High-level fed-batch fermentative expression of an engineered Staphylococcal protein A based ligand in E. coli: purification and characterization

The major platform for high level recombinant protein production is based on genetically modified microorganisms like Escherichia coli (E. coli) due to its short dividing time, ability to use inexpensive substrates and additionally, its genetics is comparatively simple, well characterized and can be manipulated easily. Here, we investigated the possibilities of finding the best media for high cell density fermentation, by analyzing different media samples, focusing on improving fermentation techniques and recombinant protein production. Initial fermentation of E. coli BL21 DE3:pAV01 in baffled flasks showed that high cell density was achieved when using complex media, Luria–Bertani (LB) and Terrific medium broth (TB) (10 and 14 g/L wet weight, respectively), as compared to mineral media M9, modified minimal medium (MMM) and Riesenberg mineral medium (RM) (7, 8 and 7 g/L, respectively). However, in fed-batch fermentation processes when using MMM after 25 h cultivation, it was possible to yield an optical density (OD600) of 139 corresponding to 172 g/L of wet biomass was produced in a 30 L TV Techfors-S Infors HT fermenter, with a computer controlled nutrient supply (glucose as a carbon source) delivery system, indicating nearly 1.5 times that obtained from TB. Upon purification, a total of 1.65 mg/g of protein per gram cell biomass was obtained and the purified AviPure showed affinity for immunoglobulin. High cell density fed batch fermentation was achieved by selecting the best media and growth conditions, by utilizing a number of fermentation parameters like media, fermentation conditions, chemical concentrations, pO2 level, stirrer speed, pH level and feed media addition. It is possible to reach cell densities higher than shake flasks and stirred tank reactors with the improved oxygen transfer rate and feed.Fil: Kangwa, Martin. Jacobs University; AlemaniaFil: Yelemane, Vikas. Jacobs University; AlemaniaFil: Polat, Ayse Nur. Jacobs University; AlemaniaFil: Gorrepati, Kanaka Durga Devi. Jacobs University; AlemaniaFil: Grasselli, Mariano. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional de Quilmes; ArgentinaFil: Fernández Lahore, Marcelo. Jacobs University; Alemani

Entre historia de vida y trayectorias sociales : Una reflexión desde la Sociología Clínica de Vincent de Gaulejac

La historia de vida ha sido una herramienta metodológica de la sociología desde hace ya largo tiempo. Desde una mirada más amplia ha sabido ganar lugar en el campo de las ciencias sociales, donde los métodos etnográficos son compartidos por diferentes disciplinas. Esa legitimidad de la aproximación biográfica se sustenta sin dudas en el hecho de que permite rebasar cierto número de callejones sin salida a los que se enfrenta reiteradamente la producción de conocimiento en las ciencias sociales: la oposición individuo/sociedad; la necesidad de escapar a la norma estadística; la dialéctica entre lo universal y lo singular; el reconocer en el saber individual un valor sociológico, lo cual tiende a constituir al “objeto” (los sujetos) en coparticipantes de la investigación social, aunque no sea en términos de igualdad sino que el vínculo incluya relaciones de poder. En esa línea, la ponencia procura explorar críticamente la propuesta teórico-metodológica de la llamada Sociología Clínica, disciplina que ha estado enconstrucción desde fines de los '70 con sede principalmente en Francia. Actualmente se ha convertido en una corriente reconocida dentro del campo de la sociología, reuniendo investigadores/as de unos quince países diferentes, entre los que se incluyen algunos de América Latina.Facultad de Humanidades y Ciencias de la Educació

High capacity cryogel-type adsorbents for protein purification

Cryogel bodies were modified to obtain epoxy groups by graft-copolymerization using both chemical and gamma irradiation initiation techniques. The free epoxy adsorbents were reacted further to introduce diethylaminoethanol (DEAE) functionalities. The resulting weak anion-exchange cryogel adsorbents showed dynamic binding capacities of ca. 27 ± 3 mg/mL, which was significantly higher than previously reported for this type of adsorbent material. Gamma irradiated grafting initiation showed a 4-fold higher capacity for proteins than chemical grafting initiation procedures. The phosphate capacity for these DEAE cryogels was 119 mmol/L and also showed similar column efficiency as compared to commercial adsorbents. The large pores in the cryogel structure ensure convective transport of the molecules to active binding sites located on the polymer-grafted surface of cryogels. However, as cryogels have relatively large pores (10–100 μm), the BET area available for surface activation is low, and consequently, the capacity of the cryogels is relatively low for biomolecules, especially when compared to commercial beaded adsorbents. Nevertheless, we have shown that gamma ray mediated surface grafting of cryogel matrices greatly enhance their functional and adsorptive properties.Fil: Singh, Naveen Kumar. Universitat Bremen. School of Enigineerring and Science Jacobs; AlemaniaFil: Dsouza, Roy N.. Universitat Bremen. School of Enigineerring and Science Jacobs; AlemaniaFil: Grasselli, Mariano. Universidad Nacional de Quilmes. Departamento de Ciencia y Tecnología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Fernández Lahore, Marcelo. Universitat Bremen. School of Enigineerring and Science Jacobs; Alemani

Modelado de un reactor tubular de lipasas inmovilizadas para la producción de glicerol y ácidos grasos a partir de aceites

Advances in the design of a bioreactor in the fats and oils industry have permitted the hydrolysis of triglycerides in mild conditions and improved productivity while avoiding the formation of unwanted byproducts. The present work develops a mathematical model that describes the hydrolytic activity of a tubular reactor with immobilized lipases for the production of glycerol and fatty acids from the oil trade. Runge Kutta’s numerical method of high order has been applied, considering that there is no accumulation of the substratum in the surface of the membrane, where the enzyme is. At the same time, different equations based on the kinetic model of Michaelis Mentens and the Ping-Pong bi-bi mechanism were examined. Experimental data in discontinuous systems are the basis for the development of the quantitative mathematical model that was used to simulate the process computationally. The obtained results allow for optimizing both the operative variables and the economic aspects of industrial processes.Los avances en el diseño de biorreactores en la industria de grasas y aceites permiten realizar la hidrólisis de triglicéridos en condiciones suaves, mejorando la productividad y evitando la formación de subproductos indeseables. En el presente trabajo se desarrolla un modelo matemático que describe la actividad hidrolítica de un reactor tubular con lipasas inmovilizadas para la producción de ácidos grasos a partir de aceites comerciales. Se aplico el método numérico de Runge Kutta de alto orden, considerando que no hay acumulación de sustrato en la superficie de la membrana, donde se encuentra la enzima. Además se analizaron distintas ecuaciones de velocidad de reacción basadas en la cinética de Michaelis-Menten y en un mecanismo de ping-pong bi-bi. Los datos experimentales en sistemas discontinuos forman la base del desarrollo del modelo matemático, empleado para simular el proceso computacionalmente. Los resultados obtenidos permitirían optimizar las variables operativas y los aspectos económicos del proceso industrial

Modeling of an immobilized lipase tubular reactor for the production of glycerol and fatty acids from oils

Los avances en el diseño de biorreactores en la industria de grasas y aceites permiten realizar la hidrólisis de triglicéridos en condiciones suaves, mejorando la productividad y evitando la formación de subproductos indeseables. En el presente trabajo se desarrolla un modelo matemático que describe la actividad hidrolítica de un reactor tubular con lipasas inmovilizadas para la producción de ácidos grasos a partir de aceites comerciales. Se aplico el método numérico de Runge Kutta de alto orden, considerando que no hay acumulación de sustrato en la superficie de la membrana, donde se encuentra la enzima. Además se analizaron distintas ecuaciones de velocidad de reacción basadas en la cinética de Michaelis-Menten y en un mecanismo de ping-pong bi-bi. Los datos experimentales en sistemas discontinuos forman la base del desarrollo del modelo matemático, empleado para simular el proceso computacionalmente. Los resultados obtenidos permitirían optimizar las variables operativas y los aspectos económicos del proceso industrial.Advances in the design of a bioreactor in the fats and oils industry have permitted the hydrolysis of triglycerides in mild conditions and improved productivity while avoiding the formation of unwanted byproducts. The present work develops a mathematical model that describes the hydrolytic activity of a tubular reactor with immobilized lipases for the production of glycerol and fatty acids from the oil trade. Runge Kutta's numerical method of high order has been applied, considering that there is no accumulation of the substratum in the surface of the membrane, where the enzyme is. At the same time, different equations based on the kinetic model of Michaelis Mentens and the Ping-Pong bi-bi mechanism were examined. Experimental data in discontinuous systems are the basis for the development of the quantitative mathematical model that was used to simulate the process computationally. The obtained results allow for optimizing both the operative variables and the economic aspects of industrial processes.Fil: Oddone, Por Sebastián. Universidad Argentina de la Empresa; ArgentinaFil: Grasselli, Mariano. Universidad Nacional de Quilmes; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Cuellas, Anahi. Universidad Nacional de Quilmes; Argentin

Composite cellulose fibre for affinity chromatography application

Affinity chromatographic supports is nowadays one of the most used and expensive consumable material for protein purification at the laboratory and industrial scale. The introduction of cost-effective materials is an important issue to address to spread the usefulness of this technology. Cotton fibres are a highly available natural material with excellent mechanical and structural properties which can be used for this propose. Nevertheless, fibre insolubility and low chemical reactivity are the major drawbacks to use this material for protein chromatography.In this work, a composite material prepared from polymethacrylate/cellulose fibres were used for the preparation of chromatographic materials containing immobilised proteins as adsorptive ligands. A green fluorescent protein and a protein A simil ligand containing cysteine in the terminal tags were immobilised onto the fibres by the epoxy-thiol chemistry. Buffer salt, pH, reaction time and pre-swelling procedure were optimised. Materials were characterised by fluorescence and electron microscopes, in addition to the binding capacity of the adsorbent materials.Fil: Carbajal, Maria Laura. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB | Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB | Universidad Nacional de La Plata. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB; ArgentinaFil: Kikot, Pamela Alejandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB | Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB | Universidad Nacional de La Plata. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB; ArgentinaFil: Torchio, Gabriela María. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB | Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB | Universidad Nacional de La Plata. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB; ArgentinaFil: Fernandez Lahore, M.. Universitat Bremen. School of Enigineerring and Science Jacobs; AlemaniaFil: Grasselli, Mariano. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB | Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB | Universidad Nacional de La Plata. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB; Argentin

Plasmon properties of multilayer albumin/gold hybrid nanoparticles

Materials Research Express PAPER Plasmon properties of multilayer albumin/gold hybrid nanoparticles C Y Flores1, Luis J Mendoza H2, E Achilli1, D C Schinca2,3 and M Grasselli1 Published 1 February 2019 • © 2019 IOP Publishing Ltd Materials Research Express, Volume 6, Number 5 Citation C Y Flores et al 2019 Mater. Res. Express 6 055005 130 Total downloads Article has an altmetric score of 1 Turn on MathJax Get permission to re-use this article Share this article Share this content via email Share on Facebook Share on Twitter Share on Google+ Share on Mendeley Article information Abstract Hybrid nanoparticles are mainly based on inorganic (metal, semiconductors) and organic (proteins, polymers) compounds. The inorganic compounds are metallic nanostructures with unique features such as localized surface plasmon resonance (LSPR) bands in the UV–visible-near IR spectral range. The LSPR frequency is extremely sensitive to small changes in the physicochemical environment surrounding NPs and is dependent on NP shape and size. Recently, we reported a novel preparation method of hybrid nanoparticles based on an Albumin multilayer coating of AuNPs, stabilized by radiation-induced crosslinking processes. With this method, we obtained core/shell nanoparticles composed by Au and albumins. The aim of this paper is the description of the plasmon properties of AuNPs and other core/shell gold/protein NPs prepared. UV–vis spectra were used to detect changes of the plasmon extinction of hybrid nanoparticles, in accordance to the Mie Theory. DLS and TEM measures were used to correlate the results obtained. UV–vis spectroscopy proved to be key to characterize protein layer through two parameters: thickness and refractive index. In conclusion, UV–vis spectroscopy can be a very useful quality control methodology to prepare hybrid Au/protein NPs.Fil: Flores, Constanza Yanel. Universidad Nacional de Quilmes; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Universidad Nacional de La Plata. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular; ArgentinaFil: Mendoza Herrera, Luis Joaquin. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Centro de Investigaciones Ópticas. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Centro de Investigaciones Ópticas. Universidad Nacional de La Plata. Centro de Investigaciones Ópticas; ArgentinaFil: Achilli, Estefanía Edith. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Universidad Nacional de La Plata. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular; Argentina. Universidad Nacional de Quilmes; ArgentinaFil: Schinca, Daniel Carlos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Centro de Investigaciones Ópticas. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Centro de Investigaciones Ópticas. Universidad Nacional de La Plata. Centro de Investigaciones Ópticas; Argentina. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ingeniería; ArgentinaFil: Grasselli, Mariano. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Universidad Nacional de La Plata. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular; Argentina. Universidad Nacional de Quilmes; Argentin

Biohybrid nanocontructs with specific cell targeting for future applications in in vivo diagnosis and cancer treatment

En los últimos años, distintos enfoques basados en la Nanotecnología comenzaron a tener relevancia en la búsqueda de nuevas estrategias para el diagnóstico y terapia de distintas enfermedades, entre ellas el cáncer. En este contexto, las nanopartículas de oro (AuNPs) son los nanomateriales inorgánicos más atractivos desde el punto de vista de salud humana. Su superficie puede ser modificada fácilmente para su utilización in vivo, mediante el agregado de señales de direccionamiento a células específicas o recubrimientos biocompatibles, para formar nanoconstructos multifuncionales. En este artículo, se propone el recubrimiento de las AuNPs con una multicapa de Albúmina, para formar nanoconstructos biohíbridos (bioHNPs), donde las proteínas más superficiales conservan la conformación nativa. Este recubrimiento, estabilizado mediante entrecruzamiento radio-inducido, dota a las NPs de una “identidad biológica” que facilita su interacción con los medios biológicos. Además, se revisan el Efecto Corona y la importancia de la realización de estudios experimentales en condiciones que simulen las que ocurren in vivo. Finalmente, se definen los factores estructurales necesarios para el diseño de nanoconstructos con aplicaciones en Nanomedicina, que permitan minimizar el Efecto Corona y maximizar la interacción con las células específicas y con el entorno.In recent years, different approaches based on Nanotechnology began to have relevance in the search for new strategies for the diagnosis and therapy of different diseases, including cancer. In this context, gold nanoparticles (AuNPs) are the most attractive inorganic nanomaterials from a human health point of view. Its surface can be easily modified for use in vivo, by adding targeting signals to specific cells or biocompatible coatings, to form multifunctional nanoconstructs. In this article, we propose the coating of the AuNPs with a multilayer of Albumin, to form biohybrid nanoconstructs (bioHNPs), where the most superficial proteins retain the native conformation. This coating, stabilized by radio-induced crosslinking, endows NPs with a "biological identity" that facilitates their interaction with biological media. In addition, the Corona Effect and the importance of conducting experimental studies under conditions simulating those that occur in vivo are reviewed. Finally, the necessary structural factors are defined for the design of nanoconstructs with applications in Nanomedicine, which allow minimizing the Corona Effect and maximizing interaction with specific cells and the environment.Fil: Achilli, Estefanía Edith. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB | Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB | Universidad Nacional de La Plata. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB; ArgentinaFil: Flores, Constanza Yanel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB | Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB | Universidad Nacional de La Plata. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB; Argentina. Universidad Nacional Arturo Jauretche; ArgentinaFil: Grasselli, Mariano. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB | Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB | Universidad Nacional de La Plata. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB; Argentin

Enhanced gold nanoparticle-tumor cell recognition by albumin multilayer coating

Background: In a biological environment, nanoparticles are rapidly coated with serum proteins, which affects the NPs transport through biological medium, cellular uptake and response, all of which can impair therapeutic efficiency. Reduction of non-specific adsorption of proteins is mandatory to overcome this drawback. Aim: We propose to use albumin to prepare a multilayer coating of NPs to reduce the non-specific protein interactions in biological media. Materials & methods: Biohybrid NPs (bioHNPs) prepared by coating gold NPs with a multilayer of albumin and finally decorated with Bombesin-related peptides (BD-bioHNPs). Results: BioHNPs/biological media interaction was characterized by physicochemical and biological techniques under near-physiological conditions. A significant reduction of the Corona effect and enhanced in vitro uptake to PC-3 cells was demonstrated for BD-bioHNPs. Conclusion: This methodology to prepare decorated bioHNPs allows the preparation of ‘stealth’ NPs with improved cell targeting and the ability to avoid non-specific interactions with the biological media.Fil: Achilli, Estefanía Edith. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB | Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB | Universidad Nacional de La Plata. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB; Argentina. Universidad Nacional de Quilmes. Departamento de Ciencia y Tecnología; ArgentinaFil: Flores, Constanza Yanel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB | Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB | Universidad Nacional de La Plata. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB; Argentina. Universidad Nacional de Quilmes. Departamento de Ciencia y Tecnología; Argentina. Universidad Nacional Arturo Jauretche; ArgentinaFil: Temprana, Carlos Facundo. Universidad Nacional de Quilmes. Departamento de Ciencia y Tecnología. Laboratorio de Virología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; ArgentinaFil: Alonso, Silvia del Valle. Universidad Nacional de Quilmes. Departamento de Ciencia y Tecnología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB | Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB | Universidad Nacional de La Plata. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB; ArgentinaFil: Radrizzani Helguera, Martin. Universidad Nacional de San Martín. Escuela de Ciencia y Tecnología. Laboratorio de Neuroingeniería; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; ArgentinaFil: Grasselli, Mariano. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB | Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB | Universidad Nacional de La Plata. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB; Argentina. Universidad Nacional de Quilmes. Departamento de Ciencia y Tecnología; Argentin

An arsenic fluorescent compound as a novel probe to study arsenic-binding proteins

Arsenic-binding proteins are under continuous research. Their identification and the elucidation of arsenic/ protein interaction mechanisms are important because the biological effects of these complexes may be related not only to arsenic but also to the arsenic/protein structure. Although many proteins bearing a CXXC motif have been found to bind arsenic in vivo, new tools are necessary to identify new arsenic targets and allow research on protein/ arsenic complexes. In this work, we analyzed the performance of the fluorescent compound APAO-FITC (synthesized from p-aminophenylarsenoxide, APAO, and fluorescein isothiocyanate, FITC) in arsenic/protein binding assays using thioredoxin 1 (Trx) as an arsenic-binding protein model. The Trx-APAO-FITC complex was studied through different spectroscopic techniques involving UV-Vis, fluorescence, atomic absorption, infrared and circular dichroism. Our results show that APAO-FITC binds efficiently and specifically to the Trx binding site, labeling the protein fluorescently, without altering its structure and activity. In summary, we were able to study a protein/ arsenic complex model, using APAO-FITC as a labeling probe. The use of APAO-FITC in the identification of different protein and cell targets, as well as in in vivo biodistribution studies, conformational studies of arsenicbinding proteins, and studies for the design of drug delivery systems for arsenic anti-cancer therapies, is highly promising.Fil: Femia, Lis. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe. Instituto de Desarrollo Tecnológico para la Industria Química. Universidad Nacional del Litoral. Instituto de Desarrollo Tecnológico para la Industria Química; ArgentinaFil: Temprana, Carlos Facundo. Universidad Nacional de Quilmes; ArgentinaFil: Santos, Javier. Universidad de Buenos Aires; ArgentinaFil: Carbajal, Maria Laura. Universidad Nacional de Quilmes; ArgentinaFil: Amor, María Silvia. Universidad Nacional de Quilmes; ArgentinaFil: Grasselli, Mariano. Universidad Nacional de Quilmes; ArgentinaFil: Alonso, Silvia del Valle. Universidad Nacional de Quilmes; Argentin