Phyllody of faba bean in the Sudan. II. — Detection of the disease by light microscopy: fluorescence, bright field, interference contrast and observation of MLOs by transmission electron microscopy

Several techniques of fluorescence, light and electron microscopy were used to detect MLOs in sieve tube elements of phyllody diseased faba bean plants. The DNA-binding fluorochrome Bisbenzimid H 33258 provided satisfactory results when used with sections prepared from fresh materials using freezing microtome or cryostat and with fixed materials embedded in paraffin or historesin. While sections from fresh materials provided rapid means of indexing, historesin and paraffin have the advantage of better preservation of anatomical characteristics of plant tissues. This was particularly the case of historesin since sections were processed without removing the embedding medium. Semi-thin sections (250-350 nm) prepared from epoxy resin-embedded plant tissue are not amenable to staining with DNA-specific fluorochromes, hence they could not be used for fluorescence microscopy. Alternatively, 2 methods of ordinary light microscopy could be utilized with such sections. The first was to examine unstained sections in a light microscope with differential interference contrast of Nomarski, and the second implied staining with thionin and acridine orange and observation in a bright field microscope. Both techniques, though non-specific to MLO provided additional tool in cytopathological studies of diseased plants and could be useful in determining areas meriting further examination in electron microscopy. The presence of MLOs in plant tissues, used for light and fluorescence microscopy, was confirmed in ultrathin and semi-thin sections observed by transmission electron microscopy.Plusieurs techniques de microscopie photonique en fluorescence et en lumière normale ainsi que de microscopie électronique ont été utilisées pour détecter les MLO à l’intérieur des tubes criblés de la féverole atteinte de phyllodie. Un fluorochrome spécifique de l’ADN, Bisbenzimid H 33258 ou réactif de Hoechst, a donné des résultats satisfaisants quel que soit le mode de préparation du matériel végétal : tissu frais coupé au cryostat, tissu fixé et inclus dans la paraffine ou dans l’historésine. Les coupes préparées à partir de matériel frais ont permis l’indexage rapide de l’infection alors que l’inclusion dans la paraffine et surtout dans l’historésine a l’avantage de faciliter la caractérisation des structures anatomiques des tissus. L’historésine présente un intérêt particulier car les coupes peuvent être colorées en présence du milieu d’inclusion. De plus, des coupes semi-fines de 250 à 350 nm d’épaisseur ont été préparées à partir de tissus fixés et inclus dans une résine époxy. Elles ne présentent pas de fluorescence. Aussi, 2 méthodes de microscopie photonique en lumière normale ont été alternativement employées : la première consiste en l’observation des coupes non colorées en contraste interférentiel de Nomarski et, la deuxième utilise la coloration par la thionine et l’acridine orange. Ces 2 techniques, bien que non spécifiques, facilitent la localisation des zones qui nécessitent une étude ultérieure en microscopie électronique. La présence des MLO à l’intérieur des tubes criblés des tissus malades a été confirmée sur les coupes ultrafines observées en microscopie électronique par transmission

Phyllodie de la féverole au Soudan. I. Evolution des symptômes, gamme d’hôtes et transmission par cuscute (Cuscuta subinclusa) à Catharanthus roseus

International audienceSymptom development of faba bean phyllody was followed in a local susceptible cultivar, Hudeiba 72, graft-inoculated from naturally diseased plants collected in the Gezira. The disease was characterized by a series of floral abnormalities including vircscence, phyllody and proliferation of sprouts together with other growth abnormalities, such as loss of apical dominance, vivipary and enhanced vegetative growth. All three Sudanese cultivars tested in the glasshouse were highly vulnerable to the pathogen while the European cultivar tested showed mild symptoms and slow development of disease, sometimes partial recovery. Symptom expression in faba bean plants was highly influenced by temperature. Plants grown at 15-18 °C produced no or occasionally mild symptoms after prolonged incubation periods, whereas at 20-22 °C characteristic symptoms appeared. French bean, dolichos bean, pigeon pea and lucerne were sensitive to infection after grafting from faba bean and reacted with yellowing symptoms. The disease agent was also transmitted through dodder (Cuscuta subinclusa) to the differential host Catharanlhus roseus. Three distinct stages of symptom development were observed in C. roseus and each was characterized by a particular symptom type. These symptoms were identical to those induced by the MLOs of Crotalaria saltiana phyllody described in the same region.L’évolution des symptômes de la phyllodie de la féverole a été suivie sur une variété sensible : « Hudeiba 72 », greffée à partir de plantes malades provenant de Gezira. La maladie est caractérisée par une série d’anomalies de l’appareil reproducteur : virescence, phyllodie, prolifération des fleurs et viviparité des gousses ainsi que des anomalies de l’appareil végétatif, telles que la perte de la dominance apicale et la prolifération. Les trois variétés soudanaises testées par greffage se sont montrées sensibles à l’infection alors que la variété européenne : « Ascott» était peu affectée par la maladie. L’expression des symptômes chez la féverole est largement influencée par la température. A des températures de 15 à 18 °C les plantes ne présentent aucun symptôme ou parfois des symptômes très légers après une longue période d’incubation, alors qu’à des températures de 20 à 22 °C des symptômes caractéristiques apparaissent. Quatre espèces de légumineuses : le haricot, le dolic, le pois d’Angole et la luzerne sont sensibles à l’infection et ont montré des symptômes de jaunissement du feuillage. L’agent pathogène a été transmis par cuscute (Cuscuta subinclusa) à un hôte différentiel : Catharanthus roseus. Trois stades de la maladie, caractérisés par des symptômes particuliers, ont été mis en évidence. L’ensemble de ces symptômes observés au cours de ces différents stades est identique à ceux de la phyllodie de Crotalaria saltiana prélevée dans la même région du Soudan

Phyllodie de la féverole au Soudan. II - Détection de la maladie par la microscopie photonique : fluorescence, lumière normale, contraste interférentiel et mise en évidence des MLOs en microscopie électronique par transmission

International audienceSeveral techniques of fluorescence, light and electron microscopy were used to detect MLOs in sieve tube elements of phyllody diseased faba bean plants. The DNA-binding fluorochrome Bisbenzimid H 33258 provided satisfactory results when used with sections prepared from fresh materials using freezing microtome or cryostat and with fixed materials embedded in paraffin or historesin. While sections from fresh materials provided rapid means of indexing, historesin and paraffin have the advantage of better preservation of anatomical characteristics of plant tissues. This was particularly the case of historesin since sections were processed without removing the embedding medium. Semi-thin sections (250-350 nm) prepared from epoxy resin-embedded plant tissue are not amenable to staining with DNA-specific fluorochromes, hence they could not be used for fluorescence microscopy. Alternatively, 2 methods of ordinary light microscopy could be utilized with such sections. The first was to examine unstained sections in a light microscope with differential interference contrast of Nomarski, and the second implied staining with thionin and acridine orange and observation in a bright field microscope. Both techniques, though non-specific to MLO provided additional tool in cytopathological studies of diseased plants and could be useful in determining areas meriting further examination in electron microscopy. The presence of MLOs in plant tissues, used for light and fluorescence microscopy, was confirmed in ultrathin and semi-thin sections observed by transmission electron microscopy.Plusieurs techniques de microscopie photonique en fluorescence et en lumière normale ainsi que de microscopie électronique ont été utilisées pour détecter les MLO à l’intérieur des tubes criblés de la féverole atteinte de phyllodie. Un fluorochrome spécifique de l’ADN, Bisbenzimid H 33258 ou réactif de Hoechst, a donné des résultats satisfaisants quel que soit le mode de préparation du matériel végétal : tissu frais coupé au cryostat, tissu fixé et inclus dans la paraffine ou dans l’historésine. Les coupes préparées à partir de matériel frais ont permis l’indexage rapide de l’infection alors que l’inclusion dans la paraffine et surtout dans l’historésine a l’avantage de faciliter la caractérisation des structures anatomiques des tissus. L’historésine présente un intérêt particulier car les coupes peuvent être colorées en présence du milieu d’inclusion. De plus, des coupes semi-fines de 250 à 350 nm d’épaisseur ont été préparées à partir de tissus fixés et inclus dans une résine époxy. Elles ne présentent pas de fluorescence. Aussi, 2 méthodes de microscopie photonique en lumière normale ont été alternativement employées : la première consiste en l’observation des coupes non colorées en contraste interférentiel de Nomarski et, la deuxième utilise la coloration par la thionine et l’acridine orange. Ces 2 techniques, bien que non spécifiques, facilitent la localisation des zones qui nécessitent une étude ultérieure en microscopie électronique. La présence des MLO à l’intérieur des tubes criblés des tissus malades a été confirmée sur les coupes ultrafines observées en microscopie électronique par transmission

Phyllody of faba bean in the Sudan. I. Progress of symptom expression, host range and transmission to Catharanthus roseus through dodder

International audienc

Trois générations de femmes ingénieurs agronomes

Cousin Marie-Thérèse, Dirlewanger Elisabeth, Laugier Florence. Trois générations de femmes ingénieurs agronomes. In: Diplômées, n°228, 2009. Les femmes et l'agriculture. pp. 11-13

Hydrangea virescence. II. — Diagnosis by fluorescence microscopy and detection of infection in resin-embedded samples with bright field and phase contrast microscopy

We have investigated the mild virescence disease of Hydrangea macrophylla by the use of the fluorochrome bisbenzimid H, Hoechst reagent 33258. In the sieve tubes of virescent plants, brilliant white-blue fluorescence was observed under ultra-violet light. In the corresponding parts of normal plants no such fluorescence could be detected. Blue and ultra-violet light gave complementary information. Sections were observed unstained and stained with the fluorochrome for comparative studies. Abnormal sieve tubes in unstained preparations manifested diffused primary fluorescence. The fluorochrome showed bright fluorescence indicating the presence of DNA-containing structures in the diseased sieve tubes. When the sieve tubes were not fully packed with these structures, epifluorescence resolved them as isolated granules. In order to select the suitable areas in resinembedded samples, thionin-acridine orange staining was found desirable. In 1.0 μm thick sections, the infected sieve tubes and the structures contained in them were stained blue-green with thionin. Acridine orange gave better contrast between the cell-wall and inner contents.Pour la détection des maladies à MLO, une méthode de microscopie photonique accessible à différents laboratoires est nécessaire. Le diagnostic de ces maladies est rendu plus précis et plus simple grâce à l’utilisation de la microscopie de fluorescence et des fluorochromes spécifiques de l’ADN. Le travail mentionné ici concerne la détection de la virescence de l’hortensia (Hydrangea macrophylla) grâce à l’utilisation d’un fluorochrome : le réactif de Hoechst (bisbenzimid H réactif 33258). Une fluorescence brillante, bleu clair, est observée en lumière ultra-violette dans les tubes criblés infectés des plantes virescentes. Les zones correspondantes des plantes saines en sont dépourvues. Les observations en lumière bleue et ultraviolette se montrent complémentaires. La fluorescence secondaire, en présence du fluorochrome, a constamment été comparée à la fluorescence primaire (autofluorescence) en l’absence de tout colorant. Le fluorochrome agit spécifiquement sur les particules contenant de l’ADN dans les tubes criblés infectés. La fluorescence primaire correspondante apparaît moins intense. Lors de l’observation de particules à l’état isolé, la fluorescence en lumière réfléchie (épifluorescence) s’avère supérieure à la fluorescence en lumière transmise. Afin de repérer les zones infectées à partir d’échantillons inclus dans la résine, l’utilisation de la coloration de coupes semi-fines de 1 μm d’épaisseur par la thionine et l’acridine orange se révèle intéressante. La thionine colore en bleu vert les tubes criblés infectés. Des particules isolées ont pu être observées. L’acridine orange, en augmentant le contraste entre les parois et le contenu des tubes criblés, contribue à faciliter le repérage des zones infectées

Hydrangea virescence. I. - Description of the disease and its transmission to the differential host plant Catharanthus roseus by Cuscuta subinclusa

International audienc

Milk fermented by [i]Propionibacterium freudenreichii[/i] induces apoptosis of HGT-1 human gastric cancer cells

International audienceBACKGROUND: Gastric cancer is one of the most common cancers in the world. The "economically developed countries" life style, including diet, constitutes a risk factor favoring this cancer. Diet modulation may lower digestive cancer incidence. Among promising food components, dairy propionibacteria were shown to trigger apoptosis of human colon cancer cells, via the release of short-chain fatty acids acetate and propionate. METHODOLOGY/PRINCIPAL FINDINGS: A fermented milk, exclusively fermented by P. freudenreichii, was recently designed. In this work, the pro-apoptotic potential of this new fermented milk was demonstrated on HGT-1 human gastric cancer cells. Fermented milk supernatant induced typical features of apoptosis including chromatin condensation, formation of apoptotic bodies, DNA laddering, cell cycle arrest and emergence of a subG1 population, phosphatidylserine exposure at the plasma membrane outer leaflet, reactive oxygen species accumulation, mitochondrial transmembrane potential disruption, caspase activation and cytochrome c release. Remarkably, this new fermented milk containing P. freudenreichii enhanced the cytotoxicity of camptothecin, a drug used in gastric cancer chemotherapy. CONCLUSIONS/SIGNIFICANCE: Such new probiotic fermented milk may thus be useful as part of a preventive diet designed to prevent gastric cancer and/or as a food supplement to potentiate cancer therapeutic treatments