Phenotypic study of bone marrow infiltrating NK cells (BiNK) in pediatric patients with acute leukemia

3 figuras.-- Comunicación oral presentada en el LXIII Congreso Nacional de la SEHH (Sociedad Española de Hematología y Hemoterapia) y XXXVII Congreso Nacional de la SETH (Sociedad Española de Trombosis y Hemostasia), Pamplona, 14-16 Octubre 2021.[Introducción] La leucemia es el cáncer más común en la población pediátrica. Aproximadamente el 20% de los pacientes con leucemia linfoide aguda (LLA) y el 40% con leucemia mieloide aguda (LMA) recaen de la enfermedad. Es de vital importancia en el contexto de la recaída el estudio de la pérdida de la inmunovigilancia y el papel que presentan las células NK en este contexto. Para tratar de disminuir las tasas de recaída de la enfermedad. El objetivo de este estudio es evaluar el fenotipo y papel de las células NK infiltradas en médula ósea (BiNK) en pacientes con LLA y LMA.[Métodos] Se recogieron células mononucleares de médula ósea (BMMCs) procedentes de pacientes pediátricos con LLA-B (n=16) y LMA (n=4) en el Hospital Universitario La Paz. Se monitorizaron y analizaron las BiNK en el diagnóstico, seguimiento y recaída de la enfermedad. Se analizó su fenotipo mediante citometría de flujo, comprobando la expresión en superficie de los siguientes receptores activadores e inhibidores: CD56, CD3, CD16, NKG2D, NKp44, NKp46, CD69, CD57, TIM-3, LAG- 3, PD-1. Se examinaron también 3 ligandos de las células BiNK presentes en las células blásticas de los pacientes: PD-1, LAG-3 y TIM-3. Se estudió además la capacidad funcional de las células BiNK a través del ensayo de degranulación CD107a, por citometría de flujo.[Resultados] Los pacientes con LLA mostraron niveles similares de células BiNK en las diferentes fases del estudio, mientras que los pacientes con LMA presentaron una menor infiltración de las células BiNK durante el seguimiento y recaída de la enfermedad (Figura 1). Al diagnóstico se observa una alta expresión de los receptores activadores NKp46, NKG2D y CD57, mientras que los receptores inhibidores muestran una baja expresión en LLA y LMA. Los ligandos de los receptores inhibidores de células BiNK se encuentran altamente expresados en las células blásticas en pacientes con LLA y LMA (Figura 2). Durante el seguimiento de la enfermedad, la subpoblación CD56+ CD16- en las células BiNK de pacientes con LMA presentan una reducción de los receptores activadores. En el contexto de la recaída, las células BiNK muestran una expresión disminuida de NKG2D en pacientes con LLA y LMA. Los receptores inhibidores mantienen una expresión baja a excepción la LMA en recaída, donde se observa un aumento de la expresión de TIM-3 en las células BiNK. Esto se corresponde con una elevada expresión de su ligando, Galectina-9, en las células blásticas. No obstante, los ligandos analizados disminuyen respecto al diagnóstico en los pacientes con LLA, a excepción de Galectina-9. La capacidad degranulativa de las células BiNK se mantiene en los pacientes con LLA y LMA en recaída respecto al diagnóstico (Figura 3).[Conclusión] Las células BiNK procedentes de pacientes con leucemia aguda muestran gran heterogeneidad en la expresión de receptores. Los pacientes con LMA presentan una menor infiltración de células BiNK, así como una escasa capacidad degranulativa en el diagnóstico y recaída de la enfermedad.Peer reviewe

Estudio fenotípico de células NK infiltradas en médula ósea (BINK) en pacientes pediátricos con leucemia aguda

Comunicación oral presentada en el Primer Congreso Ibérico de Hematología y Oncología Pediátricas, celebrado de forma virtual, los días 21, 23, 28 y 30 de septiembre de 2021.[Objetivos] El objetivo de este estudio es evaluar el fenotipo y papel de las células NK infiltradas en médula ósea (BiNK) en pacientes con LLA y LMA.[Material y Métodos] Se recogieron células mononucleares de médula ósea (BMMCs) procedentes de pacientes pediátricos con LLA-B (n=16) y LMA (n=4) en el Hospital Universitario La Paz. Se monitorizaron y analizaron las BiNK en el diagnóstico, seguimiento y recaída de la enfermedad. Se analizó su fenotipo mediante citometría de flujo, comprobando la expresión en superficie de los siguientes receptores activadores e inhibidores: CD56, CD3, CD16, NKG2D, NKp44, NKp4 6, CD69, CD57, TIM-3, LAG-3, PD-1. Se examinaron también 3 ligandos de las células BiNK presentes en las células blásticas de los pacientes: PD-1, LAG-3 y TIM-3. Se estudió además la capacidad funcional de las células BiNK a través del ensayo de degranulación CD107a, por citometría de flujo.[Resultados] Los pacientes con LLA mostraron niveles similares de células BiNK en las diferentes fases del estudio, mientras que los pacientes con LMA presentaron una menor infiltración de las células BiNK durante el seguimiento y recaída de la enfermedad. Al diagnóstico se observa una alta expresión de los receptores activadores NKp46, NKG2D y CD57, mientras que los receptores inhibidores muestran una baja expresión en LLA y LMA. Los ligandos de los receptores inhibidores de células BiNK se encuentran altamente expresados en las células blásticas en pacientes con LLA y LMA. Durante el seguimiento de la enfermedad, la s ubpoblación CD56+ CD16- en las células BiNK de pacientes con LMA presentan una reducción de los receptores activadores. En el contexto de la recaída, las células BiNK muestran una expresión disminuida de NKG2D en pacientes con LLA y LMA. Los receptores inhibidores mantienen una expresión baja a excepción la LMA en recaída, donde se observa un aumento de la expresión de TIM-3 en las células BiNK. Esto se corresponde con una elevada expresión de su ligando, Galectina-9, en las células blásticas. No obstante, los ligandos analizados disminuyen respecto al diagnóstico en los pacientes con LLA, a excepción de Galectina- 9. La capacidad degranulativa de las células BiNK se mantiene en los pacientes con LLA y LMA en recaída respecto al diagnóstico.[Conclusiones] Las células BiNK procedentes de pacientes con leucemia aguda muestran gran heterogeneidad en la expresión de receptores. Los pacientes con LMA pres entan una menor infiltración de células BiNK, así como una escasa capacidad degranulativa en el diagnóstico y recaída de la enfermedad.Peer reviewe

Clinical validation of risk scoring systems to predict risk of delayed bleeding after EMR of large colorectal lesions

[Background and Aims]: The Endoscopic Resection Group of the Spanish Society of Endoscopy (GSEED-RE) model and the Australian Colonic Endoscopic Resection (ACER) model were proposed to predict delayed bleeding (DB) after EMR of large superficial colorectal lesions, but neither has been validated. We validated and updated these models.[Methods]: A multicenter cohort study was performed in patients with nonpedunculated lesions ≥20 mm removed by EMR. We assessed the discrimination and calibration of the GSEED-RE and ACER models. Difficulty performing EMR was subjectively categorized as low, medium, or high. We created a new model, including factors associated with DB in 3 cohort studies.[Results]: DB occurred in 45 of 1034 EMRs (4.5%); it was associated with proximal location (odds ratio [OR], 2.84; 95% confidence interval [CI], 1.31-6.16), antiplatelet agents (OR, 2.51; 95% CI, .99-6.34) or anticoagulants (OR, 4.54; 95% CI, 2.14-9.63), difficulty of EMR (OR, 3.23; 95% CI, 1.41-7.40), and comorbidity (OR, 2.11; 95% CI, .99-4.47). The GSEED-RE and ACER models did not accurately predict DB. Re-estimation and recalibration yielded acceptable results (GSEED-RE area under the curve [AUC], .64 [95% CI, .54-.74]; ACER AUC, .65 [95% CI, .57-.73]). We used lesion size, proximal location, comorbidity, and antiplatelet or anticoagulant therapy to generate a new model, the GSEED-RE2, which achieved higher AUC values (.69-.73; 95% CI, .59-.80) and exhibited lower susceptibility to changes among datasets.[Conclusions]: The updated GSEED-RE and ACER models achieved acceptable prediction levels of DB. The GSEED-RE2 model may achieve better prediction results and could be used to guide the management of patients after validation by other external groups. (Clinical trial registration number: NCT 03050333.)Research support for this study was received from “La Caixa/Caja Navarra” Foundation (ID 100010434;project PR15/11100006)

CDCA7 regulates lymphoma cells migration and invasion through reorganization of the tubulin and the actomyosin cytoskeleton

Resumen del trabajo presentado al 1st PhD Research Symposium in Health Sciences and Biomedicine, celebrado en la Universidad Autónoma de Madrid el 18 de mayo de 2018.This work was supported by the Spanish Ministerio de Economía, Industria y Competitividad (MINECO) grant to M.R.C. (SAF2013-45258P).Peer reviewe

CDCA7 finely tunes cytoskeleton dynamics to promote lymphoma migration and invasion

Metastases, the major cause of death from cancer, require cells’ acquisition of the ability to migrate and involve multiple steps, including local tumor cell invasion and basement membrane penetration. Certain lymphoid tumors are highly metastatic, but the mechanisms of invasion by lymphoma cells are poorly understood. We recently showed that CDCA7, a protein induced by MYC, is overexpressed in lymphoid tumors and that its knockdown decreases lymphoid tumor growth without inhibiting the proliferation of normal cells. Here we show that CDCA7 is critical for invasion and migration of lymphoma cells. Indeed, CDCA7 knockdown in lymphoma cells limited tumor cell invasion in matrigel-coated transwell plates and tumor invasion of neighboring tissues in a mouse xenograft model and in a zebrafish model of cell invasion. CDCA7 silencing markedly inhibited lymphoma cell migration on fibronectin without modifying cell adhesion to this protein. Instead, CDCA7 knockdown markedly disrupted the precise dynamic reorganization of actomyosin and tubulin cytoskeletons required for efficient migration. In particular, CDCA7 silencing impaired tubulin and actomyosin cytoskeleton polarization, increased filamentous actin formation, and induced myosin activation. Of note, inhibitors of actin polymerization, myosin II, or ROCK reestablished the migration capacity of CDCA7-silenced lymphoma cells. Given the critical role of CDCA7 in lymphoma-genesis and invasion, therapies aimed at inhibiting its expression or activity might provide significant control of lymphoma growth, invasion, and metastatic dissemination.The authors thank D. Trono for plasmids; the Spanish Ministerio de Economía y Competitividad for grants SAF2017-88881-R and SAF2017-88885-R (MINECO/AEI/FEDER, UE) to MRC and TIV, respectively; the Comunidad de Madrid for European Social Fund (ESF) cofinanced AORTASANA- CM; B2017/BMD- 3676 programme to MRC; and Instituto de Salud Carlos III (CIBERNED) for funding to TIV. The cost of this publication was paid in part with FEDER funds.Peer reviewe

CDCA7 is a critical mediator of lymphomagenesis that selectively regulates anchorage-independent growth

Tumor formation involves the acquisition of numerous capacities along the progression from a normal cell into a malignant cell, including limitless proliferation (immortalization) and anchorage-independent growth, a capacity that correlates extremely well with tumorigenesis. Great efforts have been made to uncover genes involved in tumor formation, but most genes identified participate in processes related to cell proliferation. Accordingly, therapies targeting these genes also affect the proliferation of normal cells. To identify potential targets for therapeutic intervention more specific to tumor cells, we looked for genes implicated in the acquisition of anchorage-independent growth and in vivo tumorigenesis capacity. A transcriptomic analysis identified CDCA7 as a candidate gene. Indeed, CDCA7 protein was upregulated in Burkitt's lymphoma cell lines and human tumor biopsy specimens relative to control cell lines and tissues, respectively. CDCA7 levels were also markedly elevated in numerous T and B-lymphoid tumor cell lines. While CDCA7 was not required for anchorage-dependent growth of normal fibroblasts or non-malignant lymphocytes, it was essential but not sufficient for anchorage-independent growth of lymphoid tumor cells and for lymphomagenesis. These data suggest that therapies aimed at inhibiting CDCA7 expression or function might significantly decrease the growth of lymphoid tumors.This work was supported by the Spanish Ministerio de Economía, Industria y Competitividad (MEIC) grants to MRC. (SAF2013-45258P and SAF2017-88881-R) and TIV. (SAF2014-52737P); and by Instituto de Salud Carlos III (CIBERNED) to TIV. The cost of this publication has been paid in part with FEDER funds. OK holds an FPI fellowship from MEIC (BES-2014-069236). The CNIC is supported by the Ministerio de Ciencia, Investigación y Universidades and the Pro CNIC Foundation, and is a Severo Ochoa Center of Excellence (SEV-2015-0505).Peer reviewe

MAZ induces MYB expression during the exit from quiescence via the E2F site in the MYB promoter

Most E2F-binding sites repress transcription through the recruitment of Retinoblastoma (RB) family members until the end of the G1 cell-cycle phase. Although the MYB promoter contains an E2F-binding site, its transcription is activated shortly after the exit from quiescence, before RB family members inactivation, by unknown mechanisms. We had previously uncovered a nuclear factor distinct from E2F, Myb-sp, whose DNA-binding site overlapped the E2F element and had hypothesized that this factor might overcome the transcriptional repression of MYB by E2F-RB family members. We have purified Myb-sp and discovered that Myc-associated zinc finger proteins (MAZ) are major components. We show that various MAZ isoforms are present in Myb-sp and activate transcription via the MYB-E2F element. Moreover, while forced RB or p130 expression repressed the activity of a luciferase reporter driven by the MYB-E2F element, co-expression of MAZ proteins not only reverted repression, but also activated transcription. Finally, we show that MAZ binds the MYB promoter in vivo, that its binding site is critical for MYB transactivation, and that MAZ knockdown inhibits MYB expression during the exit from quiescence. Together, these data indicate that MAZ is essential to bypass MYB promoter repression by RB family members and to induce MYB expression.Spanish Ministerio de Economía, Industria y Competitividad [SAF2013–45258P to M.R.C., SAF2014–52737P to T.I.]; Instituto de Salud Carlos III [FIS PI12/0056 to J.A., CIBERNED to T.I.]; Spanish AIDS Research Network [RD16CIII/0002/0001 to J.A.]; FEDER funds (in part); Spanish National Center for Biotechnology [PT13/0001]. Funding for open access charge: Spanish Ministerio de Economía, Industria y Competitividad [SAF2013–45258P].Peer reviewe