The Role of Glucose in the Pathology of EHEC O157: H7

The pathogen enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC) O157: H7 is responsible for hemorrhagic colitis and hemolytic uremic syndrome in humans [1]. During the colonization process in the gastrointestinal tract, EHEC needs to adapt to changes in nutrient availability [2]. The objective of this study was to evaluate the influence of glucose on physiology and processes involved in the pathogenesis of EHEC O157: H7 in order to improve our understanding of the mechanisms controlling EHEC growth and survival in the bovine gut.Fil: Marques Da Silva, Wanderson. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Taibo, Catalina Beatriz. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria; ArgentinaFil: Sabio y Garcia, Julia Veronica. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Larzabal, Mariano. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Cataldi, Angel Adrian. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; Argentin

Quantification of Enterohemorrhagic Escherichia coli O157:H7 proteome using TMT-Based Analysis

Enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC) O157:H7 is a human pathogen responsible for diarrhea, hemorrhagic colitis and hemolytic uremic syndrome (HUS). EHEC infection is distributed worldwide and numerous outbreaks of diseases caused by enterohemorrhagic have been reported. To promote a comprehensive insight into the molecular basis of EHEC O157:H7 physiology and pathogenesis, the combined proteome of EHEC O157:H7 strains, Clade 8 and Clade 6 isolated from cattle in Argentina, and the standard EDL933 (clade 3) strain has been analyzed. TMT (Tandem Mass Tags)-based quantitative proteomic and emPAI analyses were performed to estimate the protein abundance in EHEC proteome. 2,234 non-redundant proteins of EHEC O157:H7 were identified. A comparison of this result with in silico data of EHEC O157:H7 genome showed that approximately 40% of the predicted proteome of this pathogen were covered. According to the emPAI analysis, 85 proteins were among the most abundant (e.g. GAPDH, FliC H-antigen, Enolase, and GroEL). Tellurite resistance proteins were also highly abundant. COG analysis showed that although most of the identified proteins are related to cellular metabolism, the majority of the most abundant proteins are associated with translation processes. A KEGG enrichment analysis revealed that Glycolysis / Gluconeogenesis was the most significant pathway. On the other hand, the less abundant detected proteins are those related to DNA processes, cell respiration and prophage. Among the proteins that composed the Type III Secretion System, the most abundant protein was EspA. Altogether, the results show a subset of important proteins that contribute to physiology and pathogenicity of EHEC O157:H7.IMPORTANCE The study of the abundance of proteins present within a complex mixture of proteins in a cell, under different conditions, can provide important information about the activities of individual protein components and protein networks that are cornerstones for the comprehension of physiological adaptations in response to biological demands promoted by environmental changes. We generated a comprehensive and accurate quantitative list of EHEC O157:H7 proteome, which provides a description of the most abundant proteins produced by this pathogen that were related to physiology and pathogenesis of EHEC. This study provides information and extends the understanding on functional genomics and the biology of this pathogen.Fil: Marques Da Silva, Wanderson. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Bei, Jinlong. No especifíca;Fil: Amigo, Natalia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; ArgentinaFil: Valacco, Maria Pia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; ArgentinaFil: Amadio, Ariel. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Santa Fe. Estación Experimental Agropecuaria Rafaela; ArgentinaFil: Zhang, Qi. No especifíca;Fil: Wu, Xiuju. No especifíca;Fil: Yu, Ting. No especifíca;Fil: Larzabal, Mariano. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Chen, Zhuang. No especifíca;Fil: Cataldi, Angel Adrian. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

Quantification of enterohemorrhagic Escherichia coli O157:H7 protein abundance by high-throughput proteome

Enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC) O157:H7 is a human pathogen responsible fordiarrhea, hemorrhagic colitis and hemolytic uremic syndrome (HUS). To promote a comprehensiveinsight into the molecular basis of EHEC O157:H7 physiology and pathogenesis,the combined proteome of EHEC O157:H7 strains, Clade 8 and Clade 6 isolated from cattlein Argentina, and the standard EDL933 (clade 3) strain has been analyzed. From shotgunproteomic analysis a total of 2,644 non-redundant proteins of EHEC O157:H7 were identified,which correspond approximately 47% of the predicted proteome of this pathogen. Normalizedspectrum abundance factor analysis was performed to estimate the proteinabundance. According this analysis, 50 proteins were detected as the most abundant ofEHEC O157:H7 proteome. COG analysis showed that the majority of the most abundantproteins are associated with translation processes. A KEGG enrichment analysis revealedthat Glycolysis / Gluconeogenesis was the most significant pathway. On the other hand, theless abundant detected proteins are those related to DNA processes, cell respiration andprophage. Among the proteins that composed the Type III Secretion System, the mostabundant protein was EspA. Altogether, the results show a subset of important proteins thatcontribute to physiology and pathogenicity of EHEC O157:H7.Fil: Marques Da Silva, Wanderson. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; ArgentinaFil: Bei, Jinlong. Guangdong Academy Of Agricultural Sciences; ChinaFil: Amigo, Natalia. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; ArgentinaFil: Valacco, Maria Pia. Universidad de Buenos Aires; ArgentinaFil: Amadio, Ariel Fernando. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires; ArgentinaFil: Zhang, Qi. Guangdong Academy Of Agricultural Sciences; ChinaFil: Wu, Xiuju. Guangdong Academy Of Agricultural Sciences; ChinaFil: Yu, Ting. Guangdong Academy Of Agricultural Sciences; ChinaFil: Larzabal, Mariano. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires; ArgentinaFil: Chen, Zhuang. Guangdong Academy Of Agricultural Sciences; ChinaFil: Cataldi, Ángel Adrián. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires; Argentin

Early immune innate hallmarks and microbiome changes across the gut during Escherichia coli O157: H7 infection in cattle

The zoonotic enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC) O157: H7 bacterium causes diarrhea, hemorrhagic colitis, and hemolytic uremic syndrome (HUS) in humans. Cattle are primary reservoirs and EHEC O157: H7; the bacteria predominately inhabit the colon and recto-anal junctions (RAJ). The early innate immune reactions in the infected gut are critical in the pathogenesis of EHEC O157: H7. In this study, calves orally inoculated with EHEC O157: H7 showed infiltration of neutrophils in the lamina propria of ileum and RAJ at 7 and 14 days post-infection. Infected calves had altered mucin layer and mast cell populations across small and large intestines. There were differential transcription expressions of key bovine β defensins, tracheal antimicrobial peptide (TAP) in the ileum, and lingual antimicrobial peptide (LAP) in RAJ. The main Gram-negative bacterial/LPS signaling Toll-Like receptor 4 (TLR4) was downregulated in RAJ. Intestinal infection with EHEC O157: H7 impacted the gut bacterial communities and influenced the relative abundance of Negativibacillus and Erysipelotrichaceae in mucosa-associated bacteria in the rectum. Thus, innate immunity in the gut of calves showed unique characteristics during infection with EHEC O157: H7, which occurred in the absence of major clinical manifestations but denoted an active immunological niche.Fil: Larzabal, Mariano. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Marques Da Silva, Wanderson. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Multani, Anmol. University of Calgary; CanadáFil: Vagnoni, Lucas Emilio. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Moore, Dadin Prando. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Marin, Maia Solange. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Riviere, Nahuel Agustín. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Delgado, Fernando Oscar. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Patobiología; ArgentinaFil: Vilte, Daniel Alejandro. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Patobiología; ArgentinaFil: Romero Victorica, Matias. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Ma, Tao. University Of Alberta. Faculty Of Agricultural, Life And Environmental Sciences. Departament Of Agricultural, Food And Nutritional Science.; CanadáFil: Le Guan, Luo. University Of Alberta. Faculty Of Agricultural, Life And Environmental Sciences. Departament Of Agricultural, Food And Nutritional Science.; CanadáFil: Talia, Paola Monica. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Cataldi, Angel Adrian. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Cobo, Eduardo R.. University of Calgary; Canad

Estudio de los factores de riesgo asociados a la excreción de escherichia coli o157:H7 en bovinos

