overall, our findings provide further evidence for the key role of Cav2.2 in normal human neurodevelopment.MAK is funded by an NIHR Research Professorship and receives funding from the Wellcome Trust, Great Ormond Street Children's Hospital Charity, and Rosetrees Trust. E.M. received funding from the Rosetrees Trust (CD-A53) and Great Ormond Street Hospital Children's Charity. K.G. received funding from Temple Street Foundation. A.M. is funded by Great Ormond Street Hospital, the National Institute for Health Research (NIHR), and Biomedical Research Centre. F.L.R. and D.G. are funded by Cambridge Biomedical Research Centre. K.C. and A.S.J. are funded by NIHR Bioresource for Rare Diseases. The DDD Study presents independent research commissioned by the Health Innovation Challenge Fund (grant number HICF-1009-003), a parallel funding partnership between the Wellcome Trust and the Department of Health, and the Wellcome Trust Sanger Institute (grant number WT098051). We acknowledge support from the UK Department of Health via the NIHR comprehensive Biomedical Research Centre award to Guy's and St. Thomas' National Health Service (NHS) Foundation Trust in partnership with King's College London. This research was also supported by the NIHR Great Ormond Street Hospital Biomedical Research Centre. J.H.C. is in receipt of an NIHR Senior Investigator Award. The research team acknowledges the support of the NIHR through the Comprehensive Clinical Research Network. The views expressed are those of the author(s) and not necessarily those of the NHS, the NIHR, Department of Health, or Wellcome Trust. E.R.M. acknowledges support from NIHR Cambridge Biomedical Research Centre, an NIHR Senior Investigator Award, and the University of Cambridge has received salary support in respect of E.R.M. from the NHS in the East of England through the Clinical Academic Reserve. I.E.S. is supported by the National Health and Medical Research Council of Australia (Program Grant and Practitioner Fellowship)

Quantitative analysis of biochemical processes in living cells at a single-molecule level:a case of olaparib–PARP1 (DNA repair protein) interactions

Quantitative description of biochemical processes inside living cells and at single-molecule levels remains a challenge at the forefront of modern instrumentation and spectroscopy. This paper demonstrates such single-cell, single-molecule analyses performed to study the mechanism of action of olaparib – an up-to-date, FDA-approved drug for germline-BRCA mutated metastatic breast cancer. We characterized complexes formed with PARPi-FL – fluorescent analog of olaparib in vitro and in cancer cells using the advanced fluorescent-based method: Fluorescence Correlation Spectroscopy (FCS) combined with a length-scale dependent cytoplasmic/nucleoplasmic viscosity model. We determined in vitro olaparib–PARP1 equilibrium constant (6.06 × 108 mol L−1). In the cell nucleus, we distinguished three states of olaparib: freely diffusing drug (24%), olaparib–PARP1 complex (50%), and olaparib–PARP1–RNA complex (26%). We show olaparib accumulation in 3D spheroids, where intracellular concentration is twofold higher than in 2D cells. Moreover, olaparib concentration was tenfold higher (506 nmol L−1 vs. 57 nmol L−1) in cervical cancer (BRCA1 high abundance) than in breast cancer cells (BRCA1 low abundance) but with a lower toxic effect. Thus we confirmed that the amount of BRCA1 protein in the cells is a better predictor of the therapeutic effect of olaparib than its penetration into cancer tissue. Our single-molecule and single-cell approach give a new perspective of drug action in living cells. FCS provides a detailed in vivo insight, valuable in drug development and targeting

Derechos humanos en Paraguay 2002

Tomar conciencia de la historia, la cotidiana, la nuestra y la de nuestros conciudadanos y conciudadanas, de las acciones de lucha por los derechos y las dificultades en el gozo y ejercicio de los mismos, es premisa fundamental para afirmar nuestra identidad y para proyectar nuestro futuro. Esta séptima edición del informe sobre los Derechos Humanos en Paraguay nos ayudará en esta tarea.Índice Presentación institucional 1. Introducción 2. Análisis socio-político y económico 3. Derecho a la vida 4. Derecho a la libertad, seguridad personal e in-tegridad física 5. Derecho a la protección judicial 6. Derecho a la igualdad y a la no discriminación 7. Derecho a la libertad ideológica, religiosa y de conciencia 8. Derecho a la información y a la libertad de expresión 9. Derecho a la asociación, reunión y participación 10. Derechos políticos 11. Derecho al desarrollo sostenible 12. Derecho al empleo 13. Derecho a la seguridad social 14. Derecho a la salud 15. Derecho a la seguridad alimentaria 16. Derecho a la educación 17. Derechos culturales 18. Derecho a la vivienda 19. Derechos de la infancia y la adolescencia 20. Derechos de los pueblos indígenas 21. Derecho a la paz y al desarme 22. Cumplimiento de compromisos internacionales 23. Síntesis general de las recomendaciones 24. Directorio de organizaciones asociadas a CODEHUP

Derechos humanos en Paraguay 2005

Indíce. Organizaciones participantes. Presentación. Analisis de coyuntura. Gobernabilidad pragmática y personalista / Line Bareiro. Análisis de coyuntura económica 2004 2005 / Lila Molinier. Derecho a la vida De los reproches locales a la preocupación y condena internacional / Andrés Ramírez. Equipo Editor. Derecho a la libertad, seguridad personal e integridad física Tortura y otros tratos o penas crueles, inhumanos y degradantes: Escasos esfuerzos para eliminar la tortura / Hugo Valiente. Yeny Villaba. Situación penitenciaria: Los avances son todavía imperceptibles / Yeny Villalba. La trata de mujeres con fines de explotación sexual y lasobligaciones impostergables del Estado paraguayo / Elba Beatriz Núñez. Derecho a la proteccion judicial Derecho a las garantías judiciales y al debido proceso: Desilusiones y retrocesos por ineficacia de operadores de justicia en el sistema penal / Juan Martens y Roque Orrego. Detenciones ilegales y arbitrarias: Privaciones ilegítimas de libertad afectan a más sectores organizados / Marcos Köhn Gallardo y Juan Martens Molas. Derecho a la reparación, rehabilitación e indemnización: Avances, estancamientos y deudas / Dionisio Gauto. Nelson García Ramírez. Derecho a la igualdad y a la no discriminación Derechos de las mujeres. Las convenciones que no se aplican / Pilar Codina Clua. Hacia una sociedad paraguaya sin discriminación / Grupo de Acción Gay Lésbico Transgénero (GAG-LT). Faltan políticas claras para abordar los problemas migratorios / Jacqueline Ortega. Derecho de las personas con discapacidad. Otra década perdida / Julio César Fretes, Zulma Ferreira, Claudia Pacheco y Marta Codas. Derecho a la libertad ideológica, religiosa y de conciencia Obstáculos estatales al derecho a la objeción de conciencia violentan otros derechos humanos / Edilberto Álvarez Galeano. Vidal Acevedo. Derecho a la información y a la libertad de expresión Desde poderes del Estado promueven hostigamientos a periodistas y medios / Magdalena Riveros. 10 Años de déficit en el derecho a la información y a la libertad de expresión / Equipo Editor. Derecho a la asociación, reunión y participación ciudadana Movimiento campesino: Siguen los mismos problemas / Quintín Riquelme. Derechos laborales: sin cambios significativos / Roberto Villalba. Pérdida de protagonismo del movimiento sindical y deterioro de las condiciones laborales marcan el final de una década / Dania Pilz.  Participación Ciudadana: las organizaciones sociales coparon el escenario nacional / Laura Bareiro.  Derechos políticos Calidad democrática: Otro año perdido para pensar la participación más allá del voto / Brigitte Colmán. Derecho al desarrollo sostenible Informe sobre pobreza y desigualdad 2005: Más pobres que hace 10 años / Daniel Bogado Méndez.  Desarrollo rural: Sigue postergada la reglamentación de Estatuto Agrario y del Indert  / Walter Lezcano.  Derecho al empleo Derecho al Empleo: Flexibilización y desregulación laboral por la vía de los hechos / Gustavo Zaracho.  Derecho a la salud Continúan reclamos por el exiguo presupuesto destinado a la salud / Desireé Masi. Diez años de falta de compromisos gubernamentales con la salud / Equipo editor. Derecho a la seguridad alimentaria El Derecho a la alimentación y la pérdida de la soberanía alimentaria / Diego Segovia. Derecho a la educación Entre Riesgos y Exclusiones / Ramón Corvalán  Marta Almada. ¿Reforma educativa o exclusión educativa? / Ramón Corvalán y Marta Almada. Derecho a la vivienda digna El Estado no garantiza el acceso a la vivienda digna / Cristina Vila y Ricardo Canese. Derechos de la infancia y la adolescencia Otro año lleno de promesas, postergaciones y amenazas / Luis Claudio Celma. Derechos de los pueblos indígenas Voces discrepantes frente a una crisis terminal. Andrés Ramírez / Equipo Editor. Derecho a la paz y al desarme Las Fuerzas Armadas siguen sin modificaciones fundamentales / Orlando Castillo Caballero.  Continúan prácticas de malos tratos, tortura y reclutamiento forzado / María Noguera Andrés Vázquez. Cumplimiento de compromisos internacionales Presentación del Informe Alternativo al Comité de Derechos Civiles y Políticos de Naciones Unidas / CDE, Centro de Documentación y Estudios. Pacto Internacional de Derechos Civiles y Políticos / CCPR NACIONES UNIDAS. Estrategias de vigilancia ciudadana sobre los derechos de las mujeres / Carolina Thiede Arias. Informe Alternativo de la sociedad civil sobre los Objetivos de Desarrollo del Milenio / Verónica Serafini. Síntesis general de las recomendaciones. Directorio de organizaciones de CODEHUPY