Los bovinos son reservorios primarios de Escherichia coli enterohemorrágica (EHEC) O157: H7, bacteria responsable del síndrome urémico hemolítico (SUH) que afecta a niños menores de 6 años en forma endémica en la Argentina, debido a la producción de las toxinas Shiga (stx), la stx1 y la stx2. Estas toxinas producidas en el intestino actúan sobre este órgano, y sistémicamente sobre riñones, cerebro y otros órganos. En este estudio se siguieron 118 terneros de 36 corrales (tres a cuatro animales por corral), que fueron distribuidos en 18 corrales de animales livianos (promedio: 128 kg) y 18 de pesados (promedio: 197 kg), de un establecimiento ganadero de la provincia de La Pampa, Argentina. Los animales se sometieron a tres fases de engorde (recría: marzo - junio de 2014, pastoreo: julio – noviembre, terminación: diciembre 2014 – abril 2015), con una dieta energética con distintos niveles de proteína bruta (PB); recría 9 – 13 – 18% PB, pastoreo 9% PB y terminación 9,5 – 13% PB. Durante un año se hicieron hisopados mensuales de la mucosa recto anal (HMRA), para identificar a los excretores de EHEC O157:H7 y los genes de virulencia de esta bacteria. Las bacterias se caracterizaron por PCR Multiplex. La prevalencia varió de 0.84% en julio hasta 15.25% en noviembre de 2014. Todas las cepas de E. coli O157: H7 aisladas portaban eae, mientras que 11%, 33% y 56% contenían stx1, stx2 y stx1 / stx2 respectivamente. El gen stx1 se encontró solo durante la recría, mientras que stx2 se mantuvo constante a lo largo del ensayo. Durante el pastoreo, se encontró una presencia significativa de stx1 / stx2. Se estudió la influencia de posibles factores predisponentes para la excreción de E. coli O157:H7 y la presencia de los genes de virulencia de esta bacteria. Los factores evaluados fueron el peso, la dieta, la época del año, el efecto de las precipitaciones y las temperaturas. Durante la terminación, los animales livianos excretaron significativamente mayor cantidad de E. coli O157:H7 que los pesados, mientras que no se hallaron diferencias entre el nivel de PB de la dieta y la excreción de E. coli O157:H7 entre las 3 fases del engorde. Por otro lado, la excreción de E. coli O157:H7 y la presencia de los genes que expresan stx1 stx2 se encontraban aumentadas con el incremento de las lluvias y la temperatura en primavera.EEA AnguilFil: Rhades, Luis. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Anguil; ArgentinaFil: Larzabal, Mariano. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto De Investigación Biotecnología; ArgentinaFil: Bentancor, Adriana. Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Sabio Y Garcia, Julia Veronica. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Centro de Investigaciones en Ciencias Veterinarias y Agronómicas; ArgentinaFil: Babinec, Francisco. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Anguil; Argentina. Universidad Nacional de La Pampa. Faculta de Agronomía; ArgentinaFil: Cataldi, Angel Adrian. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto De Investigación Biotecnología; ArgentinaFil: Amigo, Natalia. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto De Investigación Biotecnología; ArgentinaFil: Baldone, Valeria. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Anguil; ArgentinaFil: Urquiza, Lucas. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Anguil; ArgentinaFil: Delicia, Pablo Javier. Universidad Tecnológica Nacional. Facultad Regional Rosario; ArgentinaFil: Fort, Marcelo. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Anguil; Argentin

Secretion Systems of Pathogenic Escherichia coli

Protein secretion plays a central role in modulating the interactions ofbacteria with their environments. Bacterial ribosomes synthesize up to 8000 different proteins. Almost half of these become integrated in membranes and are secreted to the periplasm or to the external milieu. Many bacterial processes , such as DNA replication, motility, transport, antibiotic resistance, scavenging of chemicals, and pathogenesis, depend on protein secretion. Thereby, evolutionarily unrelated protein nanomachines have been developed, which allow exported proteins to cross the Gram-negative membranes. Bacterial proteins can be exported directly from the cytoplasm out of the cell by a one-step (cytoplasm to extracellular milieu), including the type I secretion system (T1SS), T3SS, T4SS, and T6SS, or two-step (periplasm translocation step), including the T2SS and T5SS, while the T4SS can use either the one- or two-step mechanism. The T3SS, T5SS, and T6SS are the more common secretion systems in Escherichia coli and most of the secreted substrates are virulence factors related topathogenic E. coli . In this chapter, we will describe the main characteristic of these last three secretion systems.Fil: Navarro Garcia, Fernando. Instituto Politécnico Nacional; MéxicoFil: Ruiz Perez, Fernando. University of Virginia; Estados UnidosFil: Larzabal, Mariano. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Cataldi, Ángel Adrián. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; Argentin

Type VI secretion system in pathogenic escherichia coli: structure, role in virulence, and acquisition

Bacterial pathogens utilize a myriad of mechanisms to invade mammalian hosts, damage tissue sites, and evade the immune system. One essential strategy of Gram-negative bacteria is the secretion of virulence factors through both inner and outer membranes to reach a potential target. Most secretion systems are harbored in mobile elements including transposons, plasmids, pathogenicity islands, and phages, and Escherichia coli is one of the more versatile bacteria adopting this genetic information by horizontal gene transfer. Additionally, E. coli is a bacterial species with members of the commensal intestinal microbiota and pathogens associated with numerous types of infections such as intestinal, urinary, and systemic in humans and other animals. T6SS cluster plasticity suggests evolutionarily divergent systems were acquired horizontally. T6SS is a secretion nanomachine that is extended through the bacterial double membrane; from this apparatus, substrates are conveyed straight from the cytoplasm of the bacterium into a target cell or to the extracellular space. This nanomachine consists of three main complexes: proteins in the inner membrane that are T4SS component-like, the baseplate complex, and the tail complex, which are formed by components evolutionarily related to contractile bacteriophage tails. Advances in the T6SS understanding include the functional and structural characterization of at least 13 subunits (so-called core components), which are thought to comprise the minimal apparatus. So far, the main role of T6SS is on bacterial competition by using it to kill neighboring non-immune bacteria for which antibacterial proteins are secreted directly into the periplasm of the bacterial target after cell–cell contact. Interestingly, a few T6SSs have been associated directly to pathogenesis, e.g., roles in biofilm formation and macrophage survival. Here, we focus on the advances on T6SS from the perspective of E. coli pathotypes with emphasis in the secretion apparatus architecture, the mechanisms of pathogenicity of effector proteins, and the events of lateral gene transfer that led to its spread.Fil: Navarro García, Fernando. Centro de Investigación y de Estudios Avanzados del Instituto Politécnico Nacional; MéxicoFil: Ruiz Pérez, Fernando. Eastern Virginia Medical School; Estados UnidosFil: Cataldi, Ángel Adrián. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Larzabal, Mariano. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; Argentin

Type VI secretion system in pathogenic escherichia coli: structure, role in virulence, and acquisition

Bacterial pathogens utilize a myriad of mechanisms to invade mammalian hosts, damage tissue sites, and evade the immune system. One essential strategy of Gram-negative bacteria is the secretion of virulence factors through both inner and outer membranes to reach a potential target. Most secretion systems are harbored in mobile elements including transposons, plasmids, pathogenicity islands, and phages, and Escherichia coli is one of the more versatile bacteria adopting this genetic information by horizontal gene transfer. Additionally, E. coli is a bacterial species with members of the commensal intestinal microbiota and pathogens associated with numerous types of infections such as intestinal, urinary, and systemic in humans and other animals. T6SS cluster plasticity suggests evolutionarily divergent systems were acquired horizontally. T6SS is a secretion nanomachine that is extended through the bacterial double membrane; from this apparatus, substrates are conveyed straight from the cytoplasm of the bacterium into a target cell or to the extracellular space. This nanomachine consists of three main complexes: proteins in the inner membrane that are T4SS component-like, the baseplate complex, and the tail complex, which are formed by components evolutionarily related to contractile bacteriophage tails. Advances in the T6SS understanding include the functional and structural characterization of at least 13 subunits (so-called core components), which are thought to comprise the minimal apparatus. So far, the main role of T6SS is on bacterial competition by using it to kill neighboring non-immune bacteria for which antibacterial proteins are secreted directly into the periplasm of the bacterial target after cell–cell contact. Interestingly, a few T6SSs have been associated directly to pathogenesis, e.g., roles in biofilm formation and macrophage survival. Here, we focus on the advances on T6SS from the perspective of E. coli pathotypes with emphasis in the secretion apparatus architecture, the mechanisms of pathogenicity of effector proteins, and the events of lateral gene transfer that led to its spread.Instituto de BiotecnologíaFil: Navarro-García, Fernando. Instituto Politécnico Nacional. Centro de Investigación y de Estudios Avanzados. Departamento de Biología Celular; MéxicoFil: Ruiz-Perez, Fernando. University of Virginia School of Medicine. Department of Pediatrics; Estados UnidosFil: Cataldi, Angel Adrian. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Biotecnología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Larzabal, Mariano. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Biotecnología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

Novel Effector Protein EspY3 of Type III Secretion System from Enterohemorrhagic Escherichia coli Is Localized in Actin Pedestals

Enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC) and enteropathogenic Escherichia coli (EPEC) are attaching and effacing (A/E) pathogens, which translocate effector proteins to intestinal enterocytes through a type III secretion system (T3SS). T3SS and most of its effector proteins are encoded in a pathogenicity island called LEE. Recently, new effectors have been located outside the LEE. This study aimed to characterize EspY3, a novel non-LEE encoded T3SS effector of EHEC. EspY3 shares homology with SopD and PipB2 effector proteins of Salmonella’s T3SS-1 and T3SS-2, respectively. The presence of recombinant EspY3 in the supernatant samples demonstrated that EspY3 was secreted by the T3SS of EHEC and EPEC. Through infection assays, we demonstrated the translocation of EspY3 into Caco-2 cells by T3SS of EPEC. The subcellular localization of EspY3 was determined in the pedestal region, where its presence generates a significant increase in the size of the pedestals area. The EspY3 effector induced the elongation of polymerized actin pedestals in infected Caco-2 by EPEC. This study confirmed that EspY3 is part of the repertoire of T3SS effectors of EHEC O157:H7, and that it participates in modeling cellular actin during the infectionInstituto de BiotecnologíaFil: Larzabal, Mariano. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Biotecnología; ArgentinaFil: Marques Da Silva, Wanderson. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Biotecnología; ArgentinaFil: Riviere, Nahuel Agustín. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Biotecnología; ArgentinaFil: Cataldi, Angel Adrian. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Biotecnología; Argentin

The intranasal vaccination of pregnant dams with Intimin and EspB confers protection in neonatal mice from Escherichia coli (EHEC) O157: H7 infection

Enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC) O157:H7 is responsible for intestinal disease and hemolytic uremic syndrome (HUS), a serious systemic complication which particularly affects children. In this study, we evaluated whether passive immunization protects from EHEC O157:H7 colonization and renal damage, by using a weaned BALB/c mouse model of infection. Recombinant proteins EspB and the carboxyl-terminal fragment of 280 amino acids of -intimin (-Int C280) were used in combination with a macrophage-activating lipopeptide-2 (MALP) adjuvant to immunize pregnant mice by the intranasal route. Neonatal mice were allowed to suckle vaccinated or sham-vaccinated dams until weaning when they were challenged by the oral route with a suspension of an E. coli O157:H7 Stx2+ strain. The excretion ofthe inoculated strain was followed for 72 h. All vaccinated dams exhibited elevated serum IgG response against both -Int C280 and EspB. Passive immunization of newborn mice resulted in a significantincrease in serum IgG titers against -Int C280 and a slight increase in EspB-specific antibodies. The neonates from vaccinated dams showed a significant reduction in EHEC O157:H7 colonization 48 h post challenge. In addition, the level of plasma urea concentration, a marker of renal failure, was significantly higher in offsprings of sham-vaccinated mice. In conclusion, vaccination of pregnant dams with -Int C280 and EspB could reduce colonization and systemic toxicity of EHEC O157:H7 in their suckling offsprings.Fil: Rabinovitz, Bettina Carol. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Patobiología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Larzabal, Mariano. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Vilte, Daniel Alejandro. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Patobiología; ArgentinaFil: Cataldi, Ángel Adrián. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Mercado, Elsa Cristina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Patobiología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